До роду Salmonella належать збудник черевного тифу S. typhi, паратифів - S. paratyphi A, S. schottmuelleri і збудники харчових токсикоінфекцій, які отримали назву сальмонеллезов.

Морфологія і тинкторіальних властивості. S. typhi, S. paratyphi A, S. schottmuelleri - короткі палички з закругленими кінцями, мають перитрихиально джгутики, грамнегативні.

Культивування і ферментативні властивості.На диференційно-діагностичних середовищах (Ендо, Левіна) утворюють прозорі безбарвні колонії. Сальмонели мають сахаролитической властивостями: S. typhi ферментує глюкозу, мальтозу, маніт до кислоти, S. paratyphi і S. schottmuelleri - ті. ж цукру, але до кислоти і газу, що служить диференційно-діагностичною ознакою. При розкладанні білків S. typhi і S. schottmuelleri утворюється сірководень. Желатин НЕ розріджують.

Антигенна структура і токсінообразованіе сальмонел.Сальмонели містять О-антиген-ліпополісахарідние-протеїновий комплекс, ідентичний ендотоксину, Н-антиген і К-антиген - поверхневий, оболончатий, капсульний. Ідентифікація сальмонел проводиться за антигенними властивостями, згідно з класифікацією, запропонованою Кауфманом і Уайтом і побудованої за таким принципом: все сальмонели по спільності О-антигенів розділені на групи, позначені прописними буквами латинського алфавіту (А, В, С, D, Е і т. Д .); всередині кожної О-групи сальмонели поділяються на серологічні варіанти на підставі різної будови Н-антигенів, позначені рядкової буквою латинського алфавіту і цифрами. В Н-антигени виділяють дві фази: першу - специфічну і другий - не специфічну. При ідентифікації сальмонел використовуються діагностичні агглютинирующие адсорбовані сироватки.

Складна антигенна структура S. typhi включає О, Н і Vi-антигени, але такі повноцінні в антигенному відношенні бактерії виділяються тільки в розпал захворювання, а в період реконвалесценції і при пересіву в лабораторних умовах Vi-антиген втрачається.

Резистентність.Сальмонели досить стійкі в зовнішньому середовищі. Залежно від умов (температура, вологість, інсоляція та ін.) Вони можуть зберігатися до року. Дезінфікуючі речовини викликають загибель сальмонел протягом декількох хвилин, нагрівання до 60 ° С - через 10-15 хв.

Патогенність для тварин.Черевним тифом і паратифом хворіють тільки люди.

Клінічні симптоми захворювання характеризуються поступовим підвищенням температури, загальним нездужанням, яке переходить в стан глибокої інтоксикації організму, за що захворювання і отримало назву typhus. Цей стан зумовлено дією ендотоксину, який в розпал захворювання виділяється у великих кількостях в результаті масової загибелі мікробів, чому сприяють утворюються антитіла.

Бактерії з кров'ю потрапляють в печінку, селезінку, кістковий мозок, лімфатичні вузли тонкої кишки, де розмножуються, збагачуючи кров збудником. Настає фаза паренхиматозной дифузії. Сальмонели, накопичуючись в жовчному міхурі в масовій кількості, вдруге потрапляють в тонку кишку і розмножуються в лімфатичних утвореннях, які запалюються, некротизируются, виразкуються, що може привести до руйнування стінки кишечника, тобто перфорації - одному з найтяжчих ускладнень черевного тифу. Особливо сприятливі умови для розмноження тифозні бактерії знаходять в жовчному міхурі, де вони затримуються найдовше і, виділяючись в кишечник, посилюють патологічні його поразки. Видільної-алергічна фаза виділення мікробів - складає наступний етап патогенезу. Виділяються бактерії з організму не тільки з випорожненнями, але і з сечею, молоком матері-годувальниці. Видільна стадія переходить в стадію одужання, що супроводжується зростанням титру специфічних антитіл.

Імунітет.Вродженого імунітету до інфекцій, що викликаються збудниками черевного тифу і паратифів, не існує. Перенесене захворювання залишає міцний імунітет і випадки повторного захворювання рідкісні. Однак можливі рецидиви, а перехворіли на черевний тиф стають хронічними бактеріоносіями.

Лабораторна діагностика сальмонел.При діагностиці враховуються епідеміологічні дані і клінічні симптоми. З першого дня захворювання необхідно досліджувати кров. Метод гемокультури є вирішальним і раннім методом. Найкращою елективної живильним середовищем служить середа з жовчю, що нейтралізує антитіла, бактерицидні властивості сироватки крові. Можна виділяти культуру збудника з кісткового мозку, сечі, розеол, але ці методи застосовуються рідко. У період реконвалесценції виділяють збудника з випорожнень. Виділені культури ідентифікуються по біохімічними та антигенними властивостями.

При визначенні виду сальмонел спочатку ставиться реакція аглютинації з полівалентною сироваткою, що дає можливість визначити приналежність виділеної культури до роду сальмонел, потім визначається група за допомогою окремих групових адсорбованих сироваток, а потім і вид сальмонел - в реакції аглютинації з монореценторнимі специфічними Н-сироватками.

Дослідження сироватки хворих може проводитися в перші дні захворювання виявленням неповних антитіл за допомогою реакції Кумбса і з 4-5-го дня - повних антитіл в реакції Відаля, яку ставлять повторно через кілька днів з метою визначення наростання титру антитіл. Однак поряд з перевагами постановки реакції Відаля (простота реакції, отримання швидкої відповіді, можливість ретроспективного діагнозу) метод має і недоліки: не є раннім, антитіла можуть бути і у перехворів (анамнестична реакція) і у щепленого ( «щеплення Відаль»). Потрібно враховувати і той факт, що Н-антитіла зберігаються довго, а О-антитіла зникають з крові перехворів досить швидко.

З метою виявлення антитіл в сироватках крові хворих на черевний тиф застосовується реакція непрямої гемаглютинації (РНГА).

Велику труднощі представляє виявлення бактеріоносіїв. Бактеріологічні дослідження, що носять масовий характер при періодичних обстеженнях працівників харчових підприємств і дитячих установ, займають багато часу і не завжди результативні, так як навіть від заздалегідь відомого носія важко буває виділити мікроб. В даний час для виявлення носія широко використовують серологічний метод-реакцію Vi-гемаглютинації з сироваткою носія. Vi-антиген по хімічній природі є полисахаридом, його витягують в чистому вигляді і адсорбують на поверхні еритроцитів 0 групи крові людини. Сироватка носія викликає реакцію гемаглютинації при взаємодії з Vi-еритроцитарних діагностикумів. У носія реакція позитивна в невеликих розведеннях. Виявлені реакцією Vi-гемаглютинації носії обстежуються бактеріологічними методами (виділення культури з випорожнень, дуоденального вмісту).

При необхідності для епідеміологічної розшифровки захворювань проводиться диференціювання виділених культур за допомогою Vi-бактеріофагів, що володіють суворої тіпоспеціфічностью. При фаготіпірованію використовується 78 типів Vi-бактеріофагів, за допомогою яких виявляється така ж кількість фаготип цих бактерій. Метод фаготипирования дає можливість встановлювати або виключати передбачувані джерела інфекції, простежувати епідеміологічні зв'язку, відрізняти місцеві випадки від «привізних» і спорадичні захворювання від епідемічних.

Епідеміологія сальмонел.Джерелом і резервуаром інфекції є тільки людина: хворий або носій. Механізм передачі фекально-оральний, шляхи поширення - при безпосередньому контакті, з інфікованою їжею (молоко), водою, зараженою стічними водами. При порівняно низькій захворюваності в даний час основне значення має контактно-побутовий шлях передачі - через забруднені руки, посуд, білизну і т. П. Захворюваність характеризується літньо-осінньої сезонністю.

Специфічне лікування і профілактика.Для лікування хворих застосовуються антибіотики широкого спектру дії, група тетрацикліну, левоміцетин. Антибіотикотерапія, однак, не попереджає рецидиви і тривалий бактеріоносійство. Радянські й іноземні незалежні дослідники, вивчаючи механізм дії антибіотиків в клінічних умовах, звернули увагу на те, що їх ефективність тісно пов'язана зі ступенем розвитку специфічного імунітету. Тому, крім антибіотиків, рекомендують проводити лікування засобами, які специфічно стимулюють иммуногенез (корпускулярна вакцина, парціальні антигени). При комплексної іммуноантібіотікотерапіі (антибіотики і окремо моновакцина і Vi-антиген) у хворих на черевний тиф значно скорочується частота рецидивів, відсутня формування бактеріоносійства.

З метою профілактики застосовуються брюшнотифозная спиртова вакцина, збагачена Vi-антигеном (за епідемічними показаннями). Для імунізації військовослужбовців використовується хімічна сорбированная тифозних-паратифозної-правцевим вакцина (TABle), coдержащая виділені з черевнотифозних, паратіфозних А і В бактерій комплексні антигени і очищений правцевий анатоксин.

У мясопептонний бульйон додають 3-4% агару, доводять pH до 7,6, розливають в склянки по 100 мл і стерилізують, як зазвичай, в автоклаві, зберігаючи в такому вигляді до моменту приготування фуксінсульфітного агару. Готують фуксінсульфітний агар в день використання. Заготовляти про запас і зберігати цю середу не можна, так як вона швидко червоніє.

До 100 мл розплавленого і охолодженого до 70 ° С 3-4% -ного мясопептонного агару стерильно додають 1 г лактози, попередньо розчинивши і прокип'ятивши її в 5 мл стерильної води. Крім того, сюди ж додають 0,5 мл профільтрованого насиченого спиртового розчину основного фуксину і 2,5 мл свіжоприготованого 10% -ного розчину серністокіслого натру. Серністокіслий натр (Na2SO3) в кількості 0,5 г розчиняють в 5 мл води і перед вживанням стерилізують кип'ятінням.

