کار عملی در میکروبیولوژی. کارگاه میکروبیولوژی

آژانس آموزش و پرورش فدرال

موسسه آموزشی دولتی

ایرکوتسک دانشگاه ایالتی»

اعمال کوچک در میکروبیولوژی

راهنمای مطالعه

ایرکوتسک 2009

UDC 579 (076.5)

منتشر شده با تصمیم شورای ویراستاری و انتشارات دانشگاه دولتی ایرکوتسک

کارگاه ژیلکین در زمینه میکروبیولوژی: کتاب درسی. روش. دفترچه راهنما برای گل میخ بالاتر مطالعه. موسسات تخصصی "میکروبیولوژی" ، "زیست شناسی" و "فیزیولوژی".

6. توده میکروبی نباید دست ها ، میز و اجسام اطراف را آلوده کند. سوسپانسیون ریخته شده میکروبی با استفاده از مواد ضدعفونی کننده خنثی می شود.

7. پس از پایان کار ، فرهنگ ها به معلم واگذار می شود ، لوله های آزمایش و فنجان تلقیح شده در ترموستات قرار می گیرند.

8. حلقه های باکتریولوژیکی ، سوزن ، موچین و سایر اجسام فلزی ، پس از تماس با میکروارگانیسم ها ، در شعله چراغ الکل سوزانده شده و در یک پایه مخصوص قرار می گیرند.

9. سرسره ها و روکش های مورد استفاده ، پیپت ها ، کاردک ها و ... در محلول 3-5٪ اسید کاربولیک یا سایر محلول های ضد عفونی کننده قرار می گیرند.

10- كشتهاي صرف شده در لوله هاي آزمايش ، ظروف پتري و ... با محلولهاي ضدعفوني كننده به مدت 24 ساعت خنثي مي شوند ، سپس ظرفها را جوشانده و مي شويند.

11. بهداشت شخصی باید کاملاً رعایت شود - پس از اتمام کار ، دست ها باید کاملاً با آب و صابون شسته شوند.

12. رعایت نکات ایمنی هنگام کار با وسایل برقی و معرفهای شیمیایی ضروری است.

میکروبیولوژی عمومی
فصل I. روش میکروسکوپ و میکروسکوپ
1. میکروسکوپ نوری- نوری
2. میکروسکوپ میدان تاریک
3. میکروسکوپ کنتراست فاز
4. میکروسکوپ لومینسانس (فلورسانس)
فصل دوم درک کلی از کشت ، تکنیک کاشت و تجهیزات لازم برای کار با میکروارگانیسم ها
فصل سوم روش های تهیه آماده سازی میکروارگانیسم ها
فصل چهارم تحقیقات سلولهای میکروبی
1. اشکال سلولهای میکروارگانیسم ها
2. ساختار سلولهای میکروارگانیسم ها (روشهای تحقیق سیتوشیمیایی)
3. رنگ آمیزی گرم سلولهای میکروارگانیسم ها
4. رنگ آمیزی هاگ در باکتری ها
5. رنگ آمیزی کپسول ها
6. رنگ تاژک
7. رنگ آمیزی ماده هسته ای باکتری ها
8. رنگ آمیزی اجزای سلول های میکروارگانیسم ها
فصل پنجم تغذیه میکروارگانیسم ها
1. اهمیت مواد مغذی فردی
2. تهیه رسانه های فرهنگی
3. روشهای عقیم سازی
فصل ششم شمارش تعداد باکتری ها و جداسازی یک فرهنگ خالص
1. شمارش تعداد باکتری های موجود در خاک
2. تعیین ترکیب کیفی باکتری ها
3. شمارش تعداد میکروارگانیسم های موجود در آب و مایعات دیگر
4. شمارش تعداد باکتری های موجود در هوا
5. جداسازی فرهنگهای خالص باکتریها
فصل هفتم تعیین نوع باکتری
فصل هشتم تبدیل مواد آلی بدون نیتروژن توسط میکروارگانیسم ها
فرآیندهای تخمیر
1. تخمیر الکلی
2. تخمیر اسید لاکتیک
3. تخمیر اسید بوتیریک
4. تخمیر مواد پکتین
5. تخمیر سلولز
6. اکسیداسیون فیبر
7. اکسیداسیون چربی
8. اکسیداسیون هیدروکربن ها
فصل نهم تبدیل ترکیبات نیتروژن آلی و معدنی توسط میکروارگانیسم ها
1. تقویت کننده
2. نیتریفیکاسیون
3. نیتروژن زدایی (تنفس نیترات)
4. تثبیت بیولوژیکی نیتروژن جو
فصل X. تبدیل ترکیبات گوگرد ، آهن و فسفر توسط میکروارگانیسم ها
1. تبدیل ترکیبات گوگردی توسط میکروارگانیسم ها
2. مشارکت میکروارگانیسم ها در تبدیل آهن
3. تبدیل ترکیبات فسفر توسط میکروارگانیسم ها
میکروبیولوژی کشاورزی
فصل یازدهم تجزیه و تحلیل میکروبیولوژیکی عمومی خاک
1. روشهای تحقیق
2. گروه های میکروارگانیسم ها ، ترکیب و آماده سازی محیط کشت
3. گرفتن نمونه خاک متوسط ​​و آماده سازی نمونه برای تجزیه و تحلیل میکروبیولوژیکی
4. تهیه سوسپانسیون خاک
5. در نظر گرفتن گروه های مختلف میکروارگانیسم ها
6. تعیین تعداد کل میکروارگانیسم های موجود در خاک با شمارش مستقیم زیر میکروسکوپ
فصل دوازدهم مطالعه سنتز میکروارگانیسم ها
1. روش رسوب گذاری شیشه مطابق با N.G. Kholodny
2. مطالعه سنوزهای میکروبی در خاک به روش پرفلیف و گابه
3. روش مویرگهای Perfiliev اصلاح شده توسط Aristovskaya
4. شناسایی میکروارگانیسم های گروه اتوکتون که در تجزیه مواد هیومیک شرکت می کنند ، طبق روش وینوگرادسکی در اصلاح Tepper
5. شناسایی میکروارگانیسم های شرکت کننده در تجزیه مواد هیومیک به روش Tepper
فصل سیزدهم تعیین فعالیت بیولوژیکی خاک
1. تعیین فعالیت بیولوژیکی خاک با شدت تجزیه بوم (روش Mishustin ، Vostrov و Petrova)
2. تعیین فعالیت کلی میکروبیولوژیکی خاک برای انتشار دی اکسید کربن
3. تعیین فعالیت تقویت کننده خاک
4. تعیین فعالیت آمونیزه کننده میکروارگانیسم ها
5. تعیین فعالیت نیتریفیکاسیون خاک
6. تعیین فعالیت خاکی نیتروژن زدا
7. تعیین فعالیت تثبیت کننده نیتروژن میکروارگانیسم ها
فصل چهاردهم مطالعه باکتری ها در ناحیه ریشه گیاهان و روی ریشه ها
1. شمارش باکتری ها در ریزوسفر با استفاده از روش کراسیلنیکوف
2. در نظر گرفتن ریزوسفر و میکرو فلورای ریشه با روش شستشوی پی در پی ریشه مطابق E. 3. Tepper
3. جداسازی فرهنگهای خالص باکتریهای گره ای ، حسابداری کمی در خاک ، تعیین فعالیت آنها و حدت
فصل پانزدهم تجزیه و تحلیل آماده سازی باکتریایی
فصل شانزدهم میکروبیولوژی خوراک
1. میکروفلور اپی فیتیک دانه و تغییر آن در حین نگهداری خوراک
2. تجزیه و تحلیل سیلو
3. خوراک مخمر
فصل هفدهم میکرو فلورای شیر و محصولات لبنی
1. تجزیه و تحلیل باکتریولوژیکی شیر
2. روشهای جداسازی باکتریهای اسید لاکتیک در کشت خالص
3. آشنایی با میکرو فلورای کره
فهرست ادبیات

رونوشت

1 وزارت آموزش و پرورش و علوم فدراسیون روسیهآژانس فدرال آموزش دانشگاه دولتی مهندسی محیط زیست مسکو N.A. Kustova روشهای آزمایشگاهی در میکروبیولوژیک مسکو 2005

2 کارگاه آزمایشگاهی در زمینه میکروبیولوژی برای دانشجویان تخصصهای 3207 و 3302 در رشته "مبانی میکروبیولوژی و بیوتکنولوژی" و همچنین برای دانشجویان گروه بیوتکنولوژی محیطی و صنعتی در رشته "میکروبیولوژی محیطی و صنعتی" در نظر گرفته شده است. این کارگاه به سه بخش تقسیم شده است. بخش اول به مسائل میکروبیولوژی عمومی اختصاص دارد. آثار این بخش ساختار مورفولوژیکی گروههای مختلف میکروارگانیسمها ، روشهای بررسی میکروسکوپی ، تکنیک تلقیح میکروبیولوژیکی ، روشهای عقیم سازی و روشهای حسابداری کمی میکروارگانیسمها را مورد مطالعه قرار می دهد. بخش دوم شامل کارهایی در مورد استفاده از میکروب ها در بیوتکنولوژی برای به دست آوردن مواد مختلف اسیدهای آلی ، الکل ها ، آنتی بیوتیک ها ، آنزیم ها است. در آثار بخش سوم ، سوالات میکروبیولوژی اکولوژیکی مورد مطالعه قرار گرفته است. برخی از آثار نقش میکروارگانیسم ها را در چرخه های بیوژئوشیمیایی جهانی نشان می دهند و بقیه به مشکلات حفاظت زیست محیطی بیوتکنولوژیکی اختصاص داده شده است. هر مبحث شامل یک مقدمه نظری و یک قسمت عملی است که روش های مورد استفاده ، روش انجام کار ، محتوای گزارش کار ، و همچنین سوالات کنترلی را شرح می دهد. 2

3 پیش نویس کارگاه آزمایشگاهی میکروبیولوژی برای دانش آموزان سال سوم تخصص های 3207 و 3302 در رشته "مبانی میکروبیولوژی و بیوتکنولوژی" و همچنین برای دانشجویان سال چهارم گروه بیوتکنولوژی محیط زیست و صنایع ، تخصص "حفاظت از محیط زیست بیوتکنولوژی" در نظر گرفته شده است. "در رشته" میکروبیولوژی محیطی و صنعتی ". کارگاه آزمایشگاهی بر اساس "دستورالعمل روش شناسی برای کار آزمایشگاهی" ، ویرایش شده است. PI Nikolaev ، که از زمان ایجاد بخش در بخش "فرآیندها و دستگاههای تولید میکروبیولوژیکی" استفاده می شد. در آموزش میکروبیولوژی هنگام آموزش مهندسین صنعت میکروبیولوژی ، سهم بزرگی توسط محقق ارشد ، Ph.D. N.V. Pomortseva. دستورالعمل های روش شناختی تحت رهبری وی تهیه شد دانشگاهیانبخش ها: M.A. Boruzdina ، I.E. Lomova ، N.A. Kustova ، T.A. Makhotkina و K.A. Solovieva. تغییر دادن برنامه درسیمطابق با تخصص جدید مهندس محیط زیست ، نیاز به گسترش دوره میکروبیولوژی و تکمیل آن با وظایف روشهای بیوتکنولوژی حفاظت از محیط زیست ایجاد شده است. کارگاه آزمایشگاهی به سه بخش تقسیم شده است. بخش اول به میکروبیولوژی عمومی اختصاص دارد: ریخت شناسی میکروارگانیسم ها ، روشهای مطالعه آن ، تکنیک محصولات میکروبیولوژیکی ، روشهای حسابداری کمی میکروارگانیسم ها. بخش دوم نمونه هایی از استفاده از میکروب ها در صنعت را پوشش می دهد. بخش سوم مسائل زیست محیطی میکروارگانیسم ها ، نقش آنها در چرخه جهانی عناصر و همچنین روشهای بیوتکنولوژیکی حفاظت از محیط زیست را پوشش می دهد. دانشجوی کارشناسی ارشد گروه N.V. Zyabreva و محقق ارشد در تهیه این کارگاه شرکت کردند. E.S. Gorshina. نویسنده قدردانی عمیق خود را از Assoc. بخش میکروبیولوژی MSU N.N. Kolotilova برای نظرات و توصیه های ارزشمند ، و همچنین محقق ارشد. P.P Makeev برای کمک او در قالب بندی متن و مطالب گویا. 3

4 4 قوانین عمومی برای کار در آزمایشگاه میکروبیولوژیکی قوانین کار و رفتار در آزمایشگاه قوانین کار و رفتار در آزمایشگاه میکروبیولوژیکیاشتراکات زیادی با قوانین کار در آزمایشگاه های شیمیایی دارد ، اما ویژگی های خاص خود را دارد. در بیشتر موارد ، یک میکروبیولوژیست با کشت خالص میکروارگانیسم ها کار می کند ، به عنوان مثال. با میکروارگانیسم های هر جنس ، گونه و گونه. از آنجا که میکروب های خارجی روی همه اجسام اطراف و در هوا وجود دارد ، از روشهای خاصی برای کار برای جلوگیری از آلودگی فرهنگ مورد مطالعه میکروارگانیسم یا خود شخص استفاده می شود. برای این منظور ، محیط کشت ، ظروف ، وسایل استریل می شوند ، آزمایشگاه و محل کار تمیز نگه داشته می شود و هنگام کار با میکروب ها قوانین خاصی رعایت می شود. نباید موارد غیر ضروری در آزمایشگاه وجود داشته باشد. تمیز کردن مرطوب باید به طور مرتب انجام شود. سطوح مختلف اتاقهای آزمایشگاه به صورت دوره ای ضد عفونی می شوند. گندزدایی ضد عفونی است ، یعنی از بین بردن عوامل بیماری زای عفونی در محل ها محیط خارجی... برای این کار از محلول 0.5 تا 3 درصد کلرامین یا محلول فنل 35 درصد (کاربولیک اسید) استفاده کنید. میز کار باید با محلول 70٪ اتیل یا ایزوپروپیل الکل ضد عفونی شود. ضدعفونی هوا با تهویه ساده (حداقل دقیقه) انجام می شود. یک روش م moreثرتر برای ضدعفونی هوا ، تاباندن اتاق با اشعه ماوراء بنفش با استفاده از لامپ های میکروب کش است. اشعه ماوراء بنفش اغلب برای استریل کردن جعبه استفاده می شود. بوکس یک اتاق کوچک ویژه برای تلقیح فرهنگ های خالص ، ثبت کمی میکروارگانیسم ها روی ظروف پتری و برخی کارهای دیگر است که نیاز به شرایط خاصی دارد. قبل از کار ، جعبه به مدت حداقل تابش می شود. میز با الکل پاک می شود ، دیوارها و کف به صورت دوره ای شسته می شوند. آزمایشگاهها می توانند به جای جعبه مجهز به کابینتهای جریان آرام (شکل 1) باشند که با لامپهای ضد باکتری نیز استریل شده اند. در

