आधुनिक शैक्षिक अध्ययन की वास्तविक समस्याएं। शैक्षिक अनुसंधान की वास्तविक समस्याएं
उत्प्रेरित प्रतिक्रियाओं के प्रकार से, सभी ज्ञात एंजाइम छह वर्गों में विभाजित होते हैं:
1. ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया उत्प्रेरित, ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया।
2. हाइड्रोलैस, विभिन्न कनेक्शनों में इंट्रामोल्युलर बॉन्ड के हाइड्रोलाइटिक क्लेवाज की प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करना।
3. हस्तांतरण, रासायनिक समूह के इंटरमोल्यूलर या इंट्रामोलिक्यूलर हस्तांतरण की प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करना और रासायनिक बंधन में संपन्न ऊर्जा के एक साथ हस्तांतरण के साथ अवशेष।
4. लिगास (सिंथेटेस), 2 अणु परिसर की प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करते हैं, एटीपी या अन्य समान त्रिभुज के फ़िरोफॉस्फेट बांड के विभाजन के साथ संयुग्मन करते हैं।
5. लायस गैरगोलिटिक क्लेवाज की प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करता है या डबल बॉन्ड के लिए कार्बनिक यौगिकों के विभिन्न रासायनिक समूहों को संलग्न करता है।
6, आइसोमरेज, कार्बनिक यौगिकों के रूपांतरण की प्रतिक्रियाओं को उनके आइसोमरों में उत्प्रेरित करता है।
ऑक्सीडोरक्टेज और हाइड्रोलास मिट्टी में व्यापक हैं, जो मिट्टी बायोडायनामिक्स में बहुत महत्वपूर्ण हैं।
केटालेज़
(एच 2 ओ 2: एच 2 ओ 2-ऑक्सीडोरक्टेज)
कैटलस पानी और आण्विक ऑक्सीजन बनाने के लिए हाइड्रोजन पेरोक्साइड के अपघटन की प्रतिक्रिया उत्प्रेरित करता है:
एच 2 ओ 2 + एन 2 ओ 2 ओ 2 + एन 2 ओ।
हाइड्रोजन पेरोक्साइड को जीवित जीवों को सांस लेने की प्रक्रिया में बनाया गया है और कार्बनिक पदार्थों के ऑक्सीकरण की विभिन्न जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं के परिणामस्वरूप। हाइड्रोजन पेरोक्साइड की विषाक्तता इसकी उच्च प्रतिक्रियाशीलता से निर्धारित की जाती है, जो एक एकल ऑक्सीजन, * ओ 2 दिखाती है। इसकी उच्च प्रतिक्रियाशीलता अनियंत्रित ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं की ओर ले जाती है। उत्प्रेरक की भूमिका यह है कि यह हाइड्रोजन पेरोक्साइड के जीवों के लिए जहरीले को नष्ट कर देता है।
सूक्ष्मजीवों और पौधों सहित जीवित जीवों की कोशिकाओं में उत्प्रेरक व्यापक है। उच्च उत्प्रेरक गतिविधि भी मिट्टी दिखायी जाती है।
मिट्टी की उत्प्रेरक गतिविधि को निर्धारित करने के तरीके हाइड्रोजन पेरोक्साइड की क्षय दर को मापने पर आधारित होते हैं जब यह ऑक्सीजन जारी (गैसोमेट्रिक विधियों) या इनक्रेडिटेड पेरोक्साइड की मात्रा से मिट्टी के साथ बातचीत करता है, जो परमैंगनेटेटिमेट्रिक टाइट्रेशन या कलरिमेट्रिक द्वारा निर्धारित किया जाता है चित्रित परिसरों के गठन के साथ विधि।
अनुसंधान ई.वी. डेंटेंको और के.एस. केसवी स्थापित किया गया है कि नमूने संग्रहीत करते समय, सभी एंजाइमों से कैटलस की गतिविधि सबसे बड़ी सीमा तक कम हो जाती है, इसलिए इसकी परिभाषा नमूनाकरण के बाद पहले सप्ताह में की जानी चाहिए।
विधि ऐश गला
विश्लेषण का कोर्स। कैटलस की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए, दो कनेक्टेड रबड़ नली बुरेरेट्स से डिवाइस का उपयोग किया जाता है, जो पानी से भरे हुए होते हैं और इसके स्तर को संतुलित करते हैं। बरी में एक निश्चित जल स्तर को बनाए रखना डिवाइस में तापमान संतुलन की उपलब्धि को इंगित करता है। मिट्टी की जैकेट (1 ग्राम) बौने फ्लास्क के अलगाव में से एक को लाया जाता है। 3% हाइड्रोजन विकृति समाधान का 5 मिलीलीटर फ्लास्क के एक और अलगाव में डाला जाता है। फ्लास्क को एक गिलास ट्यूब के साथ एक रबड़ ट्यूब के साथ कसकर बंद कर दिया जाता है, जो एक रबर नली का उपयोग करके मापने वाले ब्यूरेट से जुड़ा हुआ है।