Можна зробити й трохи інакше. Фуксин і сульфіт натрію спочатку змішують в пробірці: до 0,5 мл розчину фуксину додають при струшуванні розчин сульфіту натрію до тих пір, поки рідина в пробірці не стане безбарвною або злегка рожевою. І в розплавлений і кілька охолоджений агар вливають вже цю суміш. Колбу з середовищем ретельно струшують для перемішування і середу розливають в чашки Петрі. Після застигання середовища її підсушують в термостаті при 37 ° С протягом 30 хв.

У гарячому стані середовище повинне бути слабо-рожевого кольору, а після охолодження абсолютно безбарвної. Знебарвлення фуксину в середовищі Ендо викликає введений серністокіслий натр.

середа Сіммонса

При ідентифікації бактерій групи коли (щоб відрізнити грунтовий вид Escherichia coli aёrogenes від фекального виду Escherichia coli commune) застосовується цитратна середу Сіммонса. В 1 л дистильованої води розчиняють 1,5 г фосфорнокислого натру (або однозамещенного фосфорнокислого амонію), 1 г однозамещенного фосфорнокислого калію (КН2РO4), 0,2 г сірчанокислого магнію, 2,5-3 г кристалічного лімоннокіслого натрію, встановлюють pH 7,0 -7,2, додають 2% агару і, розплавивши середу, розливають її в колби по 100 мл. Стерилізують в автоклаві 15 хв при 120 ° С.

Перед вживанням в середу необхідно додати індикатор. Можна використовувати або бромтимолблау, або фенолрот. Індикатор додають до 100 мл розплавленої середовища. Бромтимолблау беруть в кількості 1 мл спиртового 1,5% -ного розчину. Середа набуває оливково-зелений колір. Фенолрот додається в кількості 2 мл 1,5% -ного спиртового розчину. Середовище забарвлюється в жовтий колір. Після додавання індикатора середу розливають в пробірки і стерилізують в автоклаві при 120 ° С протягом 15 хв.

Строкатий ряд вуглеводів, або середовища Гіссен

Для визначення ферментативної здатності мікроорганізмів користуються середовищами Гисса. Залежно від наявності в мікробної клітці того чи іншого ферменту вона здатна розкладати будь-якої один з вуглеводів з утворенням певних продуктів розкладання, тому до складу середовища вводиться будь-якої вуглевод: лактоза, глюкоза, маніт, сахароза та ін. Набір таких середовищ отримав назва «строкатого ряду вуглеводів».

Спочатку готують пептонную воду: на 1 л дистильованої води беруть 10 г пептона і 5 г хімічно чистої кухонної солі, кип'ятять до розчинення пептона, фільтрують через паперовий фільтр (фільтрат повинен бути абсолютно прозорим) і встановлюють pH 7,2-7,4. Потім до 100 мл пептонною води додають по 0,5 г одного з застосовуваних вуглеводів і по 1 мл індикатора Андреде.

До складу індикатора Андреде входить: 0,5 г кислого фуксину, 16 мл 1 н. розчину їдкого натру (NaOH) і 100 мл дистильованої води. При необхідності індикатор можна готувати заздалегідь і зберігати його в темному місці, попередньо про-кип'ятити при 100 ° С протягом 15 хв. Після введення індикатора середовища розливають по пробірках з поплавками і стерилізують в кип'ятильник Коха тричі по 30 хв. Після закінчення стерилізації поплавки повиннi бути занурені в середу, в іншому випадку пробірка не може бути використана. Середовища Гіссен з реактивом Андреде мають солом'яно-жовтий колір без рожевого відтінку. При розвитку в середовищі мікроорганізмів останні, розкладаючи цукор з утворенням кислоти, викликають зміна реакції. А так як в кислому середовищі індикатор Андреде червоніє, то це і є свідченням, що мікроорганізм використовує даний цукор для своєї життєдіяльності. Відсутність почервоніння, навпаки, свідчить про відсутність в ферментативном комплексі досліджуваного мікроба ферменту, що розкладає наявний в середовищі вуглевод.

Ферментативна активність мікроорганізмів багата і різноманітна. Вона дозволяє встановити видову і типову приналежність, визначити біологічні варіанти мікроба. Існує цілий ряд ферментів, за активністю яких можна визначити ступінь патогенності мікроорганізму.

Для визначення ферментативної (біохімічної) активності мікробів використовують диференційно - діагностичні середовища.

До диференційно - діагностичних середовищ відносяться середовища Гіссен, на яких вивчається сахаролитической активність мікрооганізмов.

Середовища Гіссен можуть бути рідкими і щільними. Основу середовищ Гісса складають м'ясо - пептони бульйон (МПБ) і м'ясо - пептони агар (МПА). До складу цих середовищ входить вуглевод і індикатор. Існують два ряди середовищ Гісса - великий (що включає 27 найменувань) і малий. Малий ряд середовищ Гісса включає мальтозу, глюкозу, сахарозу, манить і лактозу. Вихідна установка рН середовища - слабо лужна (7,2 - 7,4).

Якщо при культивуванні бактерій відбувається розщеплення субстрату до кислоти, то рН середовища змінюється в кислу сторону і при цьому відбувається зміна кольору індикатора. Зміна кольору живильного середовища і є показником наявності у даного мікроба ферменту, що розщеплює конкретний субстрат до кислоти. І в рідкої, і в щільному живильному середовищі про наявність ферменту, що розщеплює субстрат до кислоти, судять по зміні кольору індикатора.

Освіта газу встановлюють по скупченню бульбашок газу в товщі агару і по розриву агару (якщо середовища Гіса щільні) або по скупченню бульбашок газу в поплавці (якщо середовища рідкі). Поплавок - вузька скляна трубочка з запаяним кінцем, зверненим вгору, яку поміщають в пробірку з середовищем перед стерилізацією середовища.

Різниця в наборі ферментів, що розщеплюють вуглеводи, може бути використано при диференціюванні родинних мікробів, наприклад, сальмонел, шигел, ешерихій. Так, на середовищах Ендо, Левіна, Плоскірєва, до складу яких входить лактоза і індикатор (аніліновий барвник), колонії кишкової палички будуть пофарбовані у фіолетовий колір (на середовищі Левіна) або в бузковий (на середовищах Ендо і Плоскірєва). Колонії сальмонел і шигел на цих же середовищах будуть безбарвними.

Це обумовлено тим, що кишкова паличка, маючи фермент лактази, розщеплює лактозу, в результаті чого утворюється кислота, рН середовища зміщується в кислу сторону і відбувається прояв кольору індикатора - анілінового барвника. Особи кишкової палички добре фарбуються аніліновими барвником, а сукупність забарвлених особин представляє забарвлену колонію.

Шигели і сальмонели не мають ферменту лактази і не розщеплюють лактозу, рН середовища не змінюється, індикатор не проявляється, мікробні клітини не фарбуються. Тому колонії сальмонел і шигел на середовищах Ендо і Плоскірєва будуть безбарвними.

Про наявність ферменту амілази можна судити, посіявши культуру на середу, що містить крохмаль. Якщо є фермент, який розщеплює крохмаль, то при додаванні в пробірку краплі розчину Люголя, посиніння середовища не відбудеться. Нерозщеплений крохмаль при додаванні розчину Люголя дає синє забарвлення.

Протеолітичні властивості (тобто здатність розщеплювати білки, поліпептиди та ін.) Вивчають на середовищах з желатином, молоком, сироваткою, пептоном. При зростанні на желатиновой середовищі мікробів, ферментують желатин, середа розріджується. Характер розрідження, що викликається різними мікробами, різний.

При розщепленні пептоном можуть виділятися індол, скатол, сірководень, аміак. Їх освіту встановлюють за допомогою індикаторів. Наприклад, фільтрувальну папір заздалегідь просочують розчином індикатора, висушують, нарізають вузькими смужками довжиною 5 - 6 см і після посіву культури на МПБ поміщають під пробку (між пробкою і стінкою пробірки). Після інкубації в термостаті враховую результат. Аміак викликає посиніння лакмусового папірця; при виділенні сірководню на папірці, просоченої 20% розчином ацетату свинцю і бікарбонату натрію, відбувається утворення сульфату свинцю - солі чорного кольору, і індикаторний папірець чорніє. Індол сприяє почервоніння папірці, просоченої розчином щавлевої кислоти.

Гемолітичні властивості мікробів можна виявити, використовуючи кров'яний агар. Якщо мікроб має фермент гемолізини, то навколо колоній цього мікроба будуть зони лізису еритроцитів (в цих зонах агар буде безбарвним).

Фермент лецитиназу виявляють при посіві культури на желточно - сольовий агар. Навколо колонії мікроба, що продукує цей фермент, утворюється матовий ореол.

Слід пам'ятати про те, що наявність різних ферментів визначає біохімічні властивості мікробів.

Культуральні та біохімічні властивості збудників харчових токсикоінфекцій

Ферментний склад будь-якого мікроорганізму є досить постійною ознакою в нормальних умовах, тобто різні види мікроорганізмів розрізняються по набору ферментів.

Вивчення ферментного складу має важливе значення для диференціювання та ідентифікації різних мікроорганізмів.

Спеціальні методи забарвлення бактерій.Найбільшого поширення знайшли методи Грама і Ціля-Нільсена.

диференціюючі методизазвичай застосовують для фарбування різних морфологічних структур.