در حین کار ، یک فن روشن می شود تا یک جریان آرام هوای استریل که از فیلترهای ضد باکتری عبور می کند ایجاد شود. تجهیزات اصلی آزمایشگاه میکروبیولوژیکی شامل: میکروسکوپ ، ترموستات برای رشد میکروارگانیسم ها ، تجهیزات استریلیزاسیون (اتوکلاو و کابینت خشک کن) ، سانتریفیوژها ، دستگاه تقطیر ، یخچال برای نگهداری از میکروارگانیسم های موزه ای ، کابینت برای قرار دادن ظروف شیشه ای و معرف ها ، ابزار لازم (فوتوالکتریک رنگ سنج ، pH -متر و غیره). به هر دانش آموز محل کار اختصاص داده می شود: میکروسکوپ با روکش ، حلقه باکتریولوژیکی ، اسلاید و اسلایدهای روکش ، پیپت های استریل ، مشروب الکلی ، نوارهای کاغذ فیلتر ، نشانگر روی شیشه ، ظرفی با مایع ضدعفونی کننده به نباید چیزی روی میز باشد که ارتباط مستقیم با عملکرد کار نداشته باشد. در کلاسهای آزمایشگاهی میکروبیولوژی ، قوانین ایمنی باید رعایت شود. پنج

6 6 اطلاعات مختصر در مورد ایمنی در آزمایشگاه در عمل میکروبیولوژیکی ، ظروف شیشه ای ساخته شده از شیشه شیمیایی به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرد. هنگام کار با آن باید مراقبت کرد. تکه های ظروف شکسته را با دقت بردارید. در تجزیه و تحلیل ، اغلب از محلولهای قوی قلیاها و اسیدها استفاده می شود. شما باید با دقت زیادی با آنها کار کنید ، زیرا این مواد برای پوست دست و لباس مضر هستند. اگر اسید به طور تصادفی ریخته شود ، باید آن را با مقدار زیادی سودا پوشانده و سپس چندین بار با آب شستشو دهید. قلیای ریخته شده باید کاملاً پاک شود و اجسامی که به آن رسیده است باید با محلول ضعیف استیک اسید درمان شود. در صورت تماس اسیدها یا قلیاها با پوست انسان ، باید بلافاصله با آب فراوان شسته شود. آزمایشگاه میکروبیولوژیکی با میکروارگانیسم های زنده سروکار دارد. کار اصلی استریل انجام می شود ، به عنوان مثال کار با یک فرهنگ میکروارگانیسم ها ، که نباید به میکروب های خارجی آلوده شود. برای جلوگیری از آلودگی محصولات زراعی ، از روشهای خاص عقیم سازی استفاده می شود. همچنین تمیز نگه داشتن آزمایشگاه بسیار مهم است. ظروف حاوی کشت میکروارگانیسم ها نباید باز گذاشته شوند. زیست توده میکروارگانیسم ها ، در صورت عدم نیاز به تجزیه و تحلیل ، تنها پس از عقیم سازی در اتوکلاو دور ریخته می شود. محصولات میکروارگانیسم ها در نزدیکی شعله گاز یا مشروب سوز تولید می شوند ، بنابراین باید مراقب سوختگی باشید و مهمتر از همه ، موهای بلند را با دقت بردارید. مشعل فقط در مواقع نیاز باید بسوزد. اگر در حین کاشت ، یک پنبه ، چراغ الکلی یا کاغذ به طور تصادفی آتش گرفت ، آتش را با یک حوله خاموش کنید. برای آتش سوزی های بزرگتر ، از کپسول آتش نشانی استفاده می شود. پیپت ، اسلاید ، روکش ، کاردک و ... استفاده می شود. در ظرفی با مایع ضدعفونی کننده قرار می گیرد. دانش آموزان باید دائماً به خاطر داشته باشند که با میکروارگانیسم هایی سروکار دارند که ممکن است همیشه ایمن نباشند ، به ویژه در کار جداسازی میکروب ها از اجسام محیطی. بنابراین ، در پایان درس ، دانش آموزان باید محل کار را مرتب کرده و دستان خود را با آب و صابون بشویند.

7 در صورت قطع برق ، وسایل برقی و منبع تغذیه متمرکز آنها را خاموش کنید. بخش 1. موضوع میکروبیولوژی عمومی 1. ریخت شناسی میکروارگانیسم ها و روش های مطالعه آن میکروبیولوژی موجودات اندازه کوچک را مورد مطالعه قرار می دهد. با میکرومتر یا کسری از میکرومتر اندازه گیری می شود. یک میکرومتر برابر با 10-6 متر است و به اختصار میکرون نامیده می شود. میکروارگانیسم ها با متابولیسم شدید مشخص می شوند و قادر به انجام انواع تغییرات شیمیایی هستند. میکروارگانیسم های مختلف از نظر ساختار و فرایندهای بیوشیمیایی که انجام می دهند متفاوت هستند. ترکیب آنها در یک گروه نه تنها به دلیل اندازه کوچک آنها ، بلکه به دلیل مشترک بودن روشهای کشت و تحقیق نیز ایجاد می شود. برای مطالعه ساختار میکروارگانیسم ها ، ظاهر ، شکل ، اندازه آنها ، برای مطالعه ریخت شناسی میکروارگانیسم ها ، از میکروسکوپ استفاده کنید. کوچکترین ذراتی که در میکروسکوپ های نوری مدرن مشاهده می شوند بیش از 1/3 طول موج نور هستند ، یعنی کمتر از 0.2 میکرون ، که با استفاده از قسمت قابل مشاهده نور دارای طول موج از 0.4 میکرون تا 0.7 میکرون همراه است. شکل میکروسکوپ شکل شکل 2 ظاهر میکروسکوپ MBI-3 را نشان می دهد که در تحقیقات و تحقیقات آموزشی گسترده است. نمونه مورد بررسی روی یک استیج قرار می گیرد و از زیر با اشعه های نوری که از روشن کننده بیرون می آید ، روی آینه می افتد ، سپس از کندانسور عبور کرده و روی نمونه تمرکز می کند ، روشن می شود. قسمتهای اصلی میکروسکوپ: چشمی چشم ، لوله ، یک اتصال چرخشی با اهداف ، یک مرحله با گیره برای آماده سازی ، یک کندانسور ، ماکرو و پیچ میکرو برای تمرکز و در نهایت ، یک سه پایه که همه اینها در آن نصب شده است. 7

8 قبل از میکروسکوپ ، صحت نصب روشنایی را بررسی کنید (مطابق با Koehler). برای انجام این کار ، با نگه داشتن نگهدارنده لامپ با یک لامپ ، آنها به یک تصویر واضح از نخ 8 دست می یابند

9 شعله لامپ بر روی دیافراگم کاملاً بسته کندانسور به طوری که این تصویر به طور کامل سوراخ کندانسور را پر می کند. پس از بستن دیافراگم روشن کننده ، بازکردن دیافراگم کندانسور و حرکت دادن کندانسور ، به یک تصویر واضح از دیافراگم روشن کننده در زمینه دید میکروسکوپ دست پیدا کنید. به طوری که نور روشن چشم ها را کور نکند ، ابتدا رشته لامپ کاهش می یابد. و در نهایت ، تصویر سوراخ دیافراگم در مرکز میدان دید تنظیم می شود و دیافراگم روشن کننده باز می شود به طوری که کل میدان دید روشن می شود. میکروسکوپ یک سیستم نوری با دو مرحله بزرگنمایی است: بزرگنمایی اول توسط هدف انجام می شود ، دوم توسط چشمی. این لنز یک عکس معکوس بزرگتر از جسم را ارائه می دهد که از طریق چشمی مشاهده می شود. در نتیجه ، چشم ناظر تصویری معکوس از جسم را بسیار بزرگنمایی می کند. بنابراین ، حرکت جسم به چپ توسط چشم به عنوان حرکت به راست درک می شود. بزرگنمایی کلی میکروسکوپ ، یعنی بزرگنمایی که در آن یک جسم زیر میکروسکوپ مشاهده می شود به عنوان محصول بزرگنمایی هدف و چشمی تعریف می شود. اهداف بزرگنمایی 10 ، 40 ، 60 ، 90 بار ، در بعضی مواقع چشمان چشم را افزایش می دهند. اگر از ضمیمه دو چشمی استفاده شود ، بزرگنمایی بیشتری را فراهم می کند. در شکل 3 یک نمودار کلی از سیستم نوری میکروسکوپ را نشان می دهد. هدف O در صفحه Z یک تصویر وارونه واقعی A از شی A. شکل می دهد. تصویر ارائه شده توسط لنز با کمک چشمی E بیشتر بزرگ می شود. از آنجا که Z در کانون چشمی E قرار دارد ، ناظر تصویر مجازی بزرگ شده A را در صفحه X ، که معمولاً در فاصله 25 سانتی متری از چشم قرار دارد ، یعنی در فاصله ای که برای دید نزدیک مناسب است. باید در نظر داشت که چنین ایده ای در مورد مکانیسم شکل گیری تصویر وجود دارد بالاترین درجهساده شده ، زیرا تأثیر پراش و تعدادی از عوامل دیگر را نادیده می گیرد. در کار با میکروسکوپ ، دانش آموزان آماده سازی میکروب ها را با بزرگنمایی در زمان مطالعه می کنند. بیشترین بزرگنمایی توسط میکروسکوپ نوری 3000 برابر است. کوچکترین اندازه ذره ای که در چنین میکروسکوپی قابل مشاهده است 9

10 برابر 0.2 میکرومتر است که به دلیل طول موج قسمت قابل مشاهده طیف است. مورفولوژی میکروارگانیسم ها جهان میکروارگانیسم ها شامل انواع بسیار زیادی از اشکال است که یک گروه سیستماتیک واحد را تشکیل نمی دهند. اشیاء اصلی میکروبیولوژی باکتری ها هستند ، اما علاوه بر آنها ، میکروبیولوژیست ها مخمر ، قارچ ها ، جلبک های میکروسکوپی و برخی از تک یاخته ها را نیز مطالعه می کنند. در شکل 4 گروههای اصلی میکروارگانیسم ها (به استثنای تک یاخته ها) را نشان می دهد. نسبت اندازه آنها حفظ می شود. همه موجودات زنده بجز ویروسها دارای آن هستند ساختار سلولی... مطابق با ساختار سلولی آنها ، آنها به پروکاریوتی و یوکاریوتی تقسیم می شوند. 10

11 تفاوت اصلی یوکاریوتها و پروکاریوتها وجود حفره های ثانویه است که هسته و سایر ساختارهای سلولی را از سیتوپلاسم جدا می کند. این ظاهر حفره های ثانویه بود که به دلیل افزایش سطح داخلی غشاهای یوکاریوتی امکان ایجاد جهش در تکامل کل جهان را فراهم کرد. این امر ، مطابق با افزایش نرخ انتشار ، امکان انجام همزمان تعداد بیشتری از واکنش های بیوشیمیایی روی غشاها را فراهم کرد. پروکاریوت ها باکتری هایی از جمله اکتینومایست ها و سیانوباکتری ها هستند. یوکاریوت ها همه گیاهان ، حیوانات ، مخمر ، قارچ ها ، تک یاخته ها هستند. در میان پروکاریوتها ، گروهی از باکتریها در حال حاضر متمایز هستند که شامل متانوژنها ، هالوفیلهای شدید (در آب بسیار شور زندگی می کنند) باکتریهای بسیار گرمازا که گوگرد مولکولی را اکسید کرده و کاهش می دهند ، و همچنین ترموپلاسماها ، عاری از دیواره سلولی. تقسیم جدید بر اساس مقایسه توالی های نوکلئوتیدی در قطعات کوچک RNA ریبوزومی انجام شد. یازده

12 Archaebacteria از نظر ترکیب دیواره های سلولی ، لیپیدها و برخی دیگر از ویژگی های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی متفاوت هستند (به عنوان مثال ، آنها مکانیسم متفاوتی برای تثبیت CO2 دارند). بنابراین ، در ساختار سازمان سلولی ، سه گروه در حال حاضر متمایز هستند: archaea (بر اساس نامگذاری جدید Archaea ، archaea) ، eubacteria (بر اساس نامگذاری جدید باکتریها ، باکتریها) و یوکاریوتها (طبق نامگذاری جدید از یوکاریا). کار 1. مطالعه میکروسکوپی باکتریها مورفولوژی باکتریها مقدمه نظری این گروه از میکروارگانیسم ها بیشترین ، گسترده ترین در طبیعت هستند و از اهمیت صنعتی بالایی برخوردارند. برای نامگذاری میکروارگانیسم ها ، از نامگذاری دوتایی ، مانند جانورشناسی و گیاه شناسی استفاده می شود. مطابق با این نامگذاری ، هر گونه دارای نامی است که از دو کلمه لاتین تشکیل شده است. کلمه اول به معنی جنس و نوع دوم است. نام عمومی همیشه با حروف بزرگ و نام خاص با حروف کوچک نوشته می شود. بیشتر باکتری ها موجودات تک سلولیکروی ، میله ای شکل یا پیچ خورده. تعداد کمی از فرم های رشته ای در بین باکتری ها وجود دارد. باکتریها بسیار کوچک هستند ، قطر سلول باکتریهای کروی 1 2 میکرومتر است. باکتری ها با تقسیم تکثیر می شوند (در شرایط مطلوب ، تقسیم در عرض چند دقیقه اتفاق می افتد). برخی از باکتری ها متحرک هستند. توانایی حرکت با وجود اندامکهای مخصوص تاژک ارتباط دارد. ساده ترین شکل آنها باکتری های کروی (کوکوس) هستند. آنها یا به صورت توپ های تک یا توپ های متصل به هم ملاقات می کنند. با توجه به محل قرارگیری سلولها پس از تقسیم ، باکتریهای کروی به مونوکوک (تک کوک) ، تتراکوک (با 4 ترکیب) ، سارسین (با 8 ترکیب) ، استافیلوکوک (خوشه) ، استرپتوکوک (زنجیره کوک) تقسیم می شوند. 12

13 باکتری های میله ای شکل بزرگترین گروه باکتری ها هستند. آنها دارای شکل سلول استوانه ای با انتهای گرد یا نوک تیز هستند و نسبت طول به عرض آنها بسیار متفاوت است. آنها می توانند به صورت جداگانه قرار بگیرند یا زنجیرهای کوتاه یا بلند ایجاد کنند. میله ها می توانند دارای طول های مختلف ، معمولاً چند میکرون و عرض حدود 1 میکرون باشند. برخی از باکتری های میله ای شکل بدن های اسپور خاصی را در داخل سلول تشکیل می دهند. هر سلول یک اسپور تشکیل می دهد که برای تحمل شرایط نامساعد مفید است. اسپور در شرایط مناسب (دما ، رطوبت ، مواد مغذی) جوانه می زند و به چوب تبدیل می شود. مقاومت اسپورهای باکتریایی از هر موجود زنده ای برتر است. به عنوان مثال ، اسپور باسیل یونجه Bacillus subtilis می تواند دمای 100 درجه سانتی گراد را به مدت 3 ساعت تحمل کند.این مقاومت در برابر اسپور مبارزه با عفونت ها را دشوار می کند. میکروارگانیسم های پیچ خورده از نظر میزان خمیدگی سلول ها و تعداد چرخش ها متفاوت است. آنها به vibrios ، spirillae و spirochetes تقسیم می شوند. اگر یک باکتری یک حلقه مارپیچ ناقص داشته باشد ، آن را vibrio می نامند. اگر این باکتری دارای چندین حلقه مارپیچی باشد ، آن را اسپیریلا می گویند و میکروب هایی که دارای شکل فرفری با تعداد زیادی فر کوچک هستند ، اسپیروکت نامیده می شوند. باکتری های رشته ای رشته هایی هستند که از سلول های استوانه ای یا دیسک شکل تشکیل شده اند. برخی از انواع نخ ها در غشای مخاطی قرار دارند که می توانند با هیدروکسید آهن یا نمک های منگنز آغشته شوند. تجمع فلزات سنگین از محلولها در سلولهای برخی از باکتریهای آهن اتفاق می افتد. باکتری های رشته ای بزرگ p. Beggiatoa گوگرد را در سلول های خود ذخیره می کند. باکتری های رشته ای معمولاً در دریا و آبهای شیرین زندگی می کنند ، همچنین در بقایای آلی پوسیده ، در روده حیوانات یافت می شوند. سیانوباکتریها شامل گروه بزرگی از موجودات هستند که ساختار پروکاریوتی سلول را با قابلیت انجام فتوسنتز ترکیب می کنند. رنگدانه های سلولی باکتریایی ، علاوه بر کلروفیل a (سبز) ، حاوی رنگدانه فیکوسیانین 13