अनुभव 20 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर किया जाता है, क्योंकि एक अलग तापमान पर प्रतिक्रिया दर अलग-अलग होगी कि यह परिणामों को विकृत करता है। सिद्धांत रूप में, तापमान महत्वपूर्ण नहीं है, और पेरोक्साइड, यह है कि यह 20 0 सी होना चाहिए। यदि हवा का तापमान 20 0 एस (गर्मियों में) से काफी अधिक है, तो इसे बेसमेंट में या अलग में विश्लेषण करने की सिफारिश की जाती है ठंडा कमरा। ऐसे मामलों में अनुशंसित, 20 डिग्री सेल्सियस के तापमान के साथ पानी के स्नान का उपयोग प्रभावी ढंग से प्रभावी ढंग से है।
अनुभव की शुरुआत स्टॉपवॉच या सैंडव्हील में इस समय नोट की जाती है जब पेरोक्साइड मिट्टी के साथ मिश्रित होता है, और पोत की सामग्री शेक होती है। मिश्रण को अंधा करना पूरे अनुभव में उत्पादित किया जाता है, अपने हाथों से फ्लास्क को छूने की कोशिश नहीं कर रहा है, इसे प्लग के लिए पकड़ रहा है। जारी ऑक्सीजन ब्यूरेट से पानी को विस्थापित करता है, जिसका स्तर 1 और 2 मिनट के बाद नोट किया जाता है। पेरोक्साइड अपघटन की प्रतिक्रिया के साथ 3 मिनट के लिए हर मिनट ऑक्सीजन की मात्रा निर्धारित करने की सिफारिश केवल विश्लेषण पर खर्च किए गए समय को बढ़ाती है।
यह तकनीक एक शोधकर्ता को प्रति दिन 100 से अधिक नमूने काटाक की गतिविधि का विश्लेषण करने की अनुमति देती है। 5-6 जहाजों का उपयोग करके पहले का विश्लेषण करना सुविधाजनक है। साथ ही, एक व्यक्ति सीधे विश्लेषण में लगे हुए हैं और ब्यूरेट के स्तर पर नज़र रखता है, और दूसरा समय का अनुसरण करता है, डेटा लिखता है और जहाजों को धोता है।
नियंत्रण शुष्क गर्मी (180 डिग्री सेल्सियस) मिट्टी के साथ निर्जलित के रूप में कार्य करता है। कुछ मिट्टी, यौगिकों और खनिजों में नसबंदी के बाद भी पेरोक्साइड के अकार्बनिक कैटलिसिस अपघटन की उच्च गतिविधि होती है - कुल गतिविधि का 30-50% तक।
कैटलस गतिविधि 2 के मिलीलीटर में व्यक्त की जाती है, जो मिट्टी के 1 ग्राम के 1 मिनट में जारी की जाती है।
अभिकर्मक: 3 प्रतिशत समाधान एच 2 ओ 2। सावेदरा की एकाग्रता को समय-समय पर सत्यापित किया जाता है, कार्य समाधान विश्लेषण से पहले तुरंत तैयार किया जाता है। 100 मिलीलीटर वजन वाले 1 ग्राम 2 ओ 2 की क्षमता वाले आयामी फ्लास्क में विश्लेषणात्मक तराजू पर एक निर्जन एकाग्रता स्थापित करने के लिए, वॉल्यूम को लेबल और ढेर में समायोजित किया जाता है। 250 मिलीलीटर (3 पुनरावृत्ति (3 पुनरावृत्ति) के शंकु फ्लास्क में परिणामी समाधान के 20 मिलीलीटर, आसुत पानी के 50 मिलीलीटर और 20 प्रतिशत एच 2 के 2 मिलीलीटर जोड़े गए हैं। फिर 0.1 एन का शीर्षक। समाधान kmno 4। केएमएनओ 4 समाधान का 1 मिलीलीटर 0.0017008 जी एच 2 ओ 2 से मेल खाता है। डेराइड्रोल की एकाग्रता की स्थापना के बाद, आसुत पानी के साथ पतला करने के द्वारा 3 प्रतिशत समाधान तैयार किया जाता है। सीएमएनओ 4 टिटर समाधान फिक्सनल से तैयार किया गया है और टिटर स्थापित करने के लिए कई दिनों का सामना करना पड़ा है।
डिहाइड्रोजनेज
(सब्सट्रेट: ओवर (एफ) -ऑक्सीडोरक्टेस)।
Dehydrogenase कार्बनिक पदार्थों के dehydrogenation द्वारा ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया उत्प्रेरित। वे निम्नलिखित योजना को पारित करते हैं:
ए + वीएन 2 में एक 2 +
मिट्टी में, डीहाइड्रोजनीकरण सब्सट्रेट गैर विशिष्ट कार्बनिक यौगिक (कार्बोहाइड्रेट, एमिनो एसिड, अल्कोहल, वसा, फिनोल, आदि) और विशिष्ट (आर्द्र पदार्थ) हो सकता है। ऑक्सीडेटिव प्रतिक्रिया प्रतिक्रियाओं में dehydrogenases हाइड्रोजन वाहक के रूप में कार्य करता है और दो समूहों में अलग हो जाते हैं: 1) एरोबिक, mobilized हाइड्रोजन ऑक्सीजन हवा संचारित; 2) एनारोबिक, जो अन्य स्वीकारकों, एंजाइमों को हाइड्रोजन संचारित करता है।
डीहाइड्रोजनेज का पता लगाने का मुख्य तरीका कम रेडॉक्स संभावित प्रकार के मेथिलेन नीले रंग के संकेतकों की बहाली है।