Капсули.Для забарвлення капсул бактерій застосовують методи Хісса, Лейфсона і Антоні; останній метод найбільш простий і включає забарвлення кристалічним фіолетовим з подальшою обробкою 20% водним розчином CuSO4.

Джгутики.Для забарвлення джгутиків запропоновані методи Леффлера, Бейлі, Грея і ін. Для цих методів характерні початкове протруювання препарату і подальша забарвлення (частіше карболовий фуксин Ціля).

Спори.Забарвлення суперечка бактерій проводять після попередньої обробки їх стінок. Найбільш простий метод Пєшкова, що включає кип'ятіння мазка з синькою Леффлера на предметному склі з подальшою докраской нейтральним червоним. Спори фарбуються в синій колір, вегетативні клітини - в рожевий.

методи культивування

При вирощуванні бактерій застосовують стаціонарний спосіб, спосіб глибинного культивування з аерацією і метод проточних поживних середовищ. У відповідності зі способами вирощування бактеріальні культури поділяють на періодичні (при стаціонарному та глибинному культивуванні) і безперервні (при проточному культивуванні).

Стаціонарний спосіб- найбільш часто використовуваний на практиці. Склад середовищ залишається постійним, з ними не проводять ніяких додаткових маніпуляцій.

Спосіб глибинного культивуваннязастосовують при промисловому вирощуванні бактеріальної біомаси, для чого використовують спеціальні котли-реактори. Вони забезпечені системами підтримки температури, подачі в бульйон різних поживних речовин, перемішування біомаси і постійної подачі кисню. Створення аеробних умов по всій товщі середовища сприяє протіканню енергетичних процесів по аеробному шляху, що сприяє максимальній утилізації енергетичного потенціалу глюкози і, отже, максимальному виходу біомаси.

Метод проточних середовищ(Промисловий спосіб культивування) дозволяє постійно підтримувати бактеріальну культуру в експоненційної фазі росту, що досягають постійним внесенням поживних речовин і видаленням певного числа бактеріальних клітин. Перебування бактерій в експоненційної стадії росту забезпечує максимальний вихід різних БАР (вітаміни, антибіотики та ін.).

Первинна ідентифікація бактерій

У більшості випадків вивчення особливостей росту для первинної ідентифікації збудників проводять на колоніях, які виросли в протягом 18-24 ч. Характер росту бактерій на різних середовищах може дати багато корисної інформації. На практиці використовують порівняно невеликий набір критеріїв. У рідких середовищах зазвичай враховують характер поверхневого (освіта плівки) або придонного зростання (вид осаду) і загальне помутніння середовища. На твердих середовищах бактерії формують колонії - ізольовані структури, які утворюються в ре док зростання і накопичення бактерій. Колонії виникають як наслідок зростання і розмноження однієї або декількох клітин. Таким чином, пересівши з колонії в подальшому дає можливість оперувати з чистою культурою збудника. Зростання бактерій на щільних середовищах має більше характерних особливостей.

Деякі бактерії виділяють гемолізіни- речовини, що руйнують еритроцити. На КА їх колонії оточують зони просвітління. Освіта гемолізинів (і відповідно - розміри зон гемолізу) може бути варіабельний, і для адекватного визначення гемолітичної активності слід переглядати чашки з посівами проти джерела світла (рис. 1-14). Активність гемолізинів може виявлятися в повному або неповному руйнуванні еритроцитів.

α-Гемоліз.Руйнування еритроцитів може бути неповним, зі збереженням клітинної строми. Подібний феномен називають α-гемоліз. Просвітлення середовища навколо колоній зазвичай незначно, пізніше середовище навколо колоній може набувати зеленувате забарвлення.

В бактеріологічній практиці найчастіше вивчають сахаролитические і протеолітичні ферменти

Подібне зростання характерний для пневмокока, а також для групи так званих зеленящіх стрептококів.

β-Гемоліз.Набагато більша група бактерій викликає повне руйнування еритроцитів, або β-гемоліз. Їх колонії оточені прозорими зонами різного розміру. наприклад, Streptococcus pyogenesі Staphylococcus aureusутворюють великі зони гемолізу, a Listeria monocytogenesабо Streptococcus agalactiae- невеликі, дифузні зони. Для визначення гемолітичної активності не слід застосовувати шоколадний агар (ША), тому що утворюються зони α- або β-гемолізу не мають характерних особливостей і викликають однакове позеленіння середовища.

Розміри і форма колоній

Важливі ознаки колоній - їх розміри і форма. Колонії можуть бути великими або дрібними. Величина колоній - ознака, що дозволяє розрізняти різні види, пологи і навіть типи бактерій.

У більшості випадків колонії грампозитивних бактерій дрібніше колоній грамнегативнихбактерій. Колонії бактерій можуть бути плоскими, піднятими, опуклими, мати втиснутий або піднятий центр. Інша важлива ознака - форма країв колоній. При вивченні форми колоній враховують характер її поверхні: матовий, блискучий, гладкий або шорсткий. Краї колоній можуть бути рівними, хвилястими, часточковими (глибоко порізаними), зубчастими, ерозованих, торочкуватими і т.д. Розміри і форми колоній часто можуть змінюватися. Подібні зміни відомі як дисоціації. Найбільш часто виявляють S - і R - duc асоціації. S-колонії круглі, гладкі і опуклі, з рівними краями і блискучою поверхнею. R-колонії - неправильної форми, шорсткі, з зубчастими краями.

колір колоній

При перегляді посівів також звертають увагу на колір колоній. Найчастіше вони безбарвні, білі, блакитні, жовті або бежеві; рідше - червоні, фіолетові, зелені або чорні. Іноді колонії ирризирующие, тобто переливаються всіма кольорами веселки. Фарбування виникає в результаті здатності бактерій до пігментообразованія. На спеціальних диференціюють середовищах, що включають спеціальні інгредієнти або барвники, колонії можуть набувати різноманітну забарвлення (чорну, синю та ін.) За рахунок включення барвників або їх відновлення з безбарвною форми. В даному випадку їх забарвлення не пов'язана з утворенням будь-яких пігментів.

Консистенція колоній і особливості росту на середовищі

Корисну інформацію можуть дати консистенція колоній і особливості росту на середовищі. Зазвичай цю інформацію можна отримати при дотику до колоній петлею. Колонії можуть легко зніматися з середи, вростати в неї або викликати її корозію (утворюючи тріщини і нерівності). Консистенція колоній може бути твердою або м'якою. м'які колонії- маслянисті або слівкообразние; можуть бути слизовими (прилипають до петлі) або низькими (тягнуться за петлею).

тверді колонії- сухі, воскоподібні, волокнисті або крошковатие; можуть бути крихкими і ламатися при дотику петлею.

Запах - менш важлива ознака колоній, оскільки викликані їм асоціації носять суб'єктивний характер. Зокрема, культури синьогнійної палички мають запах карамелі, культури лістерій - молочної сироватки, протеев - гнильний запах, нокардій - свежевскопанной землі.

Біохімічні методи ідентифікації бактерій

Методів, використовуваних для ідентифікації особливостей метаболізму бактерій, дуже багато, але на практиці застосовують невелику їх кількість. Більшість способів засноване на використанні диференційно-діагностичних середовищ, що включають різні індикатори.

Здатність до ферментації вуглеводів

Здатність до ферментації вуглеводів оцінюють по зміні забарвлення середовища внаслідок утворення органічних кислот (відповідно, відбувається зменшення рН), що викликають зміну забарвлення індикатора.

«Строкатий» ряд.Для визначення сахаролитической активності застосовують середовища Хісса; в їх склад входять 1% пептонна вода (або МПБ), індикатор Андраде і один з вуглеводів. При розщепленні вуглеводу відбувається зміна кольору середовища з жовтого на червоний. Оскільки бактерії розрізняють за здатністю ферментувати ті чи інші вуглеводи, то ряди пробірок набувають строкатого вигляду. Тому цей набір середовищ і називають «строкатий» (або кольоровий) ряд.

Скляні поплавці.Для визначення здатності мікроорганізмів ферментувати вуглеводи з утворенням кислоти і газу в судини із середовищами вносять скляні поплавці (зупинено з одного кінця короткі трубочки), спливаючі після наповнення їх газом.

розщеплення білків

Деякі бактерії проявляють протеолітичну активність, виділяючи протеази, що каталізують розщеплення білків. Наявність протеолітичних ферментів з групи коллагеназ визначають при посіві уколом в МТЖ. При позитивному результаті спостерігають його розрідження у вигляді воронки або пошарово зверху вниз. Здатність до розщеплення білків і амінокислот також можна оцінювати по зміні забарвлення середовища, тому що утворюються продукти - аміак, індол і сірководень - зрушують рН в лужну сторону, викликаючи зміну забарвлення індикатора.

Освіта аміаку.Для визначення здатності до утворення NH3 проводять посів у МПБ, і між його поверхнею і пробкою закріплюють смужку лакмусового паперу. припозитивному результаті папірець синіє.

Освіта індолу і H2S.Зазвичай для визначення здатності до утворення індолу і сірководню також проводять посів у МПБ, між його поверхнею і пробкою закріплюють папірці: в першому випадку просочені розчином щавлевої кислоти (при утворенні індолу папірець червоніє), у другому - розчином ацетату свинцю (при утворенні H 2 S папірець чорніє) .Також використовують спеціальні середовища, що містять індикатори (наприклад, середа Кліглера), або їх вносять безпосередньо в середу після реєстрації видимого росту бактерій.