14 آبی. به همین دلیل ، آنها قبلاً جلبک سبز-آبی نامیده می شدند. اکثر آنها ارگانیسم های چند سلولی هستند که رشته های بلند و اغلب بدون شاخه (تریکوم) هستند. سلولهای رشته ها با یک دیواره خارجی مشترک متحد می شوند. گاهی اوقات تجمع مخاطی "تشک" ایجاد می شود. تکثیر با شکستن نخ به بخشهای جداگانه انجام می شود. برخی از گونه ها با لغزش حرکت می کنند (ص اسپیرولینا). اکتینومایستها (باکتریهای منشعب ، قارچهای درخشان) گروه بزرگی از میکروارگانیسم های پروکاریوتی هستند که رشته های شاخه ای نازکی به طول چندین میلی متر و قطر 0.5-1.5 میکرومتر را تشکیل می دهند. آنها یک گروه عجیب از میکروارگانیسم ها هستند که از نظر مورفولوژیکی شباهت زیادی به قالب ها دارند (شکل 5). سلولهای بخش قابل توجهی از نمایندگان این گروه قادر به انشعاب هستند که این ویژگی بارز قارچ ها است. با این حال ، طول رشته های شاخه ای اکتینومایست ها به چندین میلی متر می رسد ، در حالی که طول میسلیوم قارچ ها چندین سانتی متر است. هیف قارچ ها معمولاً چندین برابر ضخیم تر از رشته های اکتینومایست ها هستند. با توجه به ریخت شناسی و توسعه ، اکتینومایست ها به اشکال بالا و پایین تقسیم می شوند. بالاترین موجوداتی هستند که دارای 14 خوب هستند

15 میسلیوم سپتیک یا غیر سپتیک و اندامهای اسپوراسیون ویژه ایجاد کردند. اسپورها به شکل زنجیر روی هیف های حامل اسپور میسلیوم هوایی شکل می گیرند. ساختار اندامهای اسپور در گونه های مختلف متفاوت است: بلند یا کوتاه ، مستقیم یا مارپیچ (شکل 6). با وجود میسلیوم و ساختار اندامهای اسپور ، اکتینومایستهای بالاتر شبیه قارچهای رشته ای هستند. برخی از اکتینومایستها فقط در فرهنگ جوان دارای میسلیوم هستند که با افزایش سن تجزیه می شود و سلولهای میله ای شکل و کوکوئیدی ایجاد می کند. اشکال پایینی اکتینومایست ها میسلیوم واقعی ندارند. توانایی تشکیل میسلیوم در آنها فقط در تمایل سلولها به انشعاب بیان می شود. اکتینومایستهای پایینی شامل ، برای مثال ، گونه هایی از جنس Mycobacterium هستند که با تغییر سن توانایی تغییر شکل سلولها را دارند (شکل 7). این ویژگی پلئومورفیسم نامیده می شود. در میان اکتینومایستهای بالاتر ، گونه های جنس Streptomyces از نظر فراوانی در محیط های طبیعی مقام اول را به خود اختصاص می دهند. Actinomycetes نقش مهمی در 15 فرآیند ایفا می کند

16 تشکیل خاک و ایجاد حاصلخیزی خاک. اکتینومایست ها ترکیبات آلی پیچیده (سلولز ، هوموس ، کیتین ، لیگنین و ...) را که برای بسیاری از میکروارگانیسم های دیگر قابل دسترسی نیست ، از بین می برند. تقریباً همه گونه های جنس Streptomyces مواد زائد خاصی را با خواص آنتی بیوتیکی تشکیل می دهند. برخی از گونه ها عامل بیماری های گیاهان ، حیوانات و انسان ها هستند. علاوه بر اشکال اصلی باکتری ها ، باکتری های ساقه ای و جوانه ای که رشد می کنند ، وجود دارند که پروتز نامیده می شوند. (شکل 8) 16

17 عملکرد بخیه ها متفاوت است. در برخی از باکتری ها ، آنها برای تولید مثل ، در برخی دیگر برای اتصال سلول به بستر عمل می کنند. 17

18 18 بخش عملی هدف کار مطالعه مورفولوژی نمایندگان باکتریها روش انجام کار است. انجام اولین کار ، دانش آموزان نحوه استفاده از میکروسکوپ را یاد می گیرند ، به آماده سازی های نهایی نمایندگان باکتری ها نگاه می کنند ، سپس به طور مستقل آماده سازی را آماده می کنند باکتری های زنده و میکروسکوپ آنها ابتدا دانش آموزان آماده سازی آماده میکروسکوپی آماده باکتری ها را انجام می دهند. آماده سازی های ثابت میکروارگانیسم هایی هستند که در یک محیط آبی معلق شده ، روی یک اسلاید شیشه ای خشک شده و با رنگ های آنیلین رنگ آمیزی می شوند. دانش آموزان آماده سازی برخی از میکروارگانیسم های زنده را به تنهایی آماده می کنند. برای انجام این کار ، یک قطره کوچک از آب لوله کشی به یک سرسره شیشه ای تمیز اعمال می شود ، که مقدار کمی از میکروبهای مورد مطالعه با حلقه باکتریولوژیکی کلسین شده و سرد شده وارد آن شده ، کاملاً هم زده و با شیشه ای پوشانده می شود. آب اضافی با کاغذ صافی برداشته می شود. نمونه روی صحنه قرار می گیرد و با گیره محکم می شود. ابتدا ، با نگاه به چشمی و چرخاندن ماکروسکرو ، به تصویری واضح از جسم در بزرگنمایی کم با هدف 10 برابر دست می یابیم. سپس میکروسکوپ با بزرگنمایی زیاد با هدف 40x به بزرگنمایی بالا منتقل می شود. چرخاندن پیچ ها باید با احتیاط انجام شود ، زیرا اگر قسمت پایین بسیار تیز باشد ، لنزها را می توان با هدف خرد کرد. هنگام میکروسکوپی ، باید در نظر داشت که میکروسکوپ ، به ویژه در بزرگنمایی زیاد ، تمام عمق جسم را نمی گیرد ، بنابراین ، هنگامی که لوله به تدریج با کمک یک میکرو اسکرو پایین می رود ، شیء ابتدا از بالا مشاهده می شود ، و سپس در یک بخش نوری. 1. مشاهده آماده سازی های ثابت میکروارگانیسم ها. عامل تخمیر لاکتوکوکوس لاکتیس اسید لاکتیک ؛ شکل سلولها کوکهای کروی است. سلول ها به صورت زنجیره ای به هم متصل شده اند. برای به دست آوردن محصولات اسید لاکتیک استفاده می شود.

19 Lactobacillus acidophilum باکتری های میله ای ؛ عامل ایجاد تخمیر اسید لاکتیک برای به دست آوردن محصولات اسید لاکتیک استفاده می شود. استوباکتر استی باکتری های میله ای شکل هستند که اتانول را به اسید استیک اکسید می کنند. برای تهیه سرکه خوراکی استفاده می شود. Streptomyces griseus actinomycete ، شکل سلول به شکل رشته های شاخه ای نازک ؛ تولید کننده آنتی بیوتیک استرپتومایسین Saccacharopolyspora erythrae actinomycete ، شکل سلول به شکل رشته های نازک شاخه ای ؛ تولید کننده آنتی بیوتیک اریترومایسین 2. مشاهده آماده سازی زنده سلولهای باسیلوس سابتیلیس به شکل میله های متحرک نازک. اسپور ایجاد می کند ؛ تولید کننده آماده سازی آنزیمی سیانوباکتریا Spirulina platensis ؛ شکل سلولها به شکل یک نخ ، شامل سلولهای استوانه ای ، محکم در مجاورت یکدیگر ؛ حرکت کشویی دارد به عنوان افزودنی غذایی استفاده می شود. محتویات گزارش 1. نام لاتین میکروارگانیسم. 2. مورفولوژی سلول (یک نقشه نشان دهید که بزرگنمایی میکروسکوپ را نشان می دهد و نسبت اندازه سلول را حفظ می کند). 3. استفاده از باکتریهای مورد مطالعه در صنعت. سوالات آزمون 1. طرح میکروسکوپ را توضیح دهید. 2. چگونه می توان بزرگنمایی میکروسکوپ را تعیین کرد؟ 3. شکل سلولهای باکتری چگونه است. 4- ویژگی های مورفولوژی اکتینومایست ها را نام ببرید. 5- چه نماینده باکتری ها را می شناسید و آنها چیست اهمیت عملی؟ کار 2. مورفولوژی میکروارگانیسم های یوکاریوتی مقدمه نظری 19

20 میکروارگانیسم های یوکاریوتی که توسط میکروبیولوژیست ها مورد مطالعه قرار گرفته اند شامل قارچ ها ، مخمرها ، ریزجلبک ها و برخی تک یاخته ها هستند. ریخت شناسی قارچ ها قارچ ها میکروارگانیسم های فاقد کلروفیل با سلول های رشته ای هستند. رشته های بلند و منشعب آنها را هیف می نامند. هیف ها با هم میسلیوم را تشکیل می دهند. از نظر اندازه ، هیف های قارچی بسیار بزرگتر از اکتینومایست ها هستند. میسلیوم در تعدادی از قالبها با سپتوم (میسلیوم سپتات) تقسیم می شود ، در حالی که انواع دیگر سپتوم وجود ندارد. در بیوتکنولوژی ، قالب ها عمدتا به عنوان تولید کننده استفاده می شوند. برخی از نمایندگان phycomycetes ، marsupials و قارچهای ناقص را "قارچ های قالب" می نامند. روی بسترهای متراکم ، قالب ها مستعمرات گرد ، کرکی ، تار عنکبوت ، پنبه مانند یا پودری به رنگ سبز ، زرد ، سیاه یا سفید ایجاد می کنند. مستعمرات کپک از تعداد زیادی هیف تشکیل شده است. بیشتر هیف ها در هوا و برخی دیگر در ضخامت بستر ایجاد می شوند. کونیدیوفورها اغلب روی هیف ها شکل می گیرند که بر روی آنها هاگ ها یا در داخل اسپورانژیوم یا به شکل اگزوسپورهایی که به صورت زنجیره ای مرتب شده اند ، ایجاد می شوند. Conidiespores یا conidia ، خدمت می کند تولید مثل غیر جنسی(شکل 10). Conidia ، با قرار گرفتن در شرایط مطلوب ، به میسلیوم جوانه می زند. قالبها در طبیعت بسیار گسترده هستند و دارای دستگاه آنزیمی قوی هستند. بنابراین ، آنها تخریب کننده اصلی ترکیبات آلی در طبیعت هستند. قالب ها همچنین به طور گسترده ای در صنعت برای تولید اسیدهای آلی ، آنتی بیوتیک ها و آنزیم ها مورد استفاده قرار می گیرند. بیست

21 مورفولوژی مخمر مخمر گروه جداگانه ای از قارچ های میکروسکوپی تک سلولی است که از نظر عملی بسیار اهمیت دارد. سلولهای مخمر سلولهای بزرگ گرد یا بیضی شکل هستند (شکل 11). برخی مخمرها می توانند یک میسلیوم ابتدایی به نام pseudomycelium تشکیل دهند. اندازه سلول از 3 تا 10 میکرومتر طول و 2 تا 8 میکرومتر عرض دارد. اکثر مخمرها با جوانه زدن تکثیر می شوند. علاوه بر این ، در 21

در سطح سلول ، یک برآمدگی کوچک از کلیه ظاهر می شود (گاهی اوقات نه یک ، بلکه چندین) ، که به تدریج در اندازه افزایش می یابد و در نهایت ، از سلول تولید کننده آن جدا می شود. کلیه جدا شده از سلول مادر به یک سلول مخمر جدید تبدیل می شود. مقداری مخمر با تقسیم ضرب می شود. واکوئل های بزرگ به وضوح در محتویات ریز دانه مخمر زنده (پروتوپلاسم) قابل مشاهده است. واکوئل ها حفره هایی در داخل پروتوپلاسم هستند که با شیره سلولی پر شده اند. از الکترولیت ها ، پروتئین ها ، کربوهیدرات ها و آنزیم های محلول در آب تشکیل شده است. در سلولهای مخمر جوان ، پروتوپلاسم همگن است و در مراحل بعدی توسعه ، واکوئلها در پروتوپلاسم پر از شیره سلولی با محصولات متابولیک ظاهر می شوند. هنگامی که محیط مغذی تخلیه می شود ، اسپوراسیون در بسیاری از مخمرها رخ می دهد. در برخی از گونه های مخمر ، هاگ ها گرد هستند و با پوسته ای صاف پوشانده شده اند. در شرایط مساعد ، اسپورها جوانه می زنند. مخمر در طبیعت گسترده است. آنها روی انگور ، سایر انواع توت ها و میوه ها ، شیر ، آب و خاک و پوست انسان یافت می شوند. بسیاری از مخمرها تخمیر الکلی انجام می دهند و برای تولید الکل در نانوایی ، شراب سازی و دم کردن مورد استفاده قرار می گیرند. 22 مورفولوژی تک یاخته ها تک یاخته ها موجودات تک سلولی دنیای حیوانات هستند. در بین میکروارگانیسم ها ، آنها پیچیده ترین هستند و دارای اندام های اولیه مشخصه حیوانات چند سلولی هستند. برخی از آنها دارای دهان و مقعد ، واکوئل های انقباضی و گوارشی هستند. تک یاخته ها به صورت غیرجنسی (با تقسیم سلولی) و به صورت جنسی تولید مثل می کنند. طبقه بندی تک یاخته ها بر اساس حالتهای حرکت است. 1. سارکدها. آنها با استفاده از pseudopodia یا پاهای کاذب غذا را حرکت می دهند و می گیرند. آمیب یک نماینده معمولی است. اندازه آمیب ها از میکرون تجاوز نمی کند.