मिट्टी के डीहाइड्रोजनेज की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए, टेट्राज़ोलिया के रंगहीन लवण (2,3,5-त्रिफेनिलटेट्राज़ोलियम क्लोराइड - टीटीएक्स) का उपयोग हाइड्रोजन के रूप में किया जाता है, जो फॉर्मासेनोव (त्रिपेनिलफॉर्मसन - टीएफएफ) के लाल यौगिकों को बहाल कर रहे हैं।
विश्लेषण का कोर्स। फनल के माध्यम से तैयार मिट्टी के निलंबन (1 ग्राम) को अच्छी तरह से ट्यूब के नीचे 12-20 मिलीलीटर की क्षमता और अच्छी तरह मिश्रित की क्षमता के साथ रखा जाता है। डीहाइड्रोजनीकरण सब्सट्रेट समाधान (ग्लूकोज) के 0.1 मीटर के 1 मिलीलीटर और टीटीएक्स के ताजा तैयार 1 प्रतिशत समाधान के 1 मिलीलीटर जोड़ें। टेस्ट ट्यूबों को एनारोस्टैट या वैक्यूम उत्तेजक में रखा जाता है। परिभाषा एनारोबिक स्थितियों में की जाती है, जिसके लिए हवा को 10-12 मिमी एचजी के संकल्प पर खाली कर दिया जाता है। कला। 2-3 मिनट के लिए और 30 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में डाल दिया। सब्सट्रेट्स के साथ मिट्टी से ऊष्मायन करते समय, एंटीसेप्टिक के रूप में टोल्यून जोड़ा नहीं जाता है, क्योंकि; यह दृढ़ता से dehydrogenase के प्रभाव को रोकता है। नियंत्रण निर्जलित मिट्टी (180 डिग्री सेल्सियस पर 3 घंटे के लिए) और मिट्टी के बिना सब्सट्रेट की सेवा करें। फ्लास्क में ऊष्मायन के बाद एथिल अल्कोहल या एसीटोन के 10 मिलीलीटर जोड़ें, 5 मिनट हिलाएं। टीएफएफ के परिणामस्वरूप चित्रित समाधान फ़िल्टर किया गया है और रंगीन है। एक बहुत ही तीव्र रंग के साथ, समाधान 2-3 बार शराब (एसीटोन) के साथ पतला हो जाता है। 500-600 के तरंग दैर्ध्य के साथ 10 मिमी क्यूवेट्स और एक प्रकाश फ़िल्टर का उपयोग किया। एमजी में फॉर्मासन की मात्रा की गणना एक मानक वक्र (0.1 मिलीग्राम प्रति 1 मिलीलीटर) के अनुसार की जाती है। डीहाइड्रोजेनस गतिविधि 24 घंटों में मिट्टी के 10 ग्राम पर एमजी टीटीएफ में व्यक्त की जाती है। 8% तक त्रुटि परिभाषा।
अभिकर्मकों:
1) 2,3,5-Triphenylterazolia क्लोराइड का 1 प्रतिशत समाधान;
2) 0.1 एम ग्लूकोज समाधान (1000 मिलीलीटर आसुत पानी में 15 ग्राम ग्लूकोज भंग हो जाता है);
3) एथिल अल्कोहल या एसीटोन;
4) मानक पैमाने के लिए Triphenyl फार्मासन। एक अंशांकन वक्र संकलित करने के लिए, एक फॉर्मासन एकाग्रता के साथ एथिल अल्कोहल, एसीटोन या टोल्यून में कई समाधान तैयार किए जाते हैं (ऊपर वर्णित अनुसार 1 मिलीलीटर में 0.01 से 0.1 मिलीग्राम फॉर्मासन) और फोटोकॉलोरिमेट्रेट।
फॉर्मासन की अनुपस्थिति में, यह टीटी सोडियम हाइड्रोसुलफाइट (ग्लूकोज की उपस्थिति में अमोनियम सल्फाइट, जिंक पाउडर) की बहाली से प्राप्त किया जाता है। टीटीएक्स 1 मिलीग्राम / मिलीलीटर के समाधान की प्रारंभिक एकाग्रता। क्रिस्टल सोडियम हाइड्रोसल्फाइट को लैंसेट की नोक पर टीटीएक्स के शुरुआती समाधान के 2 मिलीलीटर में जोड़ा जाता है। फॉर्मासन की वापसी को 10 मिलीलीटर टोल्यून द्वारा हटा दिया जाता है। टोल्यून की इस मात्रा में 2 मिलीग्राम फॉर्मासन (0.2 मिलीग्राम / मिलीलीटर) शामिल हैं। आगे प्रजनन पैमाने के लिए काम करने के समाधान तैयार करें।
Inveraz
(β-fruitfuranosidase, चीनी)
Invertase कार्बोहाइड्रेस है, यह sucrose, raffinosis, ghighentose, आदि में β-fructufuranosidase बंधन पर कार्य करता है। सबसे सक्रिय यह एंजाइम हाइड्रोलाइज sucrose sugars को कम करने के गठन के साथ - ग्लूकोज और फ्रूटोज़:
inveraz
12 एन 22 ओ 11 + एन 2 ओ सी 6 एन 12 ओ 6 + सी 6 एच 12 ओ 6
फ्रक्टोज ग्लाइकोस सुक्रोज