Тест на нітратредуктазную активність

Цей тест використовують для ідентифікації окремих видів бактерій. Він дозволяє визначити здатність відновлювати нітрати в нітрити. Здатність до відновлення NO3 в N02, визначають культивуванням в МПБ, що містить 1% розчин KNO3. Для визначення нітритів в середу додають кілька крапель реактиву Грісса. При позитивному результаті спостерігають появу червоного кільця.

хроматографія

Хроматографічні методи використовують для ідентифікації бактерій і встановлення їх систематичного положення. Об'єкти для дослідження - жирні кислоти клітинної стінки, унікальні інтермедіати і кінцеві метаболіти життєдіяльності бактерій. Хроматографічні системи зазвичай поєднують з комп'ютерами, що значно спрощує облік результатів. Найбільш поширена ідентифікація жирних коротко і тейхоевих кислот методом газорідинної хроматографії. Рідинної хроматографією під високим тиском ідентифікують міколевую кислоту в клітинних стінках мікобактерій. Тонкошарову хроматографію використовують для ідентифікації ізопреноїдного хинонов клітинної стінки бактерій. У різних родів їх зміст і набір різні, але постійні, що дозволяє встановити систематичне положення кожного конкретного виду.

індикаторні папірці

Для вивчення біохімічної активності бактерій широко застосовують системи індикаторних папірців або набори мультімікротестов.

Система індикаторних папірців (СІБ)- набір дисків, просочених різними субстратами. Їх можна безпосередньо вносити в пробірки з суспензією бактерій або заздалегідь помістити в лунки пластикових планшетів, куди будуть внесені досліджувані бактерії. Так, на практиці застосовують набори Minitek Enterobacteriaceaelllі Minitek Neisseriaдля диференціальної діагностики ентеробактерій (чотирнадцять субстратів) і нейссерий (чотири субстрату), що дозволяють отримати результати через 4 ч інкубації при 37 ° С.

набори мультімікротестов- пластикові планшети, в лунки яких поміщені різні субстрати та індикатори. В лунки вносять різні розведення бактерій і інкубують при 37 ° С. На практиці використовують тести RapID NH для ідентифікації нейссерий і гемофілії, RapID Е для ентеробактерій і ін., Що дозволяють отримати результати не пізніше 4-8 год.

Автоматичні системи ідентифікації бактерій

Автоматичні системи ідентифікації бактерій дозволяють швидко (на 24-48 год швидше звичайних методів) отримати інформацію про вид збудника захворювання і його чутливості до антимікробних препаратів. В даний час найбільшого поширення набули системи типу Microscan і Vitek.

Системи Microscan.Використовують турбодиметричні, колориметрические і флюоресцентні методи ідентифікації бактерій. Системи складаються з комплектів пластикових планшетів, що містять різні субстрати. Грампозитивні і грамнегативні бактерії диференціюють за допомогою флуоресцентних субстратів (час аналізу - 2 год). Для ідентифікації гемофілії, анаеробів і дріжджів використовують хромогенні субстрати, які змінюють своє забарвлення (час аналізу - 4-6 ч). Мінімальні інгібуючі концентрації різних антибіотиків визначають по зміні оптичної щільності. Система комп'ютеризована і автоматично проводить всі необхідні розрахунки.
Системи Vitek.У цій системі застосовують один тип планшетів з тридцятьма лунками. У кожну лунку автоматично вноситься суспензія бактерій з відомою концентрацією мікробних тіл. Ідентифікація мікроорганізмів (гемофілія, нейсерії, дріжджі і анаероби) заснована на турбідометріі реакційного середовища в лунці. Залежно від властивостей мікроорганізму час, необхідний для його ідентифікації, варіює від 4-8 до 18 ч. Система повністю комп'ютеризована і працює автоматично.

Методи ідентифікації нуклеїнових кислот

Методи виявлення РНК і ДНК збудників знайшли застосування в основному при діагностиці вірусних інфекцій. Проте розроблені тест-системи для ідентифікації деяких вибагливих бактерій (наприклад, легіонел, хламідій), а також для ідентифікації колоній Neisseha gonorrhoeae, Haemophilus influenzaeтипу b, стрептококів групи В, ентерококів і мікобактерій.

Гібридизація нуклеїнових кислот

Найбільш поширені методи гібридизації нуклеїнових кислот. Принцип методів обумовлений здатністю ДНК (і РНК) специфічно з'єднуватися (гібридизувати) з комплементарними фрагментами штучно створених ниток ДНК (і РНК), мічених ізотопами або ферментами (пероксидазою або лужною фосфатазою). Надалі зразки досліджують різними методами (наприклад, ІФА).

Метод гібридизації в розчинахдає найбільш швидкі результати. Широкому впровадженню методу перешкоджає проблема видалення не пов'язаної ниток нуклеїнових кислот.

Метод гібридизації на твердій основіі його сендвіч модифікація поширений більше. Як твердої основи служать мембрани з нітроцелюлози або нейлону. Чи не зв'язалися реагенти видаляють багаторазовим відмиванням.

Біохімічна ідентифікація бактерій за допомогою тест-систем

Інші варіанти подібних тест-систем передбачають адсорбцію диференціюють субстратів на паперових або полімерних носіях. Серед них поширені системи Auxtab, Minitek, Morlok, MICRO-ID.

Подібні системи зручні в користуванні, вони дозволяють одночасно досліджувати широкий спектр мікробних ознак, завжди готові до використання в будь-яких мікробіологічних лабораторіях, вони прості і надійні, вимагають невеликих обсягів посівного матеріалу, тому економлять лабораторний посуд, піпетки. Комп'ютерна обробка отриманих результатів дає можливість швидко визначити і оцінити вид невідомого збудника.

Виготовлення поживних середовищ.До складу будь-яких середовищ входять переважно натуральні тваринні або рослинні продукти і компоненти - м'ясо, рибне борошно, яйця, молоко, кров, дріжджовий екстракт, картопля тощо. З них готують спеціальні напівфабрикати у вигляді екстрактів, настоїв, ферментативних і кислотних гідролізатів (м'ясна вода, дріжджовий екстракт, тріптічнійгідролізатХоттінгера, пептони і інші), які є основою для подальшого конструювання поживних середовищ. Крім цього, в поживні середовища додають різні неорганічні солі в залежності від потреб мікробної клітини. Як правило, концентрація хлориду натрію становить 5,0 г / л, KH2PO4 - 0,2-0,5 г / л, MgSO4 · 7H2O, інші солі додаються з розрахунку 0,001 г / л. У необхідних випадках до складу вводять вуглеводи (цукру, багатоатомні спирти), амінокислоти в концентрації 0,5-1,0%, а також вітаміни (до 0,001 мг / мл).

Для забезпечення необхідної щільності середовища використовують агар-агар, який отримують з морських водоростей. Він є зручним і необхідним компонентом середовищ, оскільки не споживається бактеріями як ростовий субстрат. Утворюючи у воді гель, він плавиться при температурі біля 100 ° С, а густіє при 40 ° С. Джерелом желатину є багаті на колаген субстрати. Серед них хрящі, сухожилля, кістки тощо. Гель, який отримують в результаті використання желатину, плавиться при температурі біля 32-34 ° С і застигає при 28 ° С. Однак численні мікроорганізми здатні розщеплювати желатин, тому використання останнього як наповнювача середовища вважається недоцільним. Найчастіше такі середовища з желатином застосовуються для визначення протеолітичних властивостей бактерій.

Виготовлення поживних середовищ є складним динамічним процесом, який потребує уваги бактеріолога. Цей процес складається з декількох основних етапів. Спочатку до дистильованої води згідно з прописом додають необхідні сухі компоненти середовища, ретельно перемішують, розчиняючи при нагріванні. Обов'язково встановлюють рН середовища, яку визначають або за допомогою іонометра, або індикаторними папірцями. При цьому слід звернути увагу, що після стерилізації реакція середовища падає на 0,2. Середовища, які містять агар, фільтрують через ватно-марлевий фільтр в гарячому стані, рідкі середовища - через паперові фільтри. Якщо є необхідність, їх освітляють осадженням або за допомогою білка курячого яйця або сироватки. Середовища розливають в спеціальні матраци, колби, флакони і закривають ватно-марлевими пробками з паперовими ковпачками. Залежно від складу середовища використовують різні режими стерилізації. Так, середовища, які містять вуглеводи, желатин стерилізують в автоклаві 15 хв при температурі 112 ° С або текучої парою при температурі 100 ° С дрібно. Середовища без вуглеводів можна стерилізувати в автоклаві при 115-120 ° С протягом 20 хв. Якщо до складу середовищ входять нестійкі до температури компоненти, такі, як нативний білок, сироватка, сечовина, то вони стерилізуються або фільтруванням через бактеріальні фільтри, або їх додають готовим в стерильне середовище. Контроль стерильності середовищ здійснюють шляхом витримування їх в термостаті протягом декількох діб при температурі 37 ° С.

Наводимо приклади виготовлення деяких простих поживних середовищ, які найчастіше використовуються в мікробіологічній практиці і можуть бути основою для виготовлення більш складних.

м'ясна вода. Для її виготовлення використовують свіжу яловичину, яку попередньо очищають від жиру, фасцій, сухожиль тощо, розрізають на дрібні шматки і пропускають через м'ясорубку. Отриманий фарш заливають водопровідною водою в співвідношенні 1: 2, розмішують і на добу залишають в прохолодному місці. Отриманий настій кип'ятять протягом 30-60 хв, періодично знімаючи накип, а потім відстоюють. Відокремлюють рідина від фаршу, фільтрують через фільтрувальний папір або полотно і доливають водопровідною водою до первинного об'єму, потім розливають в флакони і стерилізують при 1 атмосфері (температура 120 ° С) протягом 30 хв. Стерильна м'ясна вода прозора, має жовтуватий колір, а на стінках флакона і на дні утворюється осад з білків, які згорталися. Тому при подальшому використанні середовища його знову фільтрують. Активна реакція середовища - 6,2.