23 2. پرچم دار. آنها غشای پلاسمایی متراکمی دارند و با کمک تاژک حرکت می کنند. اشکال خاک تاژک بسیار کوچک (25 میکرومتر) و اشکال آب بزرگ (تا 20 میکرومتر) است. نماینده معمولی اوگلنا است. 3. سلیاری. سازماندهی شده ترین تک یاخته ها اندازه سلولها بین 20 تا 80 میکرون است. یک نماینده معمولی پارامسیوم کفش مژک دار است که برای تغذیه بچه ماهی پرورش داده می شود. 4. Sporozoans. فرم های ثابت بسیاری از عوامل بیماری زا مانند مالاریای پلاسمودیوم. تک یاخته ها در طبیعت گسترده هستند. آنها در اجسام آبی ، لجن و خاک یافت می شوند. معنای تک یاخته ها در طبیعت بسیار متنوع است. آنها در دستگاه گوارش حیوانات مختلف زندگی می کنند ، در هضم غذاهای گیاهی شرکت می کنند ، در کانی سازی بقایای آلی در خاک شرکت می کنند و همچنین بخش مهمی از بیوسنوز در امکانات درمانی هستند. با تغذیه از باکتری ها و جامدات معلق ، آنها به شفافیت آب کمک می کنند. ساده ترین آنها عملکرد شاخص ها را انجام می دهند: با توسعه اشکال خاص ، می توان کیفیت تصفیه فاضلاب را قضاوت کرد. بنابراین ، غلبه آمیب ها و عدم وجود مژک در لجن فعال نشان دهنده عملکرد ضعیف امکانات تصفیه است. Tetrahymena مژگانی به طور گسترده ای برای استفاده می شود ارزیابی اولیهسمیت انواع مختلف تک یاخته ها در شکل نشان داده شده است. 12. ریخت شناسی جلبک ها جلبک ها گروه بزرگی از موجودات گیاهی هستند. برای همه آنها وجود کلروفیل و تغذیه فوتوتوتروفی حاصل از آن ، توانایی سنتز مواد آلی با استفاده از انرژی نور خورشیدو دی اکسید کربن در بسیاری از جلبک ها ، رنگ سبز کلروفیل توسط رنگدانه های دیگر پوشانده شده است. در میان آنها ، اشکال بسیار کوچک تک سلولی و چند سلولی نسبت داده شده به میکروارگانیسم ها وجود دارد ، و همچنین 23

24 موجود زنده چند سلولی که در دریاها و اقیانوس ها زندگی می کنند و گاهی به اندازه های عظیمی می رسند. موضوعات مورد مطالعه میکروبیولوژی برخی از جلبک ها با اندازه میکروسکوپی هستند. آنها انواع مختلفی دارند و هم در خشکی و هم در محیط آبزی زندگی می کنند (شکل 13). 24

25 بخش عملی هدف کار مطالعه ریخت شناسی نمایندگان گروه های مختلف یوکاریوت ها است. روش انجام کار دانش آموزان به طور مستقل آماده سازی زنده نمایندگان قارچ ها ، مخمرها ، جلبک ها و تک یاخته ها را تهیه می کنند. آنها با هدف x40 میکروسکوپ شده و با نشان دادن بزرگنمایی میکروسکوپ ترسیم می شوند. قالبهای Aspergillus niger سلولهایی را به شکل میسلیوم با سپتوم تشکیل می دهند. برخی از هیف ها دارای conidiophores منشعب با اسپور هستند. کنیدیوفورها تک سلولی ، متورم به شکل کروی هستند ، در سطح تورم سلولهای کوتاهی به شکل پینت (استریگما) وجود دارد که هر کدام از آنها در امتداد زنجیره ای از کنیدی های سیاه رنگ قرار می گیرند. برای به دست آوردن اسیدها و آنزیم های آلی استفاده می شود. هیفی های Penicillium chrysogenum دارای سپتوم هستند. در برخی از هیفها کنیدیوفورهای منشعب با اسپور وجود دارد. کنیدیا در انتهای کنیدیوفورهای شاخه دار شکل می گیرد. برای به دست آوردن آنتی بیوتیک پنی سیلین استفاده می شود. 25

26 مخمر منفرد مخمر Saccharomyces cerevisiae با سلولهای بیضی شکل و گرد. با جوانه زدن تکثیر شود آنها در دم کردن ، پخت ، تولید الکل استفاده می شوند. در طبیعت ، آنها در سطح انواع توت ها و سایر میوه ها یافت می شوند. سلولهای Saccharomyces vini بیضی شکل و گرد هستند. تکثیر با جوانه زدن ؛ پس از جوانه زدن ، آنها برای مدتی جدا نمی شوند و "شاخه" های کوچکی را تشکیل می دهند. از آنها در شراب سازی استفاده می شود. سلولهای Rhodotorula glutinis بیضوی هستند. سلولها مجرد هستند ؛ با جوانه زدن تکثیر شود آنها به دلیل محتوای کاروتنوئیدها در سلولها نارنجی رنگ هستند. می تواند در محیط هایی با هیدروکربن های نفتی به عنوان منبع کربن رشد کند. به عنوان مخمر خوراک استفاده می شود. مخمر Candida tropicalis با سلولهای بیضی شکل و بسیار کشیده و "pseudomycelium" تشکیل می دهد. می تواند در محیط معدنی با هیدروکربن ها به عنوان منبع کربن رشد کند. به عنوان مخمر خوراک استفاده می شود. در مقیاس صنعتی ، آنها در ضایعات ناشی از تولید الکل و کاغذ رشد می کنند. Algae Chlorella vulgaris یک جلبک سبز میکروسکوپی با سلولهای گرد (قطر 5-10 میکرون) است. با اتوسپورها ، که در داخل سلول مادر به مقدار 4 تا 32 تشکیل شده و پس از پارگی غشای آن آزاد می شود ، تکثیر می شود. می توان آنها را برای کشت انبوه به منظور به دست آوردن پروتئین علوفه و همچنین برای بازسازی هوا در سیستم های بسته (زیردریایی ها ، ایستگاه های فضاییو غیره.). Scenedesmus sp. متعلق به گروه جلبک های سبز است. دارای شکل سلول بیضی شکل است ؛ سلولهای خارجی اغلب نوک تیز هستند. سلول ها در چهار قسمت به هم متصل می شوند. برای به دست آوردن پروتئین غذا استفاده می شود. 26

27 پروتوزوآ آماده سازی از لجن فعال مخزن هوادهی تهیه می شود. مورفولوژی تک یاخته های پیدا شده را مطالعه کرده و آنها را ترسیم کنید. محتویات گزارش 4. نام لاتین میکروارگانیسم. 5. مورفولوژی سلول (یک نقشه نشان دهید که بزرگنمایی میکروسکوپ را نشان می دهد و نسبت اندازه سلول را حفظ می کند). 6. استفاده از میکروارگانیسم های مورد مطالعه در صنعت. س questionsالات کنترل 1. شکل سلولهای نمایندگان قارچها و کاربرد عملی آنها را شرح دهید. 2. شکل سلولهای مخمر را شرح دهید. نمایندگان را نام ببرید و در مورد کاربرد عملی آنها توضیح دهید. 3. در مورد ریخت شناسی ریزجلبک ها و کاربرد عملی آنها بگویید. 4. نمایندگان ساده ترین ها را نام ببرید و در مورد کاربرد آنها در بیوتکنولوژی توضیح دهید. کار 3. روشهای مطالعه مورفولوژی میکروارگانیسمها متداول ترین روش برای مطالعه مورفولوژی باکتریها میکروسکوپ آماده سازیهای ثابت تهیه شده از کشتهای خالص میکروارگانیسمها یا از نمونه آزمایش است. مطالعه میکروارگانیسم ها در حالت زنده در مطالعه اشکال بزرگتر و مشاهده تحرک سلولی استفاده می شود. آماده سازی آماده سازی های ثابت میکروارگانیسم ها برای تهیه آماده سازی های ثابت میکروارگانیسم ها ، ابتدا یک اسمیر تهیه ، خشک ، ثابت و سپس رنگ آمیزی می شود. اسمیرها روی سرسره های شیشه ای کاملاً تمیز تهیه می شوند. می توانید شیشه ها را با الکل اتیل ، مخلوطی از حجم مساوی الکل و اتر و 27 عدد دیگر چربی دهید

28 مایع ساده ترین و راحت ترین راه برای چربی زدایی شیشه ها این است که آنها را از هر دو طرف با یک تکه صابون خشک کنید. صابون با یک تکه پشم پنبه خشک یا یک دستمال از شیشه خارج می شود. هنگام ساختن اسمیر از کلونی باکتری های رشد شده روی محیط آگار ، ابتدا یک قطره آب یا نمک بر روی یک لیوان چربی زده استفاده می شود. سپس حلقه باکتریولوژیکی در شعله مشعل مشتعل می شود. پس از آن ، پس از خنک کردن حلقه در دیواره داخلی لوله ، بخشی از کلنی بدون آگار با یک حلقه ضبط می شود. حلقه کشت در یک قطره آب یا نمک بر روی یک لیوان قرار می گیرد و 2 3 حرکت دایره ای انجام می شود. برخی از باکتری ها در مایع معلق هستند. باکتری های اضافی باقی مانده در حلقه در شعله مشعل سوزانده می شوند و حلقه را داغ می کنند. سپس ، با یک حلقه سرد شده ، یک قطره از سوسپانسیون را روی شیشه بمالید. مساحت اسمیر باید 1.5-2 سانتی متر قطر داشته باشد. لکه باید با توزیع یکنواخت مواد نازک باشد. اگر از فرهنگ کشت شده در محیط تغذیه مایع ، یک اسمیر تهیه شود ، با رعایت همان قوانین عقیم بودن ، یک قطره از فرهنگ را با یک حلقه یا پیپت برداشته و آن را در وسط یک لیوان چرب شده بمالید. پیپت باقیمانده فرهنگ در ظرفی با محلول ضدعفونی کننده غوطه ور می شود. قطره به طور مساوی بر روی شیشه با حلقه باکتریولوژیکی توزیع می شود. حلقه در شعله مشعل سوزانده شده و در سه پایه یا شیشه قرار می گیرد. اسمیر در هوا یا در جریان هوای گرم خشک می شود و آن را توسط دنده های طولی بالای شعله مشعل نگه می دارد. مرزهای اسمیر با یک مداد مومی در پشت شیشه مشخص شده است ، و در طرف اسمیر ، در یکی از انتهای لیوان ، تعداد آماده سازی قرار داده شده است. با این علائم ، می توانید به راحتی محل اسمیر روی شیشه را حرکت دهید. اسمیر خشک شده ثابت می شود. تثبیت اهداف زیر را دارد: 1) از بین بردن میکروب ها ، که باعث می شود دارو برای آنها بی خطر باشد کار بیشتر؛ 2) میکروب ها را به شیشه وصل کنید تا هنگام نقاشی و شستشو با آب شسته نشوند. 3) بهبود پذیرش رنگ. 28

29 ساده ترین روش ، تقریباً برای همه اجسام میکروبیولوژیکی و گسترده ترین روش در عمل ، ثابت شدن در شعله مشعل است. برای این کار ، اسلاید 3-4 بار از داغترین قسمت بالایی شعله مشعل عبور داده می شود و از گرم شدن بیش از حد آماده سازی جلوگیری می شود تا باعث تغییر رنگ پروتئین و اختلال در ساختار و مورفولوژی باکتری ها نشود. بین روشهای نقاشی دیفرانسیل ساده و پیچیده تفاوت قائل شوید. رنگ آمیزی ساده برای تشخیص میکروب ها در مواد آزمایش ، برای تعیین تعداد ، شکل و محل آنها استفاده می شود. رنگرزی ساده شامل استفاده از یک رنگ آنیلین تنها به آماده سازی است. بیشتر اوقات ، فوکسین قرمز برای این اهداف و همچنین محلول قلیایی متیلن بلو (آبی لفلر) آبی استفاده می شود. تکنیک رنگ آمیزی: یک نمونه محکم با اسمیر به سمت بالا روی پل شیشه ای بالای حمام قرار می گیرد. یکی از این رنگها با پیپت یا قطره چکان روی سطح اسمیر اعمال می شود. فوکسین به مدت 1 تا 3 دقیقه روی اسمیر و آبی به مدت 3 تا 5 دقیقه نگه داشته می شود. رنگ از اسمیر تخلیه می شود ، آماده سازی با آب شسته می شود ، در هوا خشک می شود یا با کاغذ صافی با دقت لکه گیری می شود. یک قطره روغن غوطه وری روی اسمیر خشک شده اعمال می شود ، آماده سازی روی مرحله میکروسکوپ قرار می گیرد و با هدف غوطه وری (90) در نور منتقل شده ، میکروسکوپ می شود. روشهای افتراقی رنگ آمیزی باکتریها تکنیک های پیچیده رنگ آمیزی در شناسایی و تمایز انواع مختلف میکروب ها ضروری است. آنها بر اساس ویژگیهای ساختار فیزیکوشیمیایی سلول میکروبی هستند و برای مطالعه دقیق ساختار سلول و شناسایی ویژگیهای متمایز در رابطه با برخی از رنگها استفاده می شوند. با استفاده از این روش ها ، اسمیر با چندین رنگ رنگ آمیزی می شود و علاوه بر آن با مواد رنگی یا رنگ برها با الکل ، اسید و ... درمان می شود. این روش ها شامل مهمترین روش رنگ آمیزی برای تمایز باکتری ها ، رنگ آمیزی گرم است. این روش 29 را نشان می دهد

توانایی باکتری ها برای حفظ رنگ یا تغییر رنگ در الکل ، که مربوط به ساختار شیمیایی دیواره سلولی است. با توجه به ساختار دیواره سلولی ، همه باکتری ها به دو گروه تقسیم می شوند: 1) رنگ آمیزی گرم مثبت بر حسب گرم و 2) گرم منفی بودن عدم رنگ آمیزی بر اساس گرم. نگرش نسبت به رنگ آمیزی گرم از ویژگیهای مهم تمایز باکتری ها است که هنگام مشخص کردن آنها لزوماً ذکر می شود و به عنوان یک ویژگی طبقه بندی عمل می کند. تکنیک رنگ آمیزی 30 گرم نوار کاغذ صافی که از قبل با بنفشه جنتیان آغشته شده است روی اسمیر ثابت قرار می گیرد. 3-5 قطره آب لوله کشی به نوار بمالید. پس از 1-2 دقیقه ، کاغذ با موچین برداشته می شود و محلول لوگول روی آماده سازی ریخته می شود. پس از 30 ثانیه و 1 دقیقه ، محلول لوگول ریخته می شود. چند قطره الکل 96 O استفاده می شود. تا 1 دقیقه رنگ ناپدید می شود تا رگه های بنفش خاکستری مایل به زرد از بین برود. آماده سازی با آب شسته می شود. فوکسین را روی اسمیر می ریزند و 1 2 دقیقه نگه می دارند. رنگ تخلیه می شود ، آماده سازی با آب شسته می شود ، با کاغذ صافی خشک می شود. میکروسکوپی با سیستم غوطه وری. رنگ باکتریهای گرم مثبت بنفش آبی است (برای مثال میله تخمیر اسید بوتیریک Clostridium pasteurianum) و باکتریهای گرم منفی صورتی رنگ قرمز می شوند (E. coli Escherichia coli). علاوه بر این روش رنگ آمیزی سنتی گرم ، یک روش سریع و آسان برای تمایز گرم بدون رنگ آمیزی وجود دارد. سلولهای باکتریایی (ترجیحاً 1-2 روزه) در یک حلقه در قطره 3٪ KOH روی یک اسلاید شیشه ای قرار داده می شوند ، به صورت دورانی هم زده می شوند و بعد از 5 تا 8 ثانیه حلقه به شدت بالا می آید. تعلیق باکتریهای گرم منفی چسبناک می شود و در پشت حلقه کشیده می شود و طنابهای مخاطی را تشکیل می دهد. باکتریهای گرم مثبت به طور مساوی در قطرات قلیایی (مانند آب) توزیع می شوند. اگر تشکیل تارهای مخاطی در عرض 60 ثانیه مشاهده نشود ، واکنش منفی تلقی می شود. افزایش ویسکوزیته در اثر تجزیه دیواره های سلولی باکتریهای گرم منفی در محلول ایجاد می شود