इनवर्टेज प्रकृति में व्यापक है और लगभग सभी प्रकार की मिट्टी में पाया जाता है। माउंटेन मेडो मिट्टी में बहुत अधिक गतिविधि Invertase पता चला। इनवर्टेज की गतिविधि स्पष्ट रूप से आर्द्रता और मिट्टी की प्रजनन क्षमता की सामग्री से संबंधित होती है। उनकी प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए उर्वरकों के प्रभाव का अध्ययन करते समय यह अनुशंसा की जाती है। मिट्टी के इनवर्टर की गतिविधि को निर्धारित करने के तरीके बेरान के अनुसार शर्करा पुनर्जन्म के मात्रात्मक लेखांकन पर आधारित हैं और एंजाइम एक्सपोजर से पहले और बाद में सुक्रोज समाधान के ऑप्टिकल गुणों को बदलने के लिए हैं। गतिविधि के एक व्यापक आयाम और सब्सट्रेट की एकाग्रता के साथ एंजाइम का अध्ययन करते समय पहली विधि लागू की जा सकती है। पोलरीमेट्रिक और फोटोकोलोरिमेट्रिक विधियां उच्च सामग्री वाले मिट्टी के लिए शर्करा की एकाग्रता और अस्वीकार्य की मांग कर रही हैं कार्बनिकजहां पेंट किए गए समाधान प्राप्त किए जाते हैं; इसलिए, ये विधियां मिट्टी के अध्ययन तक ही सीमित हैं।
काम का उद्देश्य चार एंजाइम सिस्टम में सड़क से अलग हटाने पर मिट्टी की जैविक गतिविधि निर्धारित करना है: डीहाइड्रोजेनस, कैटलस, इनवर्टेज, यूरेज़।
मूल अवधारणा
मृदा-एंजाइमोलॉजिकल विधियों को मिट्टी में एंजाइमों की गैर-मात्रात्मक सामग्री को निर्धारित करना संभव हो जाता है, लेकिन एंजाइमों की गतिविधि जो मुख्य रूप से मिट्टी कोलाइड्स की सतह पर और आंशिक रूप से मिट्टी के समाधान में आंशिक रूप से adsorbed (immobilized) राज्य में हैं।
मिट्टी एंजाइमों की गतिविधि को निर्धारित करने का सिद्धांत प्रतिक्रिया के दौरान संसाधित प्रतिक्रिया प्रतिक्रियाओं या परिणामी प्रतिक्रिया उत्पाद के तापमान की इष्टतम स्थितियों, माध्यम के पीएच और सबस्ट्रेट्स की एकाग्रता के तहत आधारित प्रतिक्रिया प्रतिक्रियाओं की संख्या पर आधारित होता है।
ऑक्सीडोरक्टेज की कक्षा से संबंधित एंजाइम ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करते हैं जो जीवित जीवों, साथ ही साथ मिट्टी में जैव रासायनिक प्रक्रियाओं में अग्रणी भूमिका निभाते हैं। केटा और डीहाइड्रोजेनेस जैसे सबसे आम ऑक्सीडो-रेडक्टे, जिनकी गतिविधि मिट्टी की उत्पत्ति का एक महत्वपूर्ण संकेतक है।
कार्बनिक पदार्थों की विभिन्न जैव रासायनिक ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं के परिणामस्वरूप जीवित जीवों की श्वसन की प्रक्रिया में गठित सेल पेरोक्साइड पेरोक्साइड के लिए जहरीले पानी और आणविक ऑक्सीजन का उत्प्रेरक करें।
उत्प्रेरक की गतिविधि मिट्टी के साथ अपनी बातचीत के दौरान हाइड्रोजन पेरोक्साइड के अपघटन की दर को मापने के आधार पर चयनित ऑक्सीजन की मात्रा से गैसोमेट्रिक विधि द्वारा निर्धारित की जाती है।
Dehydrogenase - enzymes जो श्वसन प्रक्रिया में भाग लेते हैं, ऑक्सीकरण सबस्ट्रेट्स से हाइड्रोजन को चिकनी। कुछ डीहाइड्रोजेन को सीधे आणविक ऑक्सीजन पर हाइड्रोजन में स्थानांतरित किया जाता है, अन्य - किसी भी स्वीकार्य, जैसे कि हेनियंस, मेथिलिन ब्लू।
एक हाइड्रोजन स्वीकार्य के रूप में डीहाइड्रोजेनेज की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए, टेट्राज़ोलिया के रंगहीन लवण का उपयोग किया जाता है (2,3,5-ट्रिपहेनिलटेट्रज़ोलियम क्लोराइड (टीटीएक्स), जो फॉर्मासन (त्रिपेनिल फॉर्मासन (टीएफएफ) के लाल यौगिकों को बहाल कर रहे हैं।
हाइड्रोलैज़ विभिन्न जटिल कार्बनिक यौगिकों की हाइड्रोलिसिस प्रतिक्रियाओं को पूरा करते हैं, विभिन्न कनेक्शनों पर कार्य करते हैं: इस वर्ग में जटिल एस्टर, ग्लूकोसाइड एमाइड, पेप्टाइड इत्यादि शामिल हैं इनवर्टर एंजाइम, यूरेज़ इत्यादि, जिनकी गतिविधि मिट्टी जैविक गतिविधि का एक महत्वपूर्ण संकेतक है और मानवजनात्मक प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।।
इनवर्टेज सुक्रोज, रैफिनिन, स्टाखियोहिया में पी-फ्रक्टुफुरानोसिडल बॉन्ड पर कार्य करता है और ग्लूकोज और फ्रक्टोज की समान मात्रा में सुक्रोज विभाजन का उत्पादन करता है।
इनवर्टेज की गतिविधि का फोटोकोलोरिमेट्रिक निर्धारण sucrose के विभाजन के दौरान गठित शर्करा बहाल करने के लेखांकन पर आधारित है।
कार्बनिक नाइट्रोजन यौगिकों का अपघटन बाह्य कोशिकीय एंजाइमों की प्रत्यक्ष भागीदारी के साथ किया जाता है। Ureazna गतिविधि के दौरान गठित Ammoniac पौधे पोषण के स्रोत के रूप में कार्य करता है।