М'ясо-пептоннийбульйон (МПБ).Щоб виготовити МПБ, до м'ясної води додають 1% пептони і 0,5% хлориду натрію, встановлюють необхідне рН за допомогою 20% розчину NAOH і кип'ятять 30-40 хв, постійно перемішуючи. Бульйон фільтрують через паперовий або полотняний фільтри, розливають в флакони, пробірки, перевіряють активну реакцію середовища і стерилізують при 120 ° С протягом 20 хв.

М'ясо-пептоннійагар (МПА).До м'ясо-пептонного бульйону додають дрібно нарізаний агар-агар (2-2,5%). Отриману суміш кип'ятять до розчинення агар-агар, фільтрують, встановлюють рН і розливають в флакони. Стерилізацію проводять протягом 20 хв при температурі 120 ° С.

Середовища з кров'ю, сироваткою або асцітіческойжідкостью.Оскільки ці середовища не можуть довго зберігатися, їх готують безпосередньо перед застосуванням. Для цього до розтопленого й охолодженого до 45-50 ° С МПА додають стерильно 5-10% свіжої або дефібринованої крові барана, кролика або іншої тварини. Флакони з агаром ретельно перемішують і розливають у чашки Петрі, стежачи за відсутності піни.

Ідентично готують сироватковий (5-10% сироватки крові) або асцітічнийагар (25% асцітічной рідини).

Тріптічнійперевар за Хоттінгера.Бульйон з нього більш економічний ніж інші м'ясо-пептони середовища, оскільки дозволяє з однієї порції м'яса отримати в кілька разів більше бульйону. У цьому середовищі міститься велика кількість амінокислот, отже, підвищується його буферність, і за рахунок цього більш стабільною є значення активної реакції середовища.

Для виготовлення переварити беруть один кілограм м'яса без сухожиль і жиру, порізаний на дрібні шматки розміром до 1-2 см, занурюють в каструлю з подвійним об'ємом води, яка кипить, і кип'ятять 15-20 хв, поки м'ясо не стане сірим, що свідчить про коагуляції білків. Його виймають з рідини і пропускають через м'ясорубку. У рідини, яка залишилася, встановлюють рН 8,0, опускають туди фарш і охолоджують до 40 ° С. Потім додають 10% (до обсягу рідини) свіжої підшлункової залози, попередньо очищеної від сполучної тканини, жиру і двічі пропускають через м'ясорубку. Замість залози використовують сухий препарат панкреатину (0,5%). Отриману суміш ретельно збовтують і доводять рН до 7,8-8,0. Через 30 хв перевіряють рН. Якщо активна реакція середовища не змінюється в кислу сторону, це свідчить про недоброякісності ферменту. Коли рН середовища стабілізується, суміш переливають у великі бутлі, заповнюючи їх на 1/3. Додають до 3% хлороформу, закривають посуд резиновими пробками і інтенсивно збовтують для перемішування рідин. Надлишок парів хлороформу випускають. Через 1-2 рік знову перевіряють рН середовища, встановлюючи його на 7,4-7,6.

Додати матеріал

Отриману суміш залишають при кімнатній температурі на строк до 16 днів. Протягом перших 3-4 днів щодня перевіряють і коригують рН середовища, а також збовтують флакони не менш, ніж 3 рази на добу. Пізніше цю процедуру можна не проводити і збовтувати середу слід не так часто. За 1-2 дні до закінчення циклу перетравлення збовтування середовища припиняють.

Про завершеному якісному перетравленні свідчать просвітління рідини, яка набуває солом'яно-жовтий колір, а також утворення на дні пилоподібного осаду. Рідина легко фільтрується, її перевіряють на наявність триптофану за допомогою проби з бромної водою (до 3-4 мл фільтрату додають 3-4 краплі бромної води). При наявності триптофану (до 2,0-3,0 г / л) колір середовища змінюється на рожево-фіолетовий. Визначають загальний азот, який в нормі досягає 11,0-12,0 г / л, і аміни азот (до 7,0-9,0 г / л).

Гідролізат фільтрують через паперовий або полотняний фільтр, розливають в пляшки і автоклавують при 120 ° С протягом 30 хв. У такому вигляді він може зберігатися тривалий час.

Його використовують для отримання бульйонаХоттінгера. З цією метою до 100-200 мл гідролізат у додають 800-900 мл дистильованої води, 0,5% хлориду натрію і 0,2% однозамещенного фосфорнокислого натрію. Доводять рН до 7,4-7,6, розливають в флакони і стерилізують 20 хв при 120 ° С.

М'ясо-пептоннійагар на основі гідролізат уХоттінгера готують за рецептурою звичайного МПА.

Сьогодні, як правило, бактеріологи намагаються користуватися стандартними сухими живильними середовищами, які випускає бактеріологічна промисловість. Такі середовища дозволяють істотно поліпшити результати мікробіологічних досліджень і стандартизувати їх.

Для культивування бактерій широко застосовують безбілкові середовища, в яких добре ростуть багато органотрофніх, в тому числі патогенних видів бактерій. У ці середовища входять багато компонентів.

Культивування в синтетичних середовищах з використанням методу мічених атомів дає змогу детальніше диференціювати бактерії за характером їх біосинтезу.

Для диференціації прототрофніх і ауксотрофності бактерій широко використовують селективні середовища.

Прототрофи ростуть на мінімальному середовищі, яка містить тільки солі і вуглеводи, оскільки вони самі можуть синтезувати потрібні їм для розвитку метаболіти, тоді як ауксотрофи потребують середовищі, яка містить певні амінокислоти, вітаміни та інші речовини.

На густих поживних середовищах бактерії утворюють різні за формою і величиною колонії- видимі скупчення мікроорганізмів одного виду, які формуються в результаті розмноження з однієї або декількох клітин. Колонії бувають плоскими, опуклими, куполоподібними, втиснутими, їх поверхня - гладкою (S-фор-ми), шорсткою (R-форми), покресленої, горбкуватою, краю - рівними, зазубреними, волокнистими, торочкуватими. Форма колоній також різноманітна: кругла, розеткообразная, зірчаста, деревоподібних. За величиною (діаметру) колонії поділяються на великі (4 5 мм, середні (2-4 мм), дрібні (1-2 мм) і карликові (менше 1 мм).

Під збірною назвою «сальмонельоз» об'єднують хвороби, які первинно викликаються бактеріями роду Salmonellaі зазвичай протікають з явищами септіціміі або з підгострим, іноді хронічним перебігом і запаленням шлунково-кишкового тракту, ураженням печінки, органовдиханія, суглобів або абортами у самок.

Сальмонельоз - захворювання сільськогосподарських тварин усіх видів, птахів, хутрових звірів і дикої фауни. У молодняку ​​у віці від 10 днів до 4 міс захворювання протікає гостро, в септичній формі, супроводжуючись підйомом температури тіла, ентеритом, бронхопневмонією, артритами і паралічами. У дорослих тварин відзначаються бактеріоносійство, аборти, періоди загострення.

У людини токсикоінфекції викликають сальмонели, адаптовані до організму тварин і птахів.

З 1980-х рр. різні хвороби тварин, що відносяться до сальмонельозу, описувалися під різними назвами. У 1885 р Сальмон виділив у чистій культурі першого збудника сальмонельозу S. chol- егае(Колишня назва S. suipestifer),якого довгий час вважали збудником чуми свиней. Шотмюллер в 1890 р назвав паратифом захворювання людей, збудниками якого є S. paratiphyА та В, так як симптоми хвороби схожі з черевним тифом. Згодом масові хвороби тварин, що викликаються подібними з S. paratiphyбактеріями, також назвали паратифами. Однак ця назва застаріло і замінено. Пфейфер, Мюллер і Биттер встановили, що S. paratiphyА та В патогенні тільки для людини, в той час як види і різновиди, що виділяються від тварин і птахів, викликають токсі- коінфекції у людини.

Сальмонели в останньому виданні «Короткого визначника бактерій» Берги віднесені до сімейства Enterobacteriaceae,трибу Escheri- chiaee, роду Salmonella,сімейства Enterobacteriaceaeі включають 12 пологів: Escherichia, Edwardsiella, Citrobarter, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Erwinia, Jersinia.Рід сальмонел включає 65 груп (більше 2000 сероварів). Міжнародним номенклатурним комітетом рід сальмонел розділений на чотири підроду (табл. 15.1):

1. S. kauffmanni.Включає велику частину патогенних для людини сальмонел, серологічних груп А, В, С, Д, Е.

Таблиця 15.1

Біохімічна диференціація сальмонельоз

Умовні позначення: Н - позитивна; - негативна; Р - різна;

• (+) - пізня, але завжди позитивна; х - пізня, але не постійно позитивна
• 2. S. salamae.Відрізняється від першого підроду здатність розріджувати желатин і ферментувати Малоні натрію.
• 3. S. arizonae.Ферментує лактозу, виявляється у птахів, рептилій, ссавців; в останні роки виявляється у людини при гарячкових станах з явищами діареї і гастроентериту.
• 4. S. houtenau.Віднесені атипові в біохімічному відношенні сальмонели.

Загальні культурно-біохімічні ознаки представників роду сальмонел (за малим винятком) дозволяють відрізнити їх від інших груп сімейства ентеробактерій і схожих з ними груп (Edwardsiellaі Citrobacter).

Для біохімічної ідентифікації Citrobacter ічотирьох підродів сальмонел в практиці використовують п'ять тестів: наявність желатинази, утилізація лізіата, лактози, гліцерину і декарбоксилювання лізину.