31 آزادسازی قلیایی و DNA. روش تمایز باکتری ها بر اساس گرم بدون رنگ آمیزی باید فقط برای تشخیص اولیه یا برای محاسبه نسبت تقریبی کلنی های باکتری های گرم مثبت و گرم منفی استفاده شود. تشخیص سلولهای زنده و مرده با رنگ آمیزی متیلن بلو تعداد سلولهای زنده و مرده را می توان با رنگ آمیزی با محلول متیلن بلو تعیین کرد. این روش بر اساس نفوذپذیری متفاوت سلولهای زنده و مرده میکروارگانیسم ها است. نفوذپذیری سلولی در سلولهای مرده مختل می شود ، بنابراین رنگ آزادانه از غشای سیتوپلاسمی عبور کرده و توسط پروتوپلاسم جذب می شود. در زیر میکروسکوپ ، سلولهای مرده آبی رنگ ، سلولهای زنده بی رنگ یا آبی کم رنگ به نظر می رسند. رنگ آمیزی به شرح زیر انجام می شود: یک قطره از محلول 2 of متیلن بلو بر روی یک اسلاید شیشه ای که با شیشه ای پوشانده شده است اعمال می شود ، رنگ اضافی با یک تکه کاغذ صافی کشیده می شود. دارو زیر میکروسکوپ مشاهده می شود ، در 10 میدان دید ، تعداد سلول های زنده و مرده شمارش می شود. تعداد سلولهای مرده بر حسب درصد بیان می شود. مثال: متوسط ​​تعداد سلولهای زنده در یک میدان دید 10 ، متوسط ​​تعداد سلولهای مرده در یک میدان دید 5 ، تعداد کلسلولها در یک میدان دید سلولها 100٪ 5 سلول X X 33.3٪ 15 15 بنابراین ، تعداد سلولهای مرده در سوسپانسیون مورد مطالعه میکروارگانیسمها 33.3٪ بود. تعیین اندازه سلول ها برای تعیین اندازه سلول های میکروارگانیسم ها ، داشتن یک چشمی مخصوص با مقیاس (میکرومتر چشمی) و یک جسم میکرومتر ضروری است. میکرومتر چشم ، 31

32 در ساده ترین حالت ، یک دیسک شیشه ای است که مقیاس خطی روی آن چاپ شده است و در چشمی وارد می شود (شکل 14 الف). شیء میکرومتر یک اسلاید میکروسکوپ است که در مرکز آن مقیاس خطی به طول 1 میلی متر با تدریجی 10 میکرون حک شده است. قبل از اندازه گیری ، لازم است مقدار تقسیم میکرومتر چشمی برای هر بزرگنمایی میکروسکوپ تعیین شود. بدین منظور ، یک شیء میکرومتر روی صحنه میکروسکوپ قرار می گیرد و به عنوان آماده سازی در نظر گرفته می شود. در این مورد ، یکی از تقسیمات قابل مشاهده شیء-میکرومتر با علامت صفر مقیاس میکرومتر چشمی تراز شده است و همزمانی تقسیم هر دو مقیاس ذکر شده است (شکل 15). تعداد تقسیمات چشمی و عینی در این بخش شمارش می شود و قیمت تقسیمات میکرومتر چشم محاسبه می شود. اگر پس از آن ، آماده سازی میکروارگانیسم به جای یک شیء میکرومتر روی صحنه قرار گیرد و مورد بررسی قرار گیرد 32

33 با همان بزرگنمایی ، می توان اندازه سلول میکروبی را با استفاده از مقیاس میکرومتر چشمی به عنوان خط کش اندازه گیری کرد. برای اندازه گیری دقیق ، از یک میکرومتر چشمی مخصوص با علامت صفر کشویی مربوط به طبل اندازه گیری استفاده می شود (شکل 14 ب). این به شما امکان می دهد اندازه میکروارگانیسم ها را با دقت دهم میکرون تعیین کنید. علامت صفر یک خط عمودی دوگانه است که وسط آن متناظر با تقاطع دو خط نازک به شکل یک صلیب است. قبل از اندازه گیری ، لازم است تقسیم مقیاس درام اندازه گیری را بدانید. شیء میکرومتر به عنوان یک مرجع عمل می کند. با چرخاندن درام اندازه گیری ، چندین بخش از مقیاس شیء-میکرومتر با علامت صفر دور می زنند. خط عمودی دوگانه تعداد دورهای کامل درام اندازه گیری را نشان می دهد. با انجام اندازه گیری های میکروارگانیسم ها ، علامت صفر را در امتداد جسم حرکت داده و قرائت درام اندازه گیری را بخوانید. بخش عملی هدف از این کار تسلط بر روشهای اساسی مطالعه ریخت شناسی میکروارگانیسم ها است. 33

34 روش انجام کار 1. آماده سازی آماده سازی ثابت باکتری های اسید لاکتیک از بیوکفیر و اسیدوفیلوس. 2. رنگ آمیزی گرم سلولهای Bacillus subtilis (gram +) و Escherichia coli (gram-) را انجام دهید. 3. اندازه سلولهای مخمر Saccharomyces cerevisiae را تعیین کنید. 4. تعداد سلولهای زنده و مرده Saccharomyces cerevisiae در سوسپانسیون مخمر را تعیین کنید. 34 محتویات گزارش 1. مورفولوژی سلولهای باکتریهای اسید لاکتیک (تصاویر آماده سازیهای ثابت باکتریهای اسید لاکتیک ، که نشان دهنده بزرگنمایی میکروسکوپ است). 2. نقشه های آماده سازی ثابت باکتریهای گرم منفی و گرم مثبت. 3. تعیین مقیاس طبل اندازه گیری میکرومتر چشمی. 4. اندازه سلول مخمر Saccharomyces cerevisiae. 5. تعداد سلولهای زنده و مرده در سوسپانسیون مخمر. سوالات آزمایشی 1. چگونه می توان آماده سازی ثابت باکتری ها را تهیه کرد؟ 2. دلیل تفاوت باکتری ها در لکه گرم چیست؟ 3. روش رنگ آمیزی گرم چیست؟ 4. چگونه میکروارگانیسم ها را تعیین کنیم؟ 5- چگونه می توان با رنگ آمیزی با متیلن بلو تعداد سلولهای زنده و مرده میکروارگانیسم ها را تعیین کرد؟ مبحث 2. پرورش میکروارگانیسم ها: اصول تدوین محیط های غذایی ؛ روشهای عقیم سازی ؛ روشهای تلقیح و دوباره کشت میکروارگانیسمها طبقه بندی و آماده سازی محیط های کشت پرورش میکروارگانیسم ها به معنی ایجاد شرایط مصنوعی برای رشد آنها است. برای کشت

35 میکروارگانیسم در آزمایشگاه یا صنعت ، از مواد مغذی حاوی همه مواد لازم برای فعالیت حیاتی میکروارگانیسم ها استفاده می شود. از محیط ، مواد مغذی وارد سلول میکروارگانیسم می شوند و محصولات متابولیک از سلول به محیط خارج می شوند. برای زندگی میکروارگانیسم ها ، آب ، کربن ، اکسیژن ، نیتروژن ، گوگرد ، فسفر ، پتاسیم ، کلسیم ، منیزیم ، آهن و عناصر کمیاب مورد نیاز است. همه این مواد باید در محیط تغذیه ای موجود باشد. حتی بدون یکی از آنها ، به هیچ وجه رشد وجود نخواهد داشت ، یا ناچیز خواهد بود. کربن ، هیدروژن ، نیتروژن ، فسفر و گوگرد عناصر بیوژنیک نامیده می شوند ، زیرا حدود 90 تا 95 درصد از جرم خشک سلول ها را تشکیل می دهند. پتاسیم ، منیزیم ، کلسیم و سدیم درشت مغذی یا عناصر خاکستر نامیده می شوند. آنها 5 تا 10 درصد از جرم خشک سلول ها را تشکیل می دهند. آهن ، منگنز ، مولیبدن ، کبالت ، مس ، وانادیوم ، روی ، نیکل و برخی دیگر از کاتیونهای فلزات سنگین عناصر کمیاب نامیده می شوند و کسری از درصد از جرم خشک سلولها را تشکیل می دهند. بالاترین ارزشدارای کربن برای هر موجود زنده این جزء تمام مولکولهای آلی در سلول است و حدود 50 درصد از زیست توده خشک را تشکیل می دهد. در ارتباط با کربن ، همه موجودات به دو دسته اتوتروف و هتروتروف تقسیم می شوند. اتوتروف ها از دی اکسید کربن به عنوان منبع کربن استفاده می کنند. هتروتروف ها به ترکیبات آلی آماده نیاز دارند. مواد آلی مختلف می توانند به عنوان منبع کربن برای اکثر میکروارگانیسم ها عمل کنند: پروتئین ها و محصولات پوسیدگی آنها ، کربوهیدرات ها ، چربی ها ، هیدروکربن ها. تغذیه نیتروژنی از نظر ارزش بعد از تغذیه کربنی در رتبه دوم قرار دارد. نیتروژن از اسیدهای آمینه و سایر اجزای سلولی است که حیات موجودات را تضمین می کند. نیتروژن 14 درصد از ماده خشک سلول ها را تشکیل می دهد. منبع نیتروژن ترکیبات آلی یا معدنی حاوی نیتروژن است. منابع نیتروژن معدنی اغلب نمک های آمونیوم و نیترات ها هستند. پروتئین ها ، اسیدهای آمینه ، نوکلئوتیدها به عنوان منابع آلی نیتروژن استفاده می شوند. برخی از پروکاریوت ها می توانند از نیتروژن جو استفاده کنند. 35

فسفر و گوگرد بیوپلیمرهای مهم سلولی هستند. فسفر (3٪ ماده سلولی خشک) بخشی از نوکلئوتیدها و ATP و گوگرد (کمتر از 1٪) بخشی از برخی اسیدهای آمینه است. فسفات ها معمولاً به عنوان منبع فسفر و سولفات ها به عنوان گوگرد استفاده می شوند. از فسفر و گوگرد نیز می توان به عنوان ترکیبات آلی استفاده کرد. برای رشد میکروارگانیسم ها ، مقادیر کمی عناصر درشت مورد نیاز است: یون فلزات قلیایی(Na +، K +) و فلزات قلیایی خاکی (Mg 2+ ، Ca 2+) ، که نقش مهمی در زندگی میکروارگانیسم ها ایفا می کنند. درشت مغذی ها در سلول های میکروبی برای تنظیم نفوذپذیری ، فشار اسمزی ، مقدار pH ضروری هستند. علاوه بر این فلزات ، تعدادی عنصر کمیاب (عناصر کمیاب) برای رشد میکروب ها مورد نیاز است. ترکیب معدنی محیط تغذیه ، توزیع بارهای الکتریکی را روی سطح سلول تشکیل می دهد. تغییر پتانسیل الکتریکی سلول ها می تواند فعالیت فیزیولوژیکی آنها را تغییر دهد. یکی از عملکردهای اصلی عناصر کمیاب شرکت در کاتالیز آنزیمی است. در حال حاضر ، عملكرد يك چهارم كل آنزيم هاي موجود در سلول با فلزات مرتبط است. علاوه بر اجزای اصلی محیط تغذیه برای رشد طبیعی برخی از میکروب ها ، مواد اضافی نیز مورد نیاز است که به آنها "عوامل رشد" می گویند. عوامل رشد نام ترکیبی انواع مختلف هستند طبیعت شیمیاییاتصالات اینها عمدتا مواد آلی هستند که افزودن آنها در مقادیر بسیار کم باعث رشد و تولید مثل میکروارگانیسم ها می شود. آنها برای میکروب ها همان معنی را دارند که ویتامین ها برای ارگانیسم های بالاتر دارند. عوامل رشد عمدتاً ویتامین های گروه B هستند که نقش تنظیم کننده و محرک متابولیسم در میکروب ها یا اسیدهای آمینه را ایفا می کنند. اتولیزات مخمر ، عصاره مخمر ، پروتئین های بومی (خون ، سرم) و ... به عنوان فاکتورهای رشد استفاده می شوند.نیازهای تغذیه ای میکروارگانیسم ها بسیار متنوع است. به همین دلیل ، 36 جهانی وجود ندارد

37 متوسط ​​، به همان اندازه برای کشت هر گونه میکروارگانیسم مناسب است. بسته به اهداف کشت و نیازهای یک میکروارگانیسم معین ، مواد مغذی از سه جهت متفاوت است: ترکیب ، وضعیت فیزیکی و هدف. از نظر ترکیب ، مواد مغذی به دو گروه تقسیم می شوند: 1) طبیعی (طبیعی) ؛ 2) مصنوعی (مصنوعی). محیطهای طبیعی آنهایی هستند که ترکیب شیمیایی نامشخصی دارند ، زیرا شامل محصولات گیاهی یا حیوانی ، ضایعات صنایع مختلف ، حاوی ترکیبات آلی می باشند. محيط هاي غذايي طبيعي رشد شديد طيف وسيعي از ميكروارگانيسم ها را ايجاد مي كنند. آنها حاوی مجموعه ای غنی از ارگانیک و ترکیبات معدنی، از جمله تمام عناصر لازم و مواد اضافی. به عنوان مثال ، در آزمایشگاه ، بیشتر از محیط کشت زیر استفاده می شود. 1. عصاره گوشت پپتون (MPB) از گوشت ، حاوی محصولات تجزیه ناقص پپتون های پروتئینی است که حاوی کربن آلی ، نیتروژن آلی ، حاوی فسفر و مواد آلی حاوی گوگرد است. BCH همچنین شامل تمام مواد معدنی لازم برای میکروارگانیسم ها است. BCH در کشت بسیاری از انواع باکتری ها استفاده می شود. 2. عصاره آبجو از دانه جو جوانه زده ، حاوی شکر (عمدتا مالتوز) ، مواد نیتروژنی ، عناصر خاکستر ، عوامل مختلف رشد و ویتامین های گروه B به عنوان منبع کربن است. قارچ های کپک مواد طبیعی خوب شیر ، سیب زمینی ، جوشانده میوه و سبزیجات هستند. در صنعت ، معمولاً از رسانه های نیمه مصنوعی یا طبیعی استفاده می شود. اغلب ، ضایعات میکروبیولوژیکی یا میکروبیولوژیکی به عنوان منبع کربن استفاده می شود. صنایع غذایی: ملاس (ضایعات ناشی از تولید شکر) ، 37

وزارت کشاورزی فدراسیون روسیه آژانس شیلات فدراسیون دانشگاه فنی دانشگاه کامچاتسک بخش زیست شناسی و شیمی شیمی و میکروبیولوژی آب تهیه

نام کد نام خانوادگی محل کارمجموع کد منطقه: وظایف دور عملی مرحله منطقه ای XXXII همه روسی. بیوشیمی تجهیزات شناسایی: لوله های آزمایش (3 لوله با عصاره

نام خانوادگی کد نام منطقه / شهر کد محل کار مجموع: وظایف دور عملی مرحله منطقه ای XXVIII المپیاد تمام روسی برای دانش آموزان مدرسه زیست شناسی. سال تحصیلی 2011-12 سال بیوشیمی درجه 11 تجهیزات،

توضیحات میکروبیولوژی در برنامه کار درس "میکروبیولوژی" ، درجه 9 "بر اساس برنامه نویسنده درس انتخابی" میکروبیولوژی "Averchinkova OE Biology. دروس انتخابی... درمانی