यूराज़ यूरिया हाइड्रोलिसिस उत्प्रेरित करता है। परम हाइड्रोलिसिस उत्पाद अमोनिया और कार्बन डाइऑक्साइड हैं। यूरिया पौधे अवशेषों, खाद और नाइट्रोजन उर्वरक के रूप में मिट्टी में गिरता है; यह नाइट्रोजेनस कार्बनिक यौगिकों - प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को परिवर्तित करने की प्रक्रिया में मध्यवर्ती उत्पाद के रूप में मिट्टी में भी बनाया जाता है।
उत्प्रेरक गतिविधि का निर्धारण
उपकरण और अभिकर्मकों:
गैसोमेट्री के लिए सिस्टम (चित्र 8); 10% समाधान एच 2 ओ 2; Saco er।
अंजीर। 8 - मिट्टी के नमूने में उत्प्रेरक गतिविधि के गैसोमेट्रिक निर्धारण के लिए स्थापना:
1 - फ्लास्क, 2 - ब्यूरेट, 3 - एडाप्टर, 4 - पानी के साथ नाशपाती
कार्य करने के लिए प्रक्रिया
1. Sifted मिट्टी का पक्ष 1 जी 100 सेमी 3 पर फ्लास्क में जोड़ें, Casso 3 के 0.5 ग्राम जोड़ें।
2. नीचे एक चिमटी के साथ सावधानी से रखें, 1.7 सेमी 3 10% हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान के साथ एक छोटा कप।
3. मृदा नमूना MOOF 4 सेमी 3 आसुत पानी।
4. फ्लास्क एक क्लैंप से लैस एक टीई के माध्यम से एक मोटी दीवार वाली रबड़ से जुड़े ट्यूब के साथ रबर ट्यूब को कसकर बंद कर देता है। बुरीट को एक नाशपाती के साथ संवाद किया जाता है। ब्यूरेट और नाशपाती पानी से भरे हुए हैं। उनमें पानी का स्तर संतुलित है और नाशपाती को एक निश्चित ऊंचाई पर तय किया जाता है।
5. उस समय स्टॉपवॉच में नोट करने के लिए अनुभव की शुरुआत उस समय जब हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ संवहनी उलटा हो जाता है, और इसके बाद, फ्लास्क की सामग्री को हिलाएं। मिश्रण को अंधा करना सीधे फ्लास्क के नीचे छूए बिना अनुभव के हर समय जारी रखा जाना चाहिए। उत्सर्जित ऑक्सीजन ब्यूरेट से पानी को विस्थापित करता है, जिसका स्तर नोट किया जाता है।
6. हाइलाइट किए गए आणविक ऑक्सीजन की मात्रा 18-20 0 सी के तापमान पर 1 मिनट के लिए की जाती है।
7. कैटलस गतिविधि ऑक्सीजन की मात्रा (सेमी 3) में व्यक्त की जाती है जो मिट्टी के 1 ग्राम प्रति मिनट से हाइलाइट की जाती है। त्रुटि परिभाषा 5% तक।
8. सभी मिट्टी के नमूनों के साथ समान प्रक्रियाएं।
9. सारणी। 15 उत्प्रेरक की मिट्टी की संतृप्ति की डिग्री का आकलन करें .
टेबल 15 ‑ मिट्टी एंजाइमों के संवर्धन की डिग्री का आकलन करने के लिए पैमाने
| मिट्टी के समृद्धि की डिग्री | कैटलस, 2 सेमी 3 / जी प्रति 1 मिनट | 24 घंटे के लिए 10 ग्राम के लिए dehydrogenase, एमजी टीएफएफ | 24 घंटे में Invertase, एमजी ग्लूकोज प्रति 1 ग्राम | यूरेज़ा, एमजी एनएच 4, 24 घंटे के लिए 10 ग्राम | Phospotase, एमजी पी 2 ओ 3 प्रति 10 ग्राम प्रति 1 एच |
| बहुत गरीब | < 1 | <1 | <5 | <3 | <0,5 |
| गरीब | 1-3 | 1-3 | 5-15 | 3-10 | 0,5-1,5 |
| औसत | 3-10 | 3-10 | 15-50 | 10-30 | 1,5-5,0 |
| धनी | 10-30 | 10-30 | 50-150 | 30-100 | 5-15 |
| बहुत अमीर | >30 | >30 | > 150 | > 100 | > 15 |
Dehydroginase गतिविधि की परिभाषा
डिवाइस, व्यंजन, अभिकर्मकों:
फोटोकॉलोरिमीटर; ग्राफ पेपर; 0.1 एम ग्लूकोज समाधान; 2,3,5-त्रिगुणिनेरेज़ोलिया क्लोराइड (टीटीएक्स) का 1% समाधान; सासो 3; इथेनॉल; Triphenylformazan (TFF)।
कार्य करने के लिए प्रक्रिया
1. टेस्ट ट्यूब में प्रत्येक नमूने के 1 ग्राम के लिए वायु-सूखी मिट्टी रखें, 10 मिलीग्राम (स्पुतुला की नोक पर) एसएसीओ 3, 1 सेमी 3 0.1 एम ग्लूकोज समाधान और 1 सेमी 3 1% टीटीएक्स समाधान जोड़ें; प्रत्येक टेस्ट ट्यूब की सामग्री पूरी तरह मिश्रित होती है।
2. टेस्ट ट्यूबों को एक एनारोस्टैट में रखें और 10-12 मिमी एचजी के संकल्प पर वायु पंप को पंप करें। कला। 2-3 मिनट के लिए। फिर 24 घंटे के लिए 30 0 एस पर सेते हैं।