Кауфман поділив рід сальмонел на чотири підроду відповідно до їх антигенної структурою (табл. 15.2).

Антигенна структура сальмонел

Група і вид (серовар)		антигенна структура
	соматичний антиген	жгутиковий антиген
		специфічна фаза	неспецифічна фаза
S. paratyphi А
S. typhimurium
S. abortus-equi
S. abortus-ovis
S.paratyphi В
S. abortus-bovis
S. cholerae-suis
S. typhi-suis
S. enteritidis
S. dublin
S. rastoc
S. gallinarum
S. pullorum

Біологічні властивості.Бактерії сімейства сальмонел мають такі загальні властивості: вони грамнегативні, не утворюють спор, позбавлені оксидази, відновлюють нітрати в нітрити, ферментують глюкозу, добре ростуть на звичайних середовищах, факультативні анаероби.

Морфологія. Це дрібні з закрученими кінцями палички довжиною I -3 і діаметром 0,5-0,8 мкм, як правило, рухливі, крім S. gal- linarumі S. ріllorum.Нерухомі мутанти зустрічаються серед інших видів. Капсул вони не утворюють. Їх колонії мають діаметр 2-4 мм. На МПА - прозорі, ніжні, блакитні, на середовищі Ендо - рожеві, прозорі, на середовищі Плоскірєва - безбарвні, на середовищі Левіна - прозорі з фіолетовим відтінком, на вісмут-сульфітагаре - чорні з металевим блиском, під колонією середу чорніє.

ферментативні властивостірізноманітні не тільки у одного підроду, вони можуть варіювати в межах одного і того ж серовара. Сальмонели утворюють сірководень і не утворюють індолу, що не ферментують лактозу і салицин, утилізують цитрат, ферментують глюкозу і манііт. У новітніх наукових дослідженнях сальмонели диференціюють по 26 біохімічним тестам.

Стійкість.Тривало зберігаються і мають високу стійкість ендотоксини сальмонел. Їх токсична дія не слабшає в товщі м'яса при варінні великих шматків. При температурі 65-70 ° С сальмонели виживають тривалий час, не гинуть в 8-10% -му розчині оцтової кислоти протягом 18 год. В грунті, гної, калі сальмонели зберігаються кілька років і можуть розмножуватися у відкладеннях з фекалій в стійлах для свиней , в рідких кормах, воді, ґрунтах, удобрених гноєм. Вони розмножуються у всіх харчових продуктах при достатній вологості і температурі (7- 45 ° С), pH від 4,1 до 9,0. Використовувані для дезінфекції 3% -й розчин гідроксиду натрію, хлорне вапно, що містить 2% -й активний хлор, 20% -а суспензія свіжогашеного вапна, 2% -й розчин формальдегіду надійно знезаражують приміщення при експозиції 1-1,5 ч. Знезараження інфікованої сальмонелами грунту загонів і пасовищ проводять за методом, розробленим С.М. Губкіна (1953).

Токсигенність.Сальмоннелли мають ендо- та екзотоксинами. Ендотоксини викликають геморагічне запалення кишечника і є причиною діареї та інших ознак хвороби. Екзотоксини відносяться до групи нейротоксинів. Дія токсинів супроводжується диспепсією, ентероколіти, ураженням центральної нервової системи при цьому підвищується температура тіла, з'являється задишка, порушується координація рухів, слабшають рефлекси. У випадках наростання інтоксикації у тварин з'являються судоми.

антигенна структурасальмонел складна. Вони мають кілька антигенів: О, Н, VI, М і К. О-антиген термостабилен (витримує кип'ятіння протягом 2,5 год), пригнічується формаліном, розташовується на поверхні клітини і складається з фосфоліпідополісахарідних комплексів. Специфічність О-антигену в серологічних реакціях зумовлена ​​присутністю в ньому певних поліозідов, тобто цукрів дідезоксігексоз, розташованих на кінцях полісахаридних ланцюжків. Серологічні варіанти сальмонел по О-антигену позначають арабськими цифрами.

Одним з компонентів соматичного антигену є Уь антиген, що належить до К-антигенів. Після відкриття Уьантігена (Фелікс і Рітт, 1934) його назвали антигеном вірулентності. Але він не служить, як тепер доведено, прямим носієм вірулентності. Його присутність на поверхні мікробної клітини перешкоджає аг- глютінабельності бактерій в О-сироватці, що ускладнює диференціацію сальмонел. Уьантіген - полімер, він термолабилен.

Уьантіген є лабільним речовиною, він зникає при вирощуванні мікробів в поживних середовищах при додаванні до них фенолу, а так само при низькій (20 ° С) або високою (40 ° С) температурах, повністю руйнується при кип'ятінні і під дією фенолу, частково змінюється під впливом формаліну і температури 60 ° С протягом 30 хв.

Жгутиковий Н-антиген неоднорідний; він складається з двох фаз: першої, або специфічної фази, агглютинируют специфічної видової сироваткою, і другий, або неспецифічної фази, агглютинируют не тільки видовий, а й груповий сироваткою. Сальмонельоз, що мають дві фази Н-антигену, називають двофазним на відміну від монофазних, що мають тільки специфічний Н-анти- ген. Н-антиген термолабилен, стійкий до формаліну, чутливий до кислот і алкоголю, за своєю природою протеїн.

Антигенна структура сальмонел схильна до мінливості. Їх антигенні комплекси схильні до раптових варіацій при переході з Б в Я-форму, а також в результаті трансдукції, лізогенной конверсії і кон'югації.

Розрізняють декілька видів дисоціації сальмонел:

• 1) Н-О-варіації, тобто перехід від жгутиковой до безжгутиковой формі;
• 2) И.-, 8-варіації, тобто перехід від гладкої до шорсткої формі. У фізіологічному розчині хлористого натрію 11-форми дають нестійкий агглютінати, а Б-форми залишаються в підвішеному стані.
• 3) У-У-варіації стосуються тільки Уьантігена. У-форма містить Уьантіген і є О-неагллютінабельной. У-форма не містить Уьантігена і вважається О-агглютінабельной. Зустрічаються проміжні форми.

У практиці серологічної диференціації сальмонел, незважаючи на варіабельність їх антигенної структури, до уваги береться лише три основних антигену (О, Н, VI).

Характеризуючи властивості сальмонел, не можна не зупинитися на їх так званої генетичної пластичності, на зв'язку останньої у цих мікроорганізмів з множинністю їх сероварів і на питанні про те, якою мірою ця генетична пластичність може відбитися на можливості їх точної ідентифікації.

Сальмонели в останні роки часто обиралися в якості моделей для генетичних досліджень. Уже згадувалося про природну варіації антигенних структур бактерій. Відомі також варіації, що виникли під впливом бактеріофагів і інших чинників. Вище було названо три механізму генетичної рекомбінації, що зустрічаються у сальмонел. Явище трансдукції у сальмонел описано в 1952 р Ціндером і Леденбергом. При цьому помірний бактеріофаг РТ22, впливаючи на різні серовар, міг здійснювати трансдукцію Н-антигену і його інших властивостей. На підставі цього автори не виключають можливості такого роду змін мікроорганізму в природних умовах.

При лізогенной конверсії гени бактеріофага передають функцію як частина бактеріальної клітини. Стан Лізогенія, викликане конвертує фагом, веде до зміни в О-антигени. При цьому знову придбаний О-антиген зберігається до тих пір, поки мікроб залишається лізогенним.

За допомогою кон'югації виникають гібриди з новими антигенними властивостями. При кон'югації можлива передача плазмід і поява фактора резистентності (Я-фактора) або нової якості. Проблемою сучасності є широке поширення по лірезістентних до лікарських речовин форм сальмонел.

З вищевикладеного зрозумілі проблеми і складності ідентифікації сальмонел, необхідність систематичного визначення сероварів виділених культур, вивчення їх антібіотікорезістент- ності і її подолання.

Для серологічної типізації виділяються штамів сальмонел використовують рецепторний аналіз із застосуванням специфічних агглютинирующих сальмонельозних сироваток як групових, так і видових.

імунітетносить антиінфекційних і антитоксичний характер. Як правило, спочатку виникає нестерильний імунітет, який в подальшому може стати стерильним. Імунітет часто виникає в результаті прихованого переболевания. Такий імунітет називають Депрессионная.

У створенні імунітету істотне значення має перша доза антигену. Надмірна доза викликає пригнічення імунних сил організму, особливо у молодняка. Малі дози зазвичай нейтралізуються організмом і, отже, не викликають вироблення імунітету. Оптимальною іммунізірующей дозою деякі автори вважають 2 мл мікробних тіл.

Для формування стійкого імунітету необхідна певна ступінь і тривалість антигенного впливу (персистенція живих бактерій в тканинах). У зв'язку з цим щеплення в ранній постнатальний період не дають бажаного ефекту, як і поєднання імунізації із застосуванням антибіотикотерапії. Провідним антигеном в иммуногенезе вважається О-антиген. На перших стадіях формування імунітету утворюються 1 2 М і 1 2 0. Під впливом живих вакцин, починаючи з 2-го тижня, відбуваються утворення антитіл і посилення фагоцитарної реакції, які до 5-6-му тижні досягають свого максимуму.

Патогенез.Тривалість інкубаційного періоду залежить від методу інфікування, дози і вірулентності збудника і імунного стану організму. У природних умовах тривалість інкубаційного періоду у молодняку ​​різних видів тварин становить від 2-5 до 10-25 днів. При аліментарному шляху зараження збудник швидко проникає в лімфатичний апарат кишкової стінки, а звідти - в лімфо і кровообіг. Пейєрові бляшки і солітарні фолікули збільшуються, чітко виступаючи під слизової, утворюючи піднесення.