وظایف میکروبیولوژی (حداکثر 20 امتیاز) هدف کار: تهیه و تجزیه و تحلیل داروها از دو گروه شناخته شده فرآورده های شیر تخمیر شده... تجهیزات: میکروسکوپ ، مشعل یا لامپ الکلی ، سرسره های شیشه ای ،

پادشاهی پروکاریوتها تسلیم باکتریها باکتریها به عنوان پروکاریوت طبقه بندی می شوند. اینها ساده ترین ، کوچکترین و گسترده ترین موجودات هستند که بیش از 2 میلیارد سال روی زمین وجود داشته اند ، اما با هم

سیستم جهان ارگانیکهمه موجودات زنده روی زمین به چهار پادشاهی تقسیم می شوند: Drobyanki ، قارچ ، گیاهان ، حیوانات. اسلحه شکاری متعلق به پروکاریوت ها (موجودات پیش هسته ای) ، قارچ ها ، گیاهان ،

موضوع پروژه تحقیق میکروارگانیسم هایی که در مخزن راکد جنگل بوتوو در مسکو زندگی می کنند نویسنده (ها): کسائوا دیانا ، کسائوا کریستینا ، مدرسه تکاچنکو آلیسا: GBOU SOSH 1945 کلاس: راهنمای کلاس 5

کار آزمایشگاهی "ساختار بدن قارچ کلاه" هدف: مطالعه ساختار بدن قارچ کلاه تجهیزات: قارچ کلاه دار (قارچ سفید ، روسولا ، قارچ ، بولتوس ، ظرف کره ، قارچ عسلی و غیره) ، آماده- ساخته شده

موسسه آموزشی دولتی فدرال آموزش عالی حرفه ای "OMSK STATE AGRARIAN UNIVERSITY OF PASTOLYPIN PA" INSTITUTE DETERINARY MEDICINE AND BIOTECHNOLOGY

تأیید شده توسط معاون رئیس بهداشتی فدراسیون روسیه - پزشک ارشد مرکز فدرال نظارت بهداشتی و اپیدمیولوژیک دولتی وزارت بهداشت روسیه E.N.BELYAEV 20 فوریه 2004 N 24FC / 900 تاریخ

کار تحقیقاتی مخمر: زندگی هیجان انگیز قارچ های کوچک نویسنده: دانش آموز 5 "B" کلاس GBOU Gymnasium 1748 "عمودی" Kutaytsev Georgy Valerievich سرپرست: نوسووا النا ولادیمیرونا ،

روش تشخیص قارچ های مخمر و کپک در غذا توصیه های متدولوژیک روش های تشخیص قارچ های مخمر و کپک در غذا: توصیه های روشی - مسکو: مرکز فدرال

موضوع 4. باکتری ها. قارچ. گلسنگ ها قسمت A. 1. وجود سیانوباکتریا در گلسنگ 1) جذب رطوبت جوی و خاک 2) استفاده از نور برای تشکیل مواد مغذی

زیست شناسی علم طبیعت زنده مطالعات زیست شناسی: ساختار زیست شناسی و عملکردهای حیاتی موجودات زنده را مطالعه می کند. z قوانین فردی و توسعه تاریخیموجودات زنده 3 سیستم ارگانیک

1. باکتریهای نیتریف کننده به عنوان 1) شیمیوتروفها 2) فوتوتروفها 3) ساپروتروفها 4) هتروتروفها موضوع "فتوسنتز" 2. انرژی نور خورشید در سلولها به انرژی شیمیایی تبدیل می شود 1) فوتوتروفها

میکروبیولوژی و ژنتیک وظیفه 1. آماده سازی و تجزیه آماده سازی دو محصول شناخته شده از شیر تخمیر شده. (حداکثر 10 امتیاز) تجهیزات: میکروسکوپ ، مشعل یا چراغهای رومیزی ، سرسره های شیشه ای ،

آزمونهای صلاحیت در تخصص بانک "باکتری شناسی" موارد آزمایشبرای آماده سازی برای صدور گواهینامه یک یا چند پاسخ صحیح را انتخاب کنید 1. مطابق دستور کمیته دولتی حفاظت از محیط زیست فدراسیون روسیه N اجباری

وظایف 3. موجودات تک سلولی و چند سلولی. پادشاهی قارچ ها 1. چه چیزی در گلوله های سیاه در انتهای شاخه های بلند قارچ موکور وجود دارد؟ 1) میوه های میکروسکوپی 2) مواد مغذی 3)

موسسه آموزشی بودجه ای فدرال ایالتی آموزش عالی "دانشگاه ارنبورگ ایالت آرگانبورگ" توصیه های روش برای کار مستقلفراگیران

مورفولوژی میکروارگانیسم ها گزینه 1 1. Gracilicutes عبارتند از: الف) باکتریهای دیواره نازک ب. باکتریهای دیواره ضخیم ج. باکتریها با دیواره سلولی معیوب. D. باکتری با دیواره سلولی ظریف. 2.K

تکلیف برای دانش آموزان: لازم است پاسخ های صحیح را انتخاب کنید (می تواند از یک تا چند باشد). مورفولوژی میکروارگانیسم ها گزینه 1 1. Gracilicutes عبارتند از: A. باکتری های دیواره نازک B. دیواره ضخیم

جلبک جلبک گیاهان پایینی جلبکها گروه وسیع و ناهمگن از گیاهان پایینی هستند. جلبک ها متعددترین و یکی از مهمترین موجودات فتوسنتز کننده برای کره زمین هستند. آن ها ملاقات می کنند

بودجه شهرداری موسسه آموزشی آلارسکایا متوسط مدرسه جامع"در نظر گرفته شد" رئیس وزارت دفاع صورتجلسه های 0 سال. "موافق" معاون مدیریت منابع آب MBOU 0 گرم "تایید"

1 تکنیک های اساسی کار با میکروارگانیسم ها وظیفه 1. مقدمه ای بر میکروبیولوژی اقدامات احتیاطی ایمنی هنگام کار با میکروارگانیسم ها هدف از انجام وظیفه. این کار شما را با قوانین کار ایمن در آشنا می کند

وظایف 2. ساختار سلولی موجودات زنده 1. کدام عنصر شیمیایی بخشی از ترکیبات آلی حیاتی سلول است؟ 1) فلور 2) کربن 3) مس 4) پتاسیم 2. به عنوان یک ماده ذخیره کننده

قالبها تأثیر عوامل فیزیکی بر رشد و نمو قارچها هستند. Logunov Stepan 7g مدیر پروژه Bulycheva M.B. ارتباط تحقیقات هاگهای قارچی در برابر شرایط نامطلوب بسیار مقاوم هستند

آزمون 5 گزینه 1. موضوع "قارچ" وظایف با انتخاب یک پاسخ صحیح. 1. تفاوت اصلی قارچها و گیاهان در این است که آنها دارای ساختار سلولی هستند ، آب و نمکهای معدنی را از خاک جذب می کنند ،

1. یادداشت توضیحی این برنامه برای کسانی است که در تحصیلات تکمیلی FSBEI HPE BSU در تخصص 03.02.03 وارد می شوند - میکروبیولوژی این برنامه برای آموزش متخصصان واجد شرایط در این زمینه است

آژانس آموزش فدرال

آکادمی فنی فنی کاراچای چرکس

گروه فناوری تولید محصولات دامی

میکروبیولوژی

دستورالعمل ها

برای کلاسهای آزمایشگاهی و عملی برای دانش آموزان

موسسه کشاورزی

چرکسک - 2010

بر اساس تقریبی و برنامه های کاریدر دوره "میکروبیولوژی" مطابق با استاندارد آموزشی دولتی آموزش عالی حرفه ای در تخصص 110305 "فناوری تولید و پردازش محصولات کشاورزی" و 110201 "زراعت" (2000).

مورد بحث در جلسه بخش TPPZ (صورتجلسه 2.07.2009)

تأیید شده توسط کمیسیون روش شناسی موسسه کشاورزی(صورتجلسه شماره 6 مورخ 01.01.2001). منتشر شده با تصمیم شورای آموزشی و روش شناسی آکادمی فناوری دولتی Karachay-Cherkess (صورتجلسه 01.01.2001)

گردآوری شده توسط:نامزد علوم زیستی ، دانشیار , نامزد علوم کشاورزی ، دانشیار , دستیار

داوران: – نامزد علوم زیستی

دانشیار گروه زراعت

دانشیار گروه "TPPZH"

ویراستار: دکتری علوم ، دانشیار
محتوا

مقدمه ………………………………………………………………… .. 6

1. میکروسکوپ ……………………………………………………… .. 7

1.1 میکروسکوپ میدان نوری …………………………………………. .7

1.1.1 دستگاه میکروسکوپ ……………………………………………… 7

2. کار با میکروارگانیسم ها ……………………………………………. هشت

2.1 روشهای تهیه آماده سازی ……………………………………………………………………………………………

2.1.1. تکنیک مصرف فرهنگ برای آماده سازی …………………………… 8

2.1.2. مطالعه سلولهای زنده میکروارگانیسمها به روش

افت فشار ……………………………………………………… .. 8

2.1.3 آماده سازی ثابت میکروارگانیسم ها ……………………… 9

سیستم روشنایی در زیر صحنه قرار دارد. آینه نور وارد شده را به کندانسور منعکس می کند. یک طرف آینه صاف است ، طرف دیگر مقعر است. هنگام کار با کندانسور ، باید از آینه تخت استفاده شود. هنگام کار بدون کندانسور با لنزهای با بزرگنمایی پایین ، از آینه مقعر استفاده می شود. کندانسور شامل 2-3 عدسی لنز با فوکوس کوتاه است ، اشعه هایی را که از آینه می آیند جمع آوری کرده و آنها را به سمت جسم هدایت می کند. هنگام کار با سیستم های غوطه وری ، به کندانسور نیاز است. کندانسور دارای دیافراگم عنبیه (گلبرگ) است که از صفحات فولادی هلالی شکل ساخته شده است.

آماده سازی های رنگی با دیافراگم تقریباً باز ، بدون لکه - با کاهش دیافراگم دیافراگم در نظر گرفته می شوند.

عدسی- سیستم چند لنز ، که کیفیت شیء به کیفیت آن بستگی دارد. عدسی بیرونی لنز جلو نامیده می شود و بزرگنمایی را فراهم می کند. بقیه لنزها عملکرد اصلاح نواقص نوری را انجام می دهند.

لنزها خشک و غوطه ور هستند (غوطه وری). هنگام کار با اهداف خشک ، بین لنزهای جلو و محل مطالعه هوا وجود دارد. هنگام کار با هدف غوطه وری V = 90x ، بین شیشه روکش و عدسی شیئی روغن سرو وجود دارد که ضریب شکست آن به ترتیب نزدیک به ضریب شکست شیشه 1.515 و 1.52 است. لنزها دارای بزرگنمایی 8x ، 40x و 90x هستند.

چشم چشمیبه عنوان ادامه مستقیم "عدسی" (لنز) چشم انسان عمل می کند.

چشمی شامل دو عدسی - بالایی - چشم و پایینی - جمعی است که در یک قاب فلزی محصور شده است. هدف چشمی بزرگ کردن تصویری است که لنز ارائه می دهد. بزرگنمایی چشم در قاب آن حک شده است. بزرگنمایی کارکرد چشمان بین 4 تا 15 برابر است.

چشمان چشمی هستند مدل های متفاوت، انواع مختلف، انواع متفاوت، مدل های مختلف، و انتخاب بستگی به لنز دارد. هنگام کار طولانی مدت با میکروسکوپ ، آنها از یک اتصال دو چشمی استفاده می کنند ، زیرا دید شی را بهبود می بخشد ، روشنایی تصویر را کاهش می دهد و در نتیجه بینایی را حفظ می کند.

کار با میکروارگانیسم ها

2.1 روش های آماده سازی

2.1.1 تکنیک گرفتن فرهنگ برای آماده سازی

مقدار کمی از توده میکروبی از لوله آزمایش با سوزن باکتریولوژیکی سوزانده شده در شعله برداشته می شود. اگر فرهنگ مایع است ، بهتر است برای این کار از حلقه استفاده کنید ، در موارد دیگر - سوزن.

2.1.2. مطالعه سلولهای زنده میکروارگانیسمها به روش قطره خرد شده

سلولهای زنده میکروارگانیسم ها با روش قطره خرد شده مورد بررسی قرار می گیرند ، جسم از قبل با رنگهای حیاتی رنگ آمیزی می شود - رنگ آمیزی حیاتی(رنگها: متیلن بلو ، قرمز خنثی در غلظت 0.001 تا 0.0001).

آماده سازی ها میکروسکوپی شده اند ، کمی میدان دید را تیره می کنند. کندانسور کمی پایین آمده است ، جریان نور توسط یک آینه مقعر تنظیم می شود. در ابتدا ، آنها از بزرگنمایی کم استفاده می کنند - یک هدف 8 برابر ، پس از تشخیص لبه افت ، یک هدف 40x یا غوطه وری (90x) نصب می شود.

در مورد روش قطره خرد شده ، یک قطره آب لوله کشی به یک سرسره شیشه ای تمیز اعمال می شود. فرهنگ به آن وارد شده و با آب مخلوط می شود. آب اضافی با کاغذ صافی برداشته می شود. هنگام استفاده از هدف غوطه وری ، یک قطره روغن سرو را روی یک سرسره شیشه ای ریخته و میکروسکوپ کنید.

2.1.3 آماده سازی ثابت میکروارگانیسم ها

آماده سازی های ثابت چنین پردازش سلول های زنده را پیش بینی می کند ، که باعث می شود به سرعت روند زندگی در یک جسم قطع شود و ساختار خوب آن حفظ شود. در نتیجه تثبیت ، سلول ها محکم به شیشه متصل شده و رنگ آمیزی بهتری دارند. هنگام کار با میکروارگانیسم های بیماری زا (به دلایل ایمنی) رفع آن ضروری است.

تهیه اسمیر.یک قطره آب لوله کشی روی یک سرسره تمیز چرب شده اعمال می شود. برای چربی زدایی شیشه ها ، از مخلوطی از الکل اتیل و اتر سولفوریک به نسبت 1: 1 استفاده می شود. با استفاده از یک سوزن باکتریولوژیکی کلسینه شده ، مقدار کمی از توده میکروبی از لوله کشت گرفته شده و به یک قطره آب اضافه می شود. قطره را با حلقه ای روی شیشه به مساحت حدود 4 سانتی متر مربع آغشته می کنند.

اگر سوسپانسیون ضخیم باشد ، ابتدا با آب رقیق می شود. برای این کار ، کمی سوسپانسیون با حلقه کلسین شده گرفته شده و به یک قطره آب روی سرسره شیشه ای دیگر منتقل می شود. یک سوسپانسیون با چگالی معمولی با یک لایه نازک روی شیشه آغشته می شود ، سپس لکه در هوا در دمای اتاق یا با حرارت کم خشک می شود و دارو را بالای شعله مشعل نگه می دارد. برای جلوگیری از انعقاد پروتئین ها ، که ساختار و شکل سلول ها را مخدوش می کند ، حرارت قوی آماده سازی در طول خشک شدن توصیه نمی شود. آماده سازی خشک ثابت می شود.

رفع اسمیر.انجام می شود روی شعله مشعلیا با استفاده از شرکت شیمیاییاتحادیه هادر حالت اول ، آماده سازی به آرامی سه تا چهار بار با قسمت پایین روی شعله مشعل انجام می شود ، در مورد دوم ، از ترکیبات کروم استفاده می شود: فرمالین ، اسید اسمیک ، استون. یکی از روشهای متداول تثبیت ، درمان دارو با 96٪ الکل یا مخلوطی از حجم مساوی از الکل اتیل و اتر (مایع نیکیفروف) است. برای این کار ، آماده سازی ها به مدت 10 تا 30 دقیقه در مایع ثابت کننده غوطه ور می شوند.