3. ऊष्मायन समय समाप्त होने के बाद, ट्यूबों की सामग्री 3-4 में 25 सेमी 3 एथिल अल्कोहल प्राप्त करने के लिए निकाली जाती है। ऐसा करने के लिए, एक छोटी मात्रा में शराब की एक छोटी मात्रा में जोड़ा जाता है और लाल रंग प्रकट होने तक 5 मिनट तक हिलाएं। एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करने के लिए खड़े हो जाओ और योजक तरल। टेस्ट ट्यूब में अल्कोहल का अगला हिस्सा जोड़ें।
4. फॉर्मासन का परिणामी चित्रित समाधान एक नीले प्रकाश फ़िल्टर (500-600 एनएम) के साथ एफईसी पर रंगीन है।
5. मानक वक्र के अनुसार गणना करने के लिए मिलीग्राम में फॉर्मासन की मात्रा। ऐसा करने के लिए, 1 सेमी 3 में 0.1 मिलीग्राम की एकाग्रता पर एथिल अल्कोहल में फॉर्मासन का एक मानक समाधान तैयार करें। एक मानक समाधान (लगभग 5 अंक) के dilutions द्वारा तैयार करने के लिए वक्र संकलित करने के लिए काम करने के समाधान। सिस्टम में मिलीमीटर पेपर पर निर्माण करने के लिए मानक वक्र: 500-600 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर ऑप्टिकल घनत्व - शराब में फॉर्मासन की एकाग्रता।
6. dehydrogenase गतिविधि की गणना करें। तालिका। 15 मिट्टी dehydrogenase की संतृप्ति की डिग्री का मूल्यांकन किया।
डाटा प्रासेसिंग
सूजन द्वारा प्रति दिन मिट्टी के 10 ग्राम पर टीएफएफ के मिलीग्राम (एक्स) की गतिविधि को व्यक्त किया जाता है:
जहां वी फिल्ट्रेट की कुल मात्रा है, 25 सेमी 3;
10 - अनुमानित मिट्टी वजन गुणांक, जी;
वी सब्सट्रेट और अभिकर्मक वॉल्यूम का उत्पाद है, 1 सेमी 3;
ए टफ की मात्रा है, कैलिब्रेशन वक्र, एमजी / सेमी 3 के अनुसार प्राप्त की जाती है। परिभाषा त्रुटि - 8% तक।
उलटा गतिविधि का निर्धारण
डिवाइस, व्यंजन, अभिकर्मकों:
फोटोकॉलोरिमीटर; सुक्रोज का 5% समाधान; एसीटेट बफर (पीएच 4.7); टोल्यून; फेलिंग समाधान: ए - 40 ग्राम कुसो 4 × 5 एन 2 ओ पानी में भंग कर दिया जाता है और 1 डीएम 3 तक समायोजित होता है, एक पेपर फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, बी - एक फेरोननेटिक नमक के 200 ग्राम (सी 4 एच 4 ओ 6 केएनए × 4 एन 2 ओ ) आसुत पानी में भंग हो जाता है 150 ग्राम कॉन जोड़ें और 1 डीएम 3 में समायोजित करें
कार्य करने के लिए प्रक्रिया
1. 50 सेमी 3 की क्षमता वाले फ्लास्क में प्रत्येक मिट्टी के नमूने के 5 ग्राम खेलते हैं, 10 सेमी 3 5% सुक्रोज समाधान, 10 मिलीलीटर एसीटेट बफर (पीएच 4.7) और टोल्यून की 5-6 बूंदें और 5-6 बूंदें जोड़ें।
2. कॉर्क को बंद कर देता है, शेक, 24 घंटे प्रति 30 0 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में डालता है और समय-समय पर उन्हें हिला देता है।
3. ऊष्मायन के बाद, फ्लास्क की सामग्री को 25 सेमी 3 तक आयामी फ्लास्क में फ़िल्टर किया जाता है। लेबल में लाओ।
4. फिल्टर्स से लेकर 6 सेमी 3 तक बड़ी ट्यूबों तक, अलगाव नमक के 3 सेमी 3 और तांबा सल्फर के 3 सेमी 3 समाधान जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं और 10 मिनट के लिए पानी के स्नान पर उबाल लें। यह एक लाल precipitate बाहर निकलता है।
5. पानी में एक समाधान के साथ कूल ट्यूब, सामग्री को बड़ी ट्यूबों में फ़िल्टर किया जाता है। पारदर्शी छिद्र 630 एनएम, एक क्यूवेट चौड़ाई 1 सेमी के तरंग दैर्ध्य के साथ एक प्रकाश फ़िल्टर का उपयोग करके एफईसी पर रंगीन है।
6. अंशांकन वक्र प्राप्त करने के लिए, एक मानक समाधान तैयार करें: 1 सेमी 3 में 6 मिलीग्राम ग्लूकोज। समाधान की एक श्रृंखला तैयार करने के लिए प्रजनन। फोटोकॉलोरिमेट्रेटेट और एक वक्र का निर्माण: ऑप्टिकल घनत्व - 1 सेमी 3 में ग्लूकोज एकाग्रता।
7. गतिविधि और तालिका की गणना करें। 15 जांच के तहत मिट्टी की संतृप्ति की डिग्री का अनुमान लगाएं।
डाटा प्रासेसिंग
इनवर्टेज (एक्स) की गतिविधि सूत्र द्वारा 24 घंटे में मिट्टी के 1 ग्राम से ग्लूकोज के मिलीग्राम में व्यक्त की जाती है:
जहां ऑप्टिकल घनत्व, एमजी / सेमी 3 के अंशांकन वक्र के अनुसार प्राप्त ग्लूकोज की मात्रा है;
एम - मिट्टी छिपाने, 5 ग्राम;
V कुल छिद्र मात्रा, 25 सेमी 3 है;