ідентифікація сальмонел

Після 18-20 годинного інкубування чашок з диференційно-діагностичними середовищами (вісмут-сульфіт агар 48 годину.) Проводиться облік характеру зростання з відбором 3-5 підозрілих колоній на одну із середовищ для первинної ідентифікації (Кліглера, Ресселя, Олькеницкого) і на скошений поживний агар. У разі надзвичайної епідемічної ситуації культуру, що виросла на зазначених середовищах, використовують для подальшої постановки реакції аглютинації. Результати цієї реакції є орієнтовними і вимагають підтвердження на етапі завершення біохімічної ідентифікації.

культуральні властивості

Спільність морфології і ряду культуральних властивостей бактерій роду Salmonella не дозволяє типізувати їх за вказаними ознаками. Для цього крім морфології і культуральних властивостей вивчають ферментативні властивості і антигенну структуру, в окремих випадках ставлять біологічну пробу на лабораторних тваринах.

Ферментативні властивості бактерій обумовлені набором ферментів, відображають певні умови харчування і обміну речовин, властиві даному виду мікроорганізмів в тих чи інших умовах зовнішнього середовища. Бактерії роду Salmonella характеризуються такими ферментативними властивостями: чи не розріджують желатину, розкладають адоніта і не ферментують сахарозу; переважна більшість не розщеплює салицина і не розкладає лактозу, не утворює індолу, що не розщеплює сечовину, не дає реакції Фогес-Проскауера (реакція на ацетілметілкарбінол); ферментує (за невеликим винятком мальтозу, маніт, сорбіт, розщеплює глюкозу з утворенням газу (S. typhi, S. pullorum зазвичай не утворюють газу); дає позитивну реакцію з метиловим червоним, утилізує амоній і редукує нітрати; більшість з них продукує сірководень.

Для вивчення ферментативних властивостей бактерій роду Salmonella зазвичай використовують короткий кольоровий (строкатий) ряд, що складається з середовищ з глюкозою, манітом, арабінозою, дульцітом, рамнозою (середа Біттера); гліцерінофуксіновий бульйон (бульйон Штерна). Крім зазначених середовищ для диференціації серологічних типів сальмонел використовують також середовища з мальтозою, інозитом, трегалозу, ксилозой; лакмусовое молоко (зміна лакмусового молока при зростанні сальмонел дозволяє їх диференціювати за здатністю утворювати кислоту або луг). Замість лакмусового можна використовувати знежирене молоко з індикатором бромтимоловим синім (1 мл 0,4% -ного розчину в 100 мл молока). Відоме значення для диференціації сальмонел має освіту сірководню культурою. Протеолі-тичні властивості досліджують шляхом посіву досліджуваної культури сальмонел на МТЖ і молоко.

З огляду на схожість бактерій роду Salmonella з іншими мікроорганізмами родини Enterobacteriaceae виникає необхідність їх диференціації. В даний час в бактеріологічній практиці широко використовують щільні диференційно-діагностичні поживні середовища з лактозою (середовища Плоскірєва, Ендо, Левіна). За здатністю бактерій ферментувати лактозу сальмонели відрізняють від часто супутньої Е. сoli, тому при дослідженні матеріалу на сальмонели спочатку проводять висів на одну з диференційно-діагностичних середовищ. На цих середовищах Е. coli, ферментують лактозу з утворенням кислоти і зміною кольору індикатора, утворює колонії, що відрізняються за кольором від колоній сальмонел, що не ферментують лактозу. На середовищі Ендо бактерії Е. coli дають колонії червоного кольору, часто з металевим блиском, сальмонели - безбарвні або блідо-рожеві (пофарбовані в колір середовища); на середовищі Плоскірєва Е. coli - колонії оранжево-червоного кольору, сальмонели - прозорі або ніжно-рожеві; на середовищі Левіна Е.- coli формують колонії чорного кольору, оточені обідком, сальмонелли-- прозорі, ніжно-рожеві або рожево-фіолетові. Для диференціації сальмонел і культурально подібних штамів, а також бактерій роду Proteus і бактерій групи кишкових паличок застосовують середовища з сечовиною (середа Прейс, Ресселя, Олькеницкого), SS-агар (Salmonella - Shigella - агар) і ін. Колір цих середовищ обумовлений неоднаковою інтенсивністю розщеплення мікроорганізмами азотистих речовин з утворенням лужних продуктів. Бактерії групи кишкових паличок і Proteus (за винятком 0-форми), як правило, на SS-aгape не дають зростання, а сальмонели ростуть у вигляді ніжних, безбарвних колоній.

Щільні диференційно-діагностичні середовища служать лише для визначення приналежності бактерій до роду Salmonella і відділення їх від супутньої мікрофлори.

Ферментативні властивості сальмонел не завжди стабільні і можуть змінюватися в залежності від умов зовнішнього середовища, тому правильне тіпізірованія сальмонел можливо лише в результаті вивчення комплексу морфологічних, культуральних, ферментативних властивостей і антигенної структури

Лекція №14.сімейство Enterobacteriaceae . рід Salmonella .

Загальна характеристика родини ентеробактерій.

Бактерії цього сімейства є найбільш частими збудниками кишкових інфекцій. Їх об'єднує ряд загальних ознак. Це короткі, що не утворюють спор, палички з закругленими кінцями, рухливі (перитрихи) або нерухомі, деякі мають капсули. Аероби або факультативні анаероби. Характерна негативна забарвлення по Граму. Добре ростуть на звичайних поживних середовищах з м'ясному екстрактом. На більшості щільних середовищ ентеробактерії утворюють круглі опуклі блискучі S- (гладкі) колонії, а також часто обумовлені втратою капсули плоскі, нерівні і зернисті R- (шорсткі) форми. Для них характерна ферментація глюкози (і інших вуглеводів) з утворенням кислоти і газу. По відношенню до лактози їх ділять на лактоза- ферментують і лактоза - неферментуючі. Каталаза - позитивні, відновлюють нітрати в нітрити.

Сімейство ентеробактерій включає більше 20 пологів, що об'єднують понад 100 видів бактерій, що мешкають в грунті, на рослинах, які входять до складу мікробних біоценозів кишечників тварин і людини. Найбільше значення для людини мають роду Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Klebsiella та ін. Для диференціації пологів використовують в основному біохімічні ознаки, для класифікації всередині родів і видів - вивчення антигенної структури (О, Н і К антигенів) .

О антигенпредставлений ліпополісахаридами (ЛПС) зовнішньої мембрани. Штами, позбавлені О антигену, утворюють R- колонії і зазвичай авірулентние.

Н антиген -термолабільние білки, є тільки у рухомих (мають джгутики) видів.

К антиген- термостабільні полісахариди капсули і зовнішньої оболонки.

У патогенезі поразок, що викликаються ентеробактеріями, мають значення ЛПС (ендотоксин, що звільняється при руйнуванні бактерій), різні ентеротоксини, фактори інвазивності і адгезії (джгутики і ін.), Ферменти патогенності.

рідSalmonella.

Сальмонели - велика група ентеробактерій, серед яких різні серотипи - збудники черевного тифу, паратифів А, В і С і найбільш поширених харчових токсикоінфекцій - сальмонеллезов. За ознакою патогенності для людини сальмонели поділяють на патогенні для людини-антропонози (викликають черевний тиф і паратифи А і В) і патогенні для людини і тварин - зоонози (викликають сальмонельози). Незважаючи на значні відмінності сальмонел за антигенними характеристиками, біохімічними властивостями, що викликаються ними захворювань, за сучасною, але недостатньо зручною і досконалої класифікації виділяють два види - S.bongori і S.enteritica. Останній розділений на підвиди, з яких найбільше значення мають підвиди choleraesuis і salamae. Підвид choleraesuis включає найбільшу частину відомих сероварів сальмонел (близько 1400 з приблизно 2400).

Морфологія.Прямі грамнегативні палички розміром 2-4 x 0,5 мкм. Рухливі завдяки наявності перитрихиально розташованих джгутиків.

Культуральні та біохімічні властивості.Факультативні анаероби, добре ростуть на простих поживних середовищах. Оптимум рН 7,2-7,4, температури - +37. Метаболізм - окислювальний і бродильний. Сальмонели ферментують глюкозу та інші вуглеводи з утворенням кислоти і газу (серотип Salmonella typhi газоутворення не викликає). Зазвичай не ферментують лактозу (на середовищах з цим вуглеводом - безбарвні колонії), сахарозу. Оксідаза- негативні, каталаза - позитивні. Реакція Фогеса - Проскауера негативна.

На підставі біохімічних (ферментативних) властивостей сальмонели розділені на чотири групи. Характерні ознаки сальмонел - освіту сірководню, відсутність продукції індолу і аеробних. Для виділення використовують диференційно - діагностичні середовища (вісмут - сульфіт агар, середовища Ендо, Плоскірєва, SS агар) і середовища збагачення (селенітовий бульйон, жовчний бульйон, середа Раппопорта). S- форми утворюють дрібні (від 1 до 4 мм) прозорі колонії (на середовищі Ендо - рожеві, на середовищі Плоскірєва - безбарвні, на вісмут - сульфіт агарі - чорні, з металевим блиском). На рідких середовищах S- форми дають рівномірне помутніння, R- форми - осад.

Антигенна структура.Виділяють О, Н і К антигени. До групи К-антигенів відносять Vi- антигени (антигени вірулентності). Завдяки більш поверхневому розташуванню (ніж О антигени) Vi- антиген може перешкоджати аглютинації культур сальмонел О специфічною сироваткою (екранування). Для диференціації сальмонел застосовують схему (серологическую класифікацію) Кауфманна - Уайта.