رنگ آمیزی آماده سازی.چند قطره رنگ روی اسمیر بمالید. بسته به نوع رنگ و هدف مطالعه ، مدت زمان رنگ آمیزی از 1 تا 5 دقیقه متغیر است ، در برخی موارد تا 30 دقیقه طول می کشد. در پایان رنگ آمیزی ، آماده سازی با آب شسته می شود ، آب با کاغذ صافی برداشته می شود ، در هوا خشک شده و میکروسکوپ می شود.

روشهای ساده و متمایز نقاشی وجود دارد.

در سادههر رنگی برای رنگ آمیزی (آبی متیلن ، فوکسین ، بنفش جنتیان) استفاده می شود ، کل سلول رنگ آمیزی می شود.

در متمایزبا رنگ آمیزی ، ساختارهای سلولی منفرد با رنگهای مختلف رنگ آمیزی می شود (لکه گرم ، رنگ آمیزی اسپور).

بررسی ریخت شناسی میکروارگانیسم ها

3.1 شکل سلول

3.1.1 باکتری ها

از نظر شکل ، همه باکتری ها به شکل کروی (کوکی) ، میله ای شکل و چین دار تقسیم می شوند.

باکتری های کروی - کوکوس.

1. میکروکوک -سلولهای کروی منفرد ( میکروکوک agilis).

2. دیپلوکوک -کوکهای کروی ، متصل به دو. ( آزوتوباکتر chroococcum).

3. تتراکوک ها- کوکهای کروی ، متصل به چهار.

4.استرپتوکوک ها- باکتری های کروی متصل به زنجیره (عمدتا بیماری زا و همچنین باکتری های اسید لاکتیک) لاکتوکوک لاکتیس).

5. سارسیناس- باکتری های کروی ، گروه بندی شده توسط 8 سلول ، در نتیجه تقسیم سلولی در سه صفحه عمود بر یکدیگر بوجود می آیند. برخی از انواع سارسین ها بسته های بزرگ مکعبی شکل تشکیل می دهند که در هر طرف 4 سارسین وجود دارد. نماینده معمولی سارسینا فلاو(زرد sarcinum) - شایع ترین نماینده میکرو فلورای هوا.

همه اشکال کروی باکتری ، به استثنای استرپتوکتوکوک لاکتیس, در آماده سازی های ثابت و رنگ آمیزی شده با فوکسین مشاهده می شود.

باکتری های میله ای شکل. اینها شامل اشکال است که مناقشه ایجاد نمی کند (زایمان سودوموناس, آکروموباکتر, لاکتوباسیلوسو دیگران) و ایجاد اختلاف (زایمان) باسیلوس, کلستریدیومو غیره.).

چوب تشکیل دهنده اسپور سودوموناس استوتزری – سیتوپلاسم آن به طور مساوی رنگ آمیزی می شود.

میله های تشکیل دهنده اسپور باسیلوس میکوئیدزو Bacillus mesentericus.در زیر میکروسکوپ ، رنگ آنها ناهموار به نظر می رسد. اسپورها به عنوان ساختارهای متراکم تر رنگ نشده اند. سلول ها باسیلوس میکوئیدهااسترپتوباسیل ها به صورت زنجیره ای مرتب شده اند.

باکتری های میله ای شکل روی اسلایدهای ثابت و لکه دار مشاهده می شوند.

اشکال منحنی

1. ویبریوس – سلولهای کمی خمیده

2. Spirillae می تواند یک حلقه به شکل حرف C روسی ، دو حلقه به شکل حرف لاتین S ، یا چند - به شکل یک مارپیچ داشته باشد.

3. Spirochetes - سلولهای بلند و نازک با تعداد زیادی فر. طول سلولها 5 تا 200 بار از ضخامت آنها بیشتر است.

ویبریوها و اسپیریلها به راحتی بر روی آماده سازی رنگی و ثابت تهیه شده از دوغاب ، که قبلاً برای چند روز در ترموستات انکوبه شده اند ، مشاهده می شوند. از بین بسیاری از میکروارگانیسم های موجود در چنین آماده سازی ، اغلب فرم های پیچیده یافت می شود.

شما می توانید با spirochetes در آماده سازی لکه دار ثابت پلاک دندان آشنا شوید ؛ آماده سازی برای تراشیدن از دندان پوسیدگی به ویژه موفق است. اسپیروکت دندان بسیار نازک ، شبیه مو ، کوتاه (فقط 2-3 فر) است.

3.1.2 اکتینومایست ها

اکتینومایست ها قارچ های تابشی هستند. میسلیوم اکتینومایست ها روی محیط های مغذی متمایز است: یک قسمت از آن در بستر (میسلیوم بستر) غوطه ور است ، قسمت دیگر در بالای بستر (میسلیوم هوایی) قرار دارد.

بسیاری از نمایندگان اکتینومایست ها رنگدانه تولید می کنند ؛ بنابراین ، میسلیوم هوایی آنها و به ویژه کلنی ها آبی ، آبی ، بنفش ، صورتی ، قهوه ای ، قهوه ای یا سیاه رنگ دارند. اکتینومایستها محیط کشت را در رنگهای مناسب رنگ آمیزی می کنند.

قطعه ای از کلنی اکتینومایست همراه با محیط روی یک اسلاید شیشه ای اعمال می شود. با اسلاید شیشه ای دوم ، این قطعه محکم به شیشه فشار داده ، خرد شده و روی شیشه آغشته می شود. این دارو خشک می شود ، ثابت می شود ، رنگ می شود ، زیر میکروسکوپ مشاهده می شود ، جایی که رشته های تک سلولی میسلیال تا حدی قابل مشاهده است.

3.1.3 مخمر

مخمر - قارچ های میکروسکوپی تک سلولی با اشکال مختلف: بیضوی ، گلابی شکل ، گرد ، استوانه ای. تولید مثل رویشی و جنسی.

برای مطالعات آزمایشگاهی ، از مخمر نانوا استفاده می شود. یک تکه کوچک از مخمر را چند ساعت قبل از کلاس در آب گرم قندی قرار داده و در یک مکان گرم قرار دهید. مایع مایل به سفید و کدر تشکیل می شود. یک قطره از این مایع روی یک اسلاید شیشه ای که روی آن را با شیشه ای پوشانده اند ، می ریزند ، یک قطره روغن سرو را روی آن می ریزند و آماده سازی را با یک سیستم غوطه وری مشاهده می کنند. سلولهای جوانه زده و تقسیم کننده قابل مشاهده هستند.

3.2 روشهای تحقیق شیمیایی

3.2.1 رنگ آمیزی گرم سلولهای میکروارگانیسم ها

این روش تمایز سلولهای میکروبی بر اساس تفاوت در است ترکیب شیمیاییغشای سلولی در سلول های برخی از انواع میکروارگانیسم ها ، ترکیب ol نامحلول در الکل با رنگ اصلی تشکیل می شود ، در حالی که در گونه های دیگر این ترکیب به طور موقت ظاهر می شود و پس از درمان با الکل حل می شود. میکروارگانیسم های گروه اول نامیده می شوند گرم مثبت دومین - گرم منفی

تکنیک رنگ آمیزی گرمسه اسمیر نازک از فرهنگ های مختلف میکروارگانیسم ها روی یک سرسره شیشه ای چرب شده اعمال می شود (دو مورد از آنها کنترل کننده هستند ، با ارتباط شناخته شده با لکه گرم). اسمیرها در هوا خشک می شوند ، روی شعله مشعل ثابت می شوند و به مدت 1 دقیقه با محلول فنولی بنفش جنتیان (یا بنفش کریستالی) رنگ آمیزی می شوند و شیشه را در وضعیت کمی متمایل نگه می دارند. سپس رنگ ریخته می شود و بدون شستشوی آماده سازی با آب ، محلول لوگول را به مدت 1 دقیقه روی آن قرار می دهیم (تا زمانی که اسمیر کاملاً سیاه شود). شیشه در حالت شیب دار نگه داشته می شود. دارو ، بدون شستشو با آب ، درمان می شود ، به طور مداوم تکان داده می شود ، با 96 alcohol الکل به مدت 15-20 ثانیه. مهم است که به زمان تغییر رنگ پایبند باشید ، زیرا زمانی که از دوره مشخص شده بیشتر گذشت ، سلولهای گرم مثبت نیز تغییر رنگ می دهند.

پس از شستشو با آب ، آماده سازی به مدت 1 دقیقه با فوکسین فایفر رنگ آمیزی می شود. میکروارگانیسم های گرم مثبت دارای رنگ بنفش تیره هستند و میکروارگانیسم های گرم منفی به رنگ دیگری (فوکسین) رنگ آمیزی می شوند.

نتایج رنگ آمیزی گرم بستگی به سن فرهنگ دارد: در فرهنگهای قدیمی ، سلولهای مرده همیشه با گرم منفی رنگ آمیزی می شوند. بنابراین ، بهتر است از محصولات جوان یک روزه استفاده کنید.

مخمر، Bacillus mesentericusیا باسیلوس سابتیلیس(گرم مثبت) و اشریشیا کلی (گرم منفی).

رنگها و معرفها برای رنگ آمیزی گرم.

1. محلول فنولی بنفش جنتیان:بنفش جنتیک - 1 گرم ، الکل 96٪ - 10 میلی لیتر ، فنل کریستالی - 2 گرم ، آب مقطر - 100 میلی لیتر.

در برخی موارد ، درخواست دهید محلول الکل جنتیانرنگ بنفش:بنفش جنتیان (یا بنفش کریستالی) - 1 گرم ، 96٪ الکل (تصحیح شده) - 100 میلی لیتر ، گلیسیرین - 5 میلی لیتر. مخلوط به مدت 24 ساعت در ترموستات قرار داده می شود ، سپس فیلتر می شود.

2. محلول لوگول(یدیت پتاسیم - 2 گرم ، ید بلوری - 1 گرم ، آب مقطر - 300 میلی لیتر). ابتدا یک محلول غلیظ یدیت پتاسیم در 5 میلی لیتر آب تهیه می شود ، ید در آن حل می شود ، سپس آب به 300 میلی لیتر اضافه می شود.

3. الکل 96 درصد

4. فوکسین فایفر(محلول آبی فوکسین کاربولیک Tsil): 1 میلی لیتر فوکسین کربولیک Tsiel و 9 میلی لیتر آب مقطر. به شرح زیر تهیه می شود: 1 گرم فوکسین ، 5 گرم فنل کریستالی ، 96٪ الکل - 10 میلی لیتر ، چند قطره گلیسیرین ، 100 میلی لیتر آب مقطر ، فوکسین در اتانول حل می شود ، فنل حل شده در آب اضافه می شود. محلول را هم زده و چند روز می گذاریم. قبل از استفاده فیلتر می شود.

3.2.2 رنگ آمیزی اسپور در باکتری ها

اسپورهای باکتری ، در مقایسه با سلولهای رویشی ، در برابر شرایط نامساعد محیطی بسیار مقاوم هستند. آنها تشکیلات گرد ، بیضی شکل یا بیضوی هستند. اگر قطر اسپور از قطر سلولی که اسپور در آن تشکیل شده است تجاوز نکند ، سلول نامیده می شود پشتی ، اگر بیش از حد باشد ، بسته به موقعیت اسپور در مرکز یا در انتهای سلول ، این سلول بر این اساس نامیده می شود کلستریدیال یا انتخابی . در سلول باسن ، اسپور را می توان در مرکز سلول قرار داد - مرکزیموقعیت ، در پایان - پایانهو نزدیک به یک سر - فرعیموقعیت

هنگام مشاهده باکتری های زنده تشکیل دهنده اسپور ، می توان اسپورهای آنها را با شکست قوی تر اشعه های نور تشخیص داد. اسپورها مقاوم در برابر اسید هستند ، بنابراین رنگ آمیزی آنها با رنگ دشوار است. این امر با چگالی بالای غشا ، غلظت کم آب آزاد در آن و محتوای بالای لیپیدها در اسپورها توضیح داده می شود. در آماده سازی رنگی به روشهای سادهیا طبق نظر گرام ، هاگها بی رنگ می مانند (رنگ آمیزی منفی)

همه روشهای رنگ آمیزی اسپور بر اساس است اصل مشترک: ابتدا اسپورها با مواد مختلفی حک می شوند: کروم ، کلریدریک ، گوگرد ، اسیدهای استیک ، آمونیاک ، سود سوزآور یا پراکسید هیدروژن ، سپس سلول با اسپور هنگام گرم شدن رنگ آمیزی می شود و در نهایت ، سیتوپلاسم تغییر رنگ داده و رنگ آمیزی می شود. رنگ کنتراست

روش Ziehl-Nielsen توسط مولر اصلاح شده است.قبل از ثابت کردن اسمیر باکتریایی روی شعله ، آماده سازی به روش معمول تهیه می شود. سپس ، یک محلول 5 of از اسید کرومیک روی سرد شده اعمال می شود و در شعله ثابت می شود. پس از 5-10 دقیقه ، آن را با آب بشویید. آماده سازی با یک نوار کاغذ صافی پوشانده شده و کاغذ به وفور با فوکسین کربولیک Tsil مرطوب می شود. آماده سازی را روی شعله گرم کنید تا بخار ظاهر شود (به جوش نیاید) ، سپس آن را کنار گذاشته و قسمت جدیدی از رنگ را اضافه کنید. این روش به مدت 7 دقیقه انجام می شود. مهم این است که رنگ بخار شود ، اما کاغذ خشک نشود. پس از خنک شدن ، برداشته می شود ، آماده سازی با آب شسته می شود و با کاغذ صافی کاملاً لکه دار می شود. در نتیجه این درمان ، سلولهای دارای اسپور به طور یکنواخت رنگ آمیزی می شوند.

سپس ، سیتوپلاسم سلولها (اما اسپورها) با درمان با محلول 1 of اسید کلریدریک یا سولفوریک به مدت 15-30 ثانیه تغییر رنگ می دهد. هنگام آماده سازی ، اسپورها باسیلوس میکوئیدهایا باسیلوس مزانتریکوستوصیه می شود سیتوپلاسم را به مدت 16-18 ثانیه تغییر دهید (با صدای بلند از 21 تا 37-40). در صورت تجاوز از این زمان ، ممکن است رنگ اسپورها نیز تغییر رنگ دهد. سپس آماده سازی را با آب شستشو داده و به مدت 2 دقیقه با متیلن بلو رنگ آمیزی کنید.

رنگ متضاد است و اسپورهای قرمز روشن به وضوح در پس زمینه آبی سیتوپلاسم خودنمایی می کنند.

روش پشکوفمتیلن بلو لفلر روی آماده سازی که در شعله ثابت شده است ریخته می شود ، به جوش می آید و به مدت 15-20 ثانیه جوشانده می شود و لیوان را روی شعله نگه می دارد. اسمیر با آب شسته شده و به مدت 30 ثانیه با محلول آبی 0.5٪ قرمز خنثی رنگ آمیزی می شود. دوباره شستشو دهید ، خشک کنید و سپس آماده سازی را با روغن غوطه ور کنید. اسپورها آبی یا آبی رنگ هستند ، سیتوپلاسم - صورتی.