v विश्लेषण के लिए लिया गया छिद्र की मात्रा, 6 सेमी 3 है।
परिभाषा त्रुटि - 5% तक।
मिट्टी यूरेज़ का निर्धारण
डिवाइस, व्यंजन, अभिकर्मकों:
फोटोकॉलोरिमीटर; फॉस्फेट बफर में 2% यूरिया समाधान (पीएच \u003d 6.7); फेरोनेटिक नमक का 50% समाधान; 50% समाधान सीसीएल 3 COOH (Trichloroacetic एसिड); केएस 1 का 1% समाधान; नेस्टर अभिकर्मक; मानक समाधान एनएच 4 सी 1।
कार्य करने के लिए प्रक्रिया
1. वायु-सूखी मिट्टी के 5 ग्राम में, 100 सेमी 3 की क्षमता वाले फ्लास्क में डाल दिया गया, फॉस्फेट बफर (पीएच 6.7) और टोल्यून के 200 μl में यूरिया समाधान का 20 सेमी 3 2% डालना।
2. फ्लास्क को कसकर बंद कर दिया जाता है और एक थर्मोस्टेट में 4 घंटे के लिए 37 0 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखा जाता है।
3. एक्सपोजर के बाद, ट्राइक्लोरोसेटिक एसिड के 1 सेमी 3 50% समाधान डालें।
4. अवशोषित अमोनिया की मिट्टी से विस्थापित करने के लिए 50 सेमी 3 1 एन जोड़ें। पोटेशियम क्लोराइड समाधान।
5. फ्लास्क फ़िल्टर की सामग्री।
6. 2 सेमी 3 50 सेमी 3 के आयामी फ्लास्क में 2 सेमी 3 फिल्टर जगह, 30 सेमी 3 तक पानी को भंग करने के लिए, फिर गैर-वेतन अभिकर्मक के फेरोननेटिक नमक का 2 सेमी 3 50% और 2 सेमी 3 डालें। लेबल में पानी के साथ फास्टन करने के लिए फ्लास्क, मिश्रण और चित्रित समाधान 400 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर रंगीन है।
8. यूरेज़ की गतिविधि की गणना करें।
9. तालिका। 15 यूरेटा द्वारा अध्ययन की गई मिट्टी की संतृप्ति की डिग्री का अनुमान लगाएं।
डाटा प्रासेसिंग
यूरेस की गतिविधि (एक्स) को सूत्र द्वारा 4 घंटे में मिट्टी के 1 ग्राम प्रति 1 ग्राम के मिलीग्राम में व्यक्त किया जाता है:
V कुल फिल्ट्रेट वॉल्यूम, 50 सेमी 3 है;
एम - सैंडिंग मिट्टी, 5 ग्राम
आत्म-तैयारी के लिए प्रश्न:
1. कैटलस गतिविधि क्या है?
2. उलटा गतिविधि की अघोषिकता दें।
3. ureazny गतिविधि का वर्णन करें।
4. बफर मिश्रण क्या है?
5. मिट्टी एंजाइमों की गतिविधि को निर्धारित करने की विधि का सिद्धांत और सार।
6. मिट्टी के नमूने की विधि।
अनुप्रयोग
तालिका 1 - जीवों की अनुकरणीय सूची - दुखद संकेतक
| जीवों | उदासी |
| नीला बैक्टीरिया: | |
| Sphaerotilus Natans। | आर |
| बेगियातोआ एसपी। | आर |
| थियोथ्रिक्स एसपी। | आर |
| मशरूम: | |
| लेप्टोमिटस लैक्टियस। | α |
| म्यूकोर रेसमोसस। | α |
| Fusarium Aquaectum। | आर |
| समुद्री शैवाल: | |
| नीला हरा: | |
| अनाबाएना फ्लोस एक्वायर। | β |
| माइक्रोक्रिस्टिस एरुगिनोसा। | β |
| Aphanizomenon Flos एक्वा। | β |
| Oscillatorla Tenuis | α |
| डायटोम्स | - |
| साइम्बेला सेसाती। | के बारे में |
| Oomphonema Cevli। | के बारे में |
| मेलोस्टा ग्रैनुलाटा। | β |
| Navicula Angustata। | α |
| Navicula Apiculata। | α |
| सिंघरा एकस | β |
| सिंकरा उलना। | β |
| Nitzschia Palea। | α |
| Evglen: | |
| यूग्लेना एकस | β |
| यूग्लेना विरिडिस। | आर |
| यूग्लेना deses। | α |
| हरा और स्थानान्तरण: | |
| वोल्वॉक्स ग्लोबल। | ओ-β |
| Ankistrodesmus falcatus। | β-α |
| क्रूसिगेन्टा आयताकारिस। | ए-β |
| Scenedesmus Quadricouda। | β |
| Draparnaldia एसपी। | के बारे में |
| Ulothrix Zonata। | के बारे में |
| StlgeoClonium Tenue। | α |
| जानवरों: | |
| अमींस: | |
| Pelornyxa palustris। | आर |
| जीवों | उदासी |
| इन्फुसोरिया: | |
| Colpidium, Campylum | पी |
| Colplldlum Colpoda। | पी |
| यूप्लोट्स Charon। | β |
| Chllodon Cuculululus। | पी |
| ऑपरेशनलिया कोएरेटटाटाटा। | α |
| परमेकियम कौडैटम | α |
| Spirostomum amblguum। | α |
| St.entor Coeruleus। | α |
| Vortlcella Convallalarla | α |
| वोर्टिसेला माइक्रोस्टोमा। | पी |
| Podophrya Fifea। | α |
| Becovants: | |
| केल्कोटिया Longispina (Syn। Notholca Iongispina) | के बारे में |