У відповідності зі структурою О-антигенів сальмонели поділяють на О групи(67 серогрупи), в кожну з яких входять серологічні типи, Що відрізняються будовою Н антигенів. Належність сальмонел до певного серовару встановлюють при вивченні антигенної структури відповідно до схеми Кауфманна - Уайта. Приклади: серотип S.paratyphi A відноситься до серогрупи А, S.paratyphi В - до серогрупи В, S.paratyphi С - до групи С, S.typhi - до серогрупи D.

Фактори патогенності.

1.Фактори адгезії і колонізації.

3.Ендотоксін (ЛПС).

4. термолабільного і термостабільні ентеротоксини.

5. Цитотоксинів.

6. Істотне значення мають плазміди вірулентності і R- плазміди.

7. Vi - антиген пригнічує дію сироваткових і фагоцитарних бактеріоцідное факторів.

Основними факторами патогенності сальмонел є їх здатність проникати в макрофаги і розмножуватися в лімфоїдних утвореннях власне слизового шару тонкого кишечника (Пейєрових бляшки, солітарні фолікули), а також продукція ендотоксину.

Патогенез уражень.Відмінності клінічних форм захворювань, що викликаються сальмонелами, залежить від вірулентності та дози збудника і стану імунної системи організму. Звичайна доза, що викликає клінічні прояви - 10 6 - 10 9 бактерій, менша доза достатня при імунодефіцитах, гіпохлоргідрії і інших захворюваннях шлунково - кишкового тракту.

Виділяють такі основні форми сальмонеллезной інфекції:

гастроинтестинальную;

Генералізовану (тифоподібний і Септікопіеміческій варіанти);

Бактеріоносійство (гостре, хронічне, транзиторне).

Істотні патогенетичні особливості інфекційного процесу, що викликається серотипами S.typhi, S.paratyphi A, B, є підставою для виділення тифо- паратіфозних захворювань в самостійну нозологічну групу. Кожній фазі патогенезу відповідає клінічний період захворювання і своя тактика лабораторного обстеження. Основні фази - проникнення збудника (відповідає інкубаційному періоду), первинної локалізації збудника (продромальний період), бактереміі (перший тиждень захворювання), вторинної локалізації сальмонел (розпал захворювання - 2-3 тижні), виделітельно- алергічна (реконвалесценция - 4 тиждень захворювання).

Проникли через рот сальмонели потрапляють в епітеліальні клітини дванадцятипалої і тонкої кишки за допомогою ендоцитозу. Вони легко проникають в епітеліальні клітини, але не розмножуються тут, а проходять і розмножуються в лімфатичному апараті тонкого кишечника. Сальмонели розмножуються переважно в lamina propria (первинна локалізація), що супроводжується місцевою запальною реакцією слизової оболонки, припливом рідини в осередок ураження і розвитком діарейного синдрому (гастроентерит). Ентеротоксини підвищують рівень циклічного аденомонофосфата (цАМФ), відбувається підвищення рівня гістаміну та інших біологічно активних речовин, проникності судин. Спостерігаються водно - електролітні порушення, розвиваються гіпоксія і ацидоз, які посилюють патологічний процес з переважанням судинних розладів. Відбувається руйнування частини сальмонел з виділенням ендотоксину, сенсибілізація (ГЗТ) лімфатичного апарату тонкого кишечника.

З слизової оболонки сальмонели можуть потрапляти в лімфо і далі в кровотік, викликаючи бактеремію. У більшості випадків вона носить транзиторний характер, тому що сальмонели елімінуються фагоцитами.

На відміну від інших сальмонел, збудники черевного тифу і паратифів, проникнувши в кровотік, здатні виживати і розмножуватися в фагоцитах. Вони можуть розмножуватися в мезентеріальних лімфовузлах, печінці і селезінці і викликати генералізацію процесу. Після загибелі фагоцитів сальмонели знову надходять в кров. При цьому Vi- антиген пригнічує бактерицидні фактори.

При загибелі сальмонел звільняється ендотоксин, який пригнічує діяльність центральної нервової системи (тиф - від грец. Typhos - туман, сплутаність свідомості) і викликає тривалу лихоманку. Дія ендотоксину може викликати міокардит, міокардіодистрофії, інфекційно - токсичний шок.

В результаті бактереміі відбувається генералізоване інфікування жовчного міхура, нирок, печінки, кісткового мозку, твердих мозкових оболонок (вторинна локалізація сальмонел). Відбувається вторинна інвазія епітелію кишечника, особливо пеєрових бляшок. У сенсибілізованої сальмонелами стінці розвивається алергічне запалення з утворенням основного грізного ускладнення - черевнотифозних виразок. Спостерігається тривале носійство сальмонел в жовчному міхурі з виділенням збудника з випорожненнями, пієлонефрити, кровотечі і перфорації кишечника при ураженні пеєрових бляшок. Потім відбувається формування постинфекционного імунітету, елімінація збудника і загоєння виразок або формування бактеріоносійства (в Західному Сибіру часто на тлі хронічного опісторхозу).

Збудниками сальмонеллезов є інші серотипи сальмонел, патогенні для людини і тварин (S.typhimurium, S.enteritidis, S.heldelberg, S. newport і інші). В основі патогенезу сальмонельозів - дія самого збудника (його взаємодії з організмом господаря) і ендотоксину, що накопичується в харчових продуктах, інфікованих сальмонелами. У класичному варіанті сальмонельозна токсикоінфекція - гастроентерит. Однак при прориві лімфатичного бар'єру кишечника можуть розвиватися генералізовані і позакишкові форми сальмонельозів (менінгіт, плеврит, ендокардит, артрит, абсцеси печінки і селезінки, пієлонефрит та ін.). Збільшення генералізованих і позакишкових форм сальмонельозів пов'язано зі збільшенням кількості імунодефіцитних станів, що має особливе значення при ВІЛ-інфекції.

Окрему проблему становлять госпітальні штами сальмонел (частіше окремі фаговари S.typhimurium), що викликають спалахи внутрішньолікарняних інфекцій переважно серед новонароджених і ослаблених дітей. Вони передаються переважно контактно-побутовим шляхом від хворих дітей і бактеріоносіїв, мають високу інвазивної активністю, часто викликаючи бактеремію і сепсис. Епідемічні штами характеризуються множинною лікарською стійкістю (R- плазміди), високою резистентністю, в тому числі до дії високих температур.

Епідеміологічні особливості.Характерно повсюдне поширення. Основні резервуари сальмонел - людина (збудники черевного тифу і паратифів А) і різні тварини (інші серотипи сальмонел). Основні збудники відрізняються поліпатогенностью. Основні джерела зараження - м'ясні і молочні продукти, яйця, птахо-і рибопродукти. Основні шляхи передачі - харчовий і водний, рідше - контактний. Характерна надзвичайна множинність резервуарів і можливих джерел інфекції. Основне значення мають сільськогосподарські тварини і птахи.

Лабораторна діагностика.Основний метод - бактеріологічний. Виходячи з патогенезу оптимальними термінами бактеріологічних досліджень при гастроінтестинальних формах є перші дні, при генералізованих формах - кінець другої - початок третього тижня захворювання. При дослідженні різних матеріалів (випорожнення, кров, сеча, жовч, блювотні маси, харчові залишки) найбільша частота позитивних результатів відзначається при дослідженні випорожнень, для збудника черевного тифу і паратифів - крові (гемокультура).

Дослідження проводять за стандартною схемою. Досліджуваний матеріал засівають на щільні диференційно - діагностичні середовища - високоселективні (вісмут- сульфит агар, агар з діамантовим зеленим), среднеселектівние (середа Плоскірєва, слаболужною агар), нізкоселектівние (агар Ендо і Левіна) і в середовища збагачення. Для посіву крові використовують середу Рапопорт. На вісмут- сульфит агарі колонії сальмонел набувають чорний (рідше зелений) цвет.Виросшіе колонії пересівають на середовища для первинної (середовища Ресселя) і біохімічної (сірководень, сечовина, глюкоза, лактоза) ідентифікації. Для попередньої ідентифікації використовують О1- сальмонельозний фаг, до якого чутливо до 98% сальмонел.

Для ідентифікації культур в РА використовують полівалентні і моновалентні О, Н і Vi- антисироватки. Спочатку використовують полівалентні адсорбовані О-і Н-сироватки, а потім-відповідні моновалентні О-і Н-сироватки. Для ідентифікації збудників черевного тифу і паратифів використовують антитіла до антигену О2 (S.paratyphi A), O4 (S.paratyphi B), O9 (S.typhi). Якщо культура не аглютинується О сироваткою, її потрібно досліджувати з Vi- сироваткою. Для швидкого виявлення сальмонел використовують полівалентні люмінесцентні сироватки.

Серологічні дослідження проводять для діагностики, а також виявлення та диференціації різних форм носійства. Застосовують РА (реакцію Відаля) з О-і Н-діагностикумами і РПГА з застосуванням полівалентних еритроцитарних діагностикумів, що містять полісахаридні антигени серогруп А, В, С, Д і Е і Vi- антиген.

лікування- антибіотики (левоміцетин і ін.). Часто виявляють резистентні до антибіотиків штами. Необхідно визначати антибіотикорезистентності виділених культур.

специфічна профілактикаможе застосовуватися переважно щодо черевного тифу. Застосовують хімічну сорбированная черевнотифозну моновакцину. Вакцинацію в даний час застосовують переважно за епідемічними показаннями.