برای مطالعه اختلافات ، اشیاء مناسب می توانند باشند باسیلوس مزانتریکوسیا باسیلوس میکوئیدهادر سن 4 روزگی

معرفهای رنگ آمیزی اسپورهای باکتریایی 1. فوکسین کربولیکسسیلیا(به 3.2.1 مراجعه کنید).

2. متیلن بلو لفلر(به 3 مراجعه کنید 2. .1).

3. محلول آبی اشباع شده متیلن بلو. 2 گرم رنگ و 100 میلی لیتر آب مقطر.

4. اسید کرومیک ،محلول 5 درصد

5. نمک(یا اسید سولفوریک،محلول 1 درصد

4. پرورش میکروارگانیسم ها

4.1 رسانه های فرهنگی

4.1.1 تهیه رسانه های فرهنگی

آب گوشت پپتون (BCH).برای تهیه رسانه گوشت-پپتون استفاده کنید آب گوشت ،که به شرح زیر بدست می آید: 500 گرم گوشت تازه ریز خرد شده در یک ظرف مینای دندان با 1 لیتر آب لوله کشی گرم شده تا 50 درجه سانتی گراد ریخته می شود و به مدت 12 ساعت در دمای اتاق یا 1 ساعت در دمای 50-55 درجه سانتیگراد تزریق می شود. به گوشت خرد شده ، عصاره از طریق پارچه پنیر با لایه ای از پشم پنبه فیلتر می شود ، به مدت 30 دقیقه برای انعقاد پروتئین های کلوئیدی جوشانده و دو بار فیلتر می شود (اولین بار از طریق پارچه پنبه ای و دوم از طریق فیلتر کاغذی). فیلتراسیون به 1 لیتر با آب اضافه می شود ، در فلاسک ها ریخته می شود ، با درپوش پنبه بسته می شود و به مدت 20 دقیقه در دمای 120 درجه سانتیگراد استریل می شود (درپوش های فلاسک با درپوش های کاغذی در بالا بسته می شوند).

از آب گوشت می توان در هر زمان برای تهیه محیط استفاده کرد. اگر آنها بلافاصله آماده شوند ، پیش عقیم سازی آب گوشت مورد نیاز نیست.

برای تهیه BCH ، 5-10 گرم به 1 لیتر آب گوشت اضافه کنید پپتون(اولین محصول هیدرولیز پروتئین) برای افزایش محتوای کالری محیط و 5 گرم نمک سفرهایجاد فعالیت اسمزی محیط را گرم می کنیم تا پپتون حل شود و مرتباً هم بزنید.

با افزودن محلول 20٪ Na2C03 تا زمانی که کاغذ مرطوب قرمز مرطوب به رنگ آبی درآید ، واکنش خنثی یا کمی قلیایی از محیط ایجاد کنید. استفاده از شاخص برای بررسی pH محیط مناسب است. bromothymallblow: 1-2 قطره از آن در یک فنجان پرسلن با یک قطره آبگوشت مخلوط می شود. در محیط خنثی ، bromothymolblau سبز بطری ، در محیط اسیدی زرد و در محیط قلیایی آبی است.

پس از تنظیم pH ، محیط مجدداً به مدت 5-10 دقیقه جوشانده می شود و پروتئین هایی که با تغییر واکنش محیط منعقد می شوند ، از طریق فیلتر کاغذی بدون روشن شدن آبگوشت یا شفاف سازی آن با پروتئین ، فیلتر می شوند. برای این کار ، سفیده تخم مرغ تازه را با دو برابر آب زده و با آبگوشت خنک شده تا 50 درجه سانتیگراد مخلوط کنید. مخلوط را به مدت 10 دقیقه روی حرارت کم جوشانده ، هم بزنید ، سپس فیلتر کنید. آبگوشت شفاف گوشت-پپتون در لوله های آزمایش ریخته می شود ، با شاخه های پنبه ای بسته می شود و در دمای 120 درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

گوشت پپتون آگار (MPA). 15-20 گرم آگار را به 1 لیتر MPB اضافه کنید. محیط گرم می شود تا آگار حل شود (نقطه ذوب آن 100 درجه سانتی گراد ، انجماد آن 40 درجه سانتی گراد است) ، واکنش کمی قلیایی محیط با محلول 20٪ Na2C03 ایجاد شده و از طریق قیف در لوله های آزمایش ریخته می شود (تقریبا 10 میلی لیتر آگار در یک ستون برای ریختن بعدی در ظروف پتری و هر کدام 5 میلی لیتر برای به دست آوردن آگار کج - سهام).

هنگام ریختن آگار ، لبه های لوله ها باید خشک بمانند ، در غیر این صورت چوب پنبه ها به شیشه می چسبند. لوله های با محیط در اتوکلاو در دمای 120 درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه استریل می شوند.

4.2 روشهای عقیم سازی

عقیم سازی - این تخریب کامل سلول های میکروارگانیسم ها در محیط های مغذی ، ظروف و غیره است.

چندین روش عقیم سازی شناخته شده است. استریلیزاسیون حرارتی بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد.

4.2.1 شعله ور شدن ، یا کلسین کردن

شما می توانید بلافاصله قبل از استفاده از حلقه های پلاتینی ، سوزن ، کاردک ، اشیاء فلزی کوچک (قیچی ، لنگه ، موچین) ، و همچنین میله های شیشه ای ، اسلاید های میکروسکوپ ، لغزش های پوششی و غیره را مشتعل کنید.

4.2.2 عقیم سازی با حرارت خشک

برای پردازش ظروف و مواد خشک مانند نشاسته ، گچ استفاده می شود. در این حالت ، شیء استریل شده در دمای 170 درجه سانتی گراد به مدت 2 ساعت (از لحظه ای که دمای مورد نیاز تعیین شد) در کابینت های خشک کن برقی نگهداری می شود. توصیه نمی شود درجه حرارت را از 170 درجه سانتیگراد بالاتر ببرید: شاخه های پنبه ای و کاغذ شروع به خراب شدن می کنند.

قبل از عقیم سازی ، ظروف شیشه ای با درپوش پنبه ای بسته شده و در کاغذ پیچیده می شوند. فنجان ها ، لوله های آزمایش ، پیپت ها ، پنبه ، گاز در کاغذ پیچیده می شوند یا در موارد و موارد خاصی قرار می گیرند ، که در آنها ظروف استریل را می توان پس از عقیم سازی ذخیره کرد.

در پایان عقیم سازی ، کابینت تنها پس از کاهش دما به دمای اتاق باز می شود ، در غیر این صورت ممکن است شیشه بشکند.

4.2.3 عقیم سازی با بخار جاری

بخار جاری (100 درجه سانتی گراد) برای درمان اجسامی که از گرمای خشک خراب می شوند و برخی از مواد مغذی که نمی توانند دمای بالاتر را تحمل کنند (محیط با کربوهیدرات ، MPF ، شیر) استفاده می شود. عقیم سازی در دیگ بخار کوچ به مدت 30 دقیقه به مدت 3 روز هر روز انجام می شود. این عقیم سازی نامیده می شود کسری

با یک گرم شدن در دمای 100 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه ، سلول های رویشی می میرند ، در حالی که اسپورهای بسیاری از میکروارگانیسم ها زنده می مانند. پس از چنین گرم شدن ، محیط را در ترموستات در دمای 28-30 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت قرار می دهیم. اسپورهای حفظ شده در اولین گرمایش زمان جوانه زدن به شکل رویشی را دارند که در حین گرم شدن بعدی می میرند. سپس این عمل 2 بار دیگر تکرار می شود.

4.2.4 عقیم سازی با بخار اشباع تحت فشار

این سریع ترین و مطمئن ترین روش عقیم سازی است و ماندگارترین هاگ ها را از بین می برد. با کمک آن ، اکثر مواد مغذی و ظروف استریل می شوند.

درمان با بخار اشباع در یک دیگ بخار دیواره ضخیم مهر و موم شده انجام می شود - اتوکلاودر درپوش یا در کنار اتوکلاو یک دریچه خروجی بخار ، یک فشار سنج و یک شیر ایمنی وجود دارد. فشار سنج نشان می دهد که چقدر فشار بخار داخل دیگ بخار بیشتر از حالت عادی است. برای جلوگیری از انفجار در صورت فراتر رفتن از حد فشار ، یک شیر ایمنی ایجاد می شود که بخار را آزاد می کند.

نشانگر فشارسنج در فضاهای فیزیکی با دمای معینی مطابقت دارد.

عقیم سازی قابل اطمینان با حرارت دادن در دمای 120 درجه سانتی گراد و فشار 1 اتمسفر به مدت 20 دقیقه انجام می شود.

عقیم سازی به شرح زیر انجام می شود. آب به داخل اتوکلاو ریخته می شود ، وسایل استریل شده در آن قرار می گیرند ، درب اتوکلاو پیچ می شود و گرمایش شروع می شود. شیر تا زمانی که تمام هوای اتوکلاو در اثر بخار آب جابجا نشود باز است. هنگامی که بخار شروع به خروج از شیر در یک جریان مداوم می کند ، شیر بسته می شود ، فشار بخار در اتوکلاو به 1 اتمسفر می رسد و در این سطح به مدت 20-30 دقیقه حفظ می شود. سپس حرارت متوقف می شود ، آنها منتظر می مانند تا سوزن فشار سنج به 0 برسد ، شیر را با دقت (کم کم) باز کرده و بخار را خارج کنید. فقط پس از آن درب اتوکلاو را باز کنید. اگر شیر آب قبل از افت فشار باز شود ، مایع موجود در ظروف استریل شده به جوش آمده و دوشاخه ها را از آنها بیرون می اندازد.

اتوکلاو همچنین برای عقیم سازی جزئی با بخار جاری استفاده می شود. در این حالت ، درب پیچ نمی شود تا بخار آزادانه خارج شود.

4.2.5 پاستوریزاسیون

پاستوریزاسیون عقیم سازی ناقص یا جزئی است ، به این معنی که به ترتیب به مدت 30-10 دقیقه در دمای 65-80 درجه سانتی گراد گرم می شود و سپس با خنک شدن سریع تا 10-11 درجه سانتی گراد گرم می شود. شیر ، آبجو ، شراب و سایر محصولات پاستوریزه می شوند.

مواد و تجهیزات

MPB ، آگار ، لیکوس قرمز ، برموتیمولبو ، صفحات چینی با چاه یا فنجان ، میله های شیشه ای ، محلول 20٪ Na2C03 ، لوله های آزمایش در قفسه ها (برای ریختن آگار) ، قیف ها ، پشم پنبه ، ظروف پتری ، پیپت های 1 میلی لیتری Mohr ، کاغذ برای فنجان و پیپت ، فلاسک 250 میلی لیتری ، نخ های تند.

5. شمارش و جداسازی فرهنگ خالص میکروارگانیسم ها

5.1 روشهای شمارش تعداد میکروارگانیسم ها

5.1.1 شمارش تعداد میکروارگانیسم ها (CFU) در خاک با استفاده از صفحات مغذی در ترکیب با روش رقت های پی در پی

خاک مطلوب ترین محیط برای توسعه میکروارگانیسم ها است. با توجه به ناهمگونی زیاد ترکیب آن ، تعداد میکروارگانیسم های موجود در آن را در نظر می گیرند میانگیننمونه خاک

ابتدا سوسپانسیون ها (با روش رقیق سازی) حاوی غلظت های مختلف خاک در 1 میلی لیتر آب تهیه می شود. برای انجام این کار ، یک نمونه خاک در 1 گرم از شیشه یا کیسه روی شیشه ساعت استریل با کاردک چینی استریل یا قاشق چای خوری آلومینیومی گرفته می شود. هنگام وزن کشی خاک ، شیشه ساعت با شیشه ساعت استریل دیگری پوشانده می شود.

نمونه ای از خاک ، با رعایت شرایط آسپسی ، به یک فلاسک 250 میلی لیتری با 99 میلی لیتر آب استریل منتقل می شود. مخلوط به مدت 5 دقیقه بدون خیساندن چوب پنبه تکان داده می شود. با استفاده از پیپت استریل ، 1 میلی لیتر از سوسپانسیون حاوی 10-2 گرم خاک را گرفته و با 9 میلی لیتر آب لوله کشی استریل به لوله آزمایش منتقل کنید. پیپت بارها با آب در لوله آزمایش شسته می شود تا جایی که ممکن است سلول ها از دیواره های آن شسته شوند. با یک پیپت استریل دیگر ، 1 میلی لیتر سوسپانسیون دیگر از فلاسک برداشته و در فلاسک دوم ، حاوی 99 میلی لیتر آب لوله کشی استریل قرار دهید. این پیپت به همان روشی که در مورد اول شستشو می شود شسته می شود. لوله و فلاسک دوم به مدت 1 دقیقه تکان داده می شوند. غلظت خاک در لوله آزمایش 10-3 گرم ، در فلاسک دوم -10-4 گرم خواهد بود. به همین ترتیب ، 1 میلی لیتر سوسپانسیون از فلاسک دوم با پیپتهای استریل جدید به لوله آزمایش دوم منتقل می شود. 9 میلی لیتر و در فلاسک سوم با 99 میلی لیتر آب لوله کشی استریل و سوسپانسیون های جدید حاوی 1 میلی لیتر به ترتیب 10-5 و 10-6 گرم خاک آماده کنید.

کارهای عملی

برای دانش آموزان سال دوم

در مورد میکروبیولوژی

1. آزمایشگاه میکروبیولوژی.

2. روشهای تحقیق میکروسکوپی. آشنایی با میکروسکوپ

3. روشهای آماده سازی رنگ آمیزی. روش های آماده سازی

برای میکروسکوپ

4. روشهای جمع آوری مواد. رسانه های فرهنگی

5. روش تحقیق باکتریولوژیکی بر روی مثال استافیلوکوک ها.

6. پرورش و نشان دادن ویروس ها.

9. تأثیر عوامل محیطی بر میکروارگانیسم ها.

10. واکنشهای سرولوژیکی. واکنش آگلوتیناسیون

11. واکنش هماگلوتیناسیون.

12. واکنش اتصال مکمل.

13. واکنش بارش. واکنش بارش حلقه

14. واکنش ایمونوفلورسانس. واکنش ایمنی (آزمایشات پوستی).

واکنش اپسونوفاگوسیتیک

15. واکسن ها.

16. آماده سازی سرم.

معرفی

ابزاربرای کمک به دانش آموزان کالج پزشکی مسکو MIIT حمل و نقل راه آهن آماده شده است کار عملیدر زمینه "مبانی میکروبیولوژی ، ویروس شناسی و ایمونولوژی".

ماژول یادگیری

موضوع درس: به فهرست مطالب مراجعه کنید

نوع درس: کاربردی

محل درس: آزمایشگاه میکروبیولوژی

زمان: 16 * 2 ساعت

دانش آموز باید بداند:

بخش 1

مبانی پزشکی

باکتریولوژی و میکروبیولوژی

کار عملی شماره 1

موضوع:"آزمایشگاه میکروبیولوژی"

یک آزمایشگاه میکروبیولوژیکی در بیمارستانها و ایستگاههای بهداشتی و اپیدمیولوژیکی سازماندهی شده است. آزمایشگاه های خاصی نیز وجود دارد که در آنها با عوامل بیماری زا به ویژه عفونت های خطرناک کار می کنند

آزمایشگاههای ویروس شناسی و غیره

وظایف آزمایشگاه میکروبیولوژیکی عبارتند از:

1) تشخیص باکتریولوژیکی بیماریهای عفونی ؛

2) مطالعات