| केराटेला कोक्लेयर्स। | β |
| केरातेला क्वाडटा। | β |
| Leucane Lunarls (SynoTyla Lunarls) | β |
| रोटरिया रोटेटरिया (SYN। रोटीफर वल्गारिस) | α |
| तेल: | |
| Limnodrilus hofmelsterl | पी |
| टब अगर पूर्व टबलफेक्स | पी |
| स्टाइलारला Lacustris | β |
| क्रस्टेशियन: | |
| Daplmla Magna। | α |
| डेफनला पुलेक्स | α |
| लेप्टोडोरा किंडलि। | के बारे में |
| Eudiaptomus Gracilis। | ओ |
| एस्टाकस फ्लुवियाटिलिस | ओ |
| कीड़े: | |
| Caenls Macrura। | ओ |
| हेपटेगनिया कोरुलाना | β |
| ChiRonomus Plumosus। | आर |
| मछली: | |
| ब्रीम: | β |
| barbel | β |
| ट्राउट | ओ |
| टेंच | β-α |
तालिका 2 - प्रति आवृत्ति 100 क्षेत्रों में जीवों को पुनर्मूल्यांकन करने के लिए आवृत्ति पैमाने
| आवृत्ति मूल्य | माइक्रोबेंटोस | आसक्ति | |
| डेटा गिनती | 100 क्षेत्रों में राशि | ||
| आकार की पहली श्रेणी | |||
| प्रत्येक दूसरे क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं, दृश्य के क्षेत्र में 10 से अधिक नहीं, दृश्य के क्षेत्र में 30 से अधिक नहीं, दृश्य के क्षेत्र में 30 से अधिक नहीं, दृश्य में 60 से अधिक दृश्य में 60 से अधिक नहीं | प्रत्येक द्वितीय क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं, देखने के क्षेत्र में 2 से अधिक नहीं, 10 से अधिक नहीं, 250 से अधिक देखने के क्षेत्र में 250 से अधिक देखने के क्षेत्र में 250 से अधिक नहीं देखने के क्षेत्र में 250 से अधिक नहीं | 1-50 50-200 200-1000 1000-5000 5000-25000 25,000 से अधिक | |
| आकार की दूसरी श्रेणी | |||
| प्रत्येक 20 वें क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं दृश्य के प्रत्येक 5 वें क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं, दृश्य के क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं, 6 से अधिक की दृष्टि में 6 से अधिक की दृष्टि में 6 से अधिक नहीं | दृष्टि के 20 क्षेत्रों में 2 से अधिक नहीं, 5 से अधिक क्षेत्र में 1 से अधिक नहीं, दृश्य में 25 से अधिक नहीं देखने के क्षेत्र में 5 से अधिक नहीं, 25 से अधिक दृष्टि में 25 से अधिक नहीं | 1-5 6-20 21-100 100-500 500-2500 2500 से अधिक | |
| तीसरी आकार श्रेणी | |||
| 1 दृश्य के 100 क्षेत्रों में 1 दृश्य के 50 क्षेत्रों में दृष्टि के 10 क्षेत्रों में 1 से अधिक नहीं दृष्टि के 4 क्षेत्रों में 1 से अधिक नहीं दृष्टि में 1 से अधिक 2 फ़ील्ड देखने के लगभग 1 दृश्य में 1 से अधिक नहीं | 1 दृश्य के 100 क्षेत्रों में 1 दृश्य के 50 क्षेत्रों में 1 में से 10 में से 1 में 1 से अधिक नहीं 1 बी 2 दृष्टि के क्षेत्र में 2 से अधिक दृश्य में 2 से अधिक नहीं | 3-10 10-50 50-200 200 से अधिक |
आवेदन
तालिका 13. आवृत्ति मान के लिए मात्रात्मक लेखांकन के परिणामों का पुनर्मूल्यांकन
आवेदन
नमूनाकरण की गणना का उदाहरण
नमूना: शहर के नीचे नदी। तिथि ________________ समुदाय: उपवास।
| जीवों | एस | एच | स्फार |
| यूग्लेना विरिडिस। | पी | ||
| Scenedesmus acuminatus। | β | ||
| Sprogyra Sygmoidea। | β | ||
| क्लॉथ्रियम एसरोसम | α | ||
| क्लॉथियम मोनिलिएरियम | β | ||
| Cyclotella Menengiana। | α | ||
| Cymbella Vesiculosa। | β | ||
| डायटोमा vulgare। | β | ||
| मेलोसिरा इटालिका। | β | ||
| मेलोसिरा भिन्नताएं। | β | ||
| Navicula Cryptocephala। | α | ||
| Navicula Viridua। | α | ||
| नित्ज़शिया एक्कुलरिस | β | ||
| Nitzschia Palea। | α | ||
| सुररेला ओवाटा। | β | ||
| चिलिडोनेला कुकुलता। | α | ||
| कोलपोडा कुकुलस। | α | ||
| Sh \u003d 41। | S (sh) \u003d 103 |
Sh p \u003d 3; Sh α \u003d 15; Sh β \u003d 23।
S \u003d s (sh) / (sh) -103 / 41 \u003d 2.51 /
त्रुटि गणना:
सांख्यिकीय विश्वसनीयता 95% के लिए सटीकता अंतराल।
एस \u003d एस ± टी 0.05 एस एस \u003d 2.51 ± 2.02 × 0.1;
इसी तरह की जानकारी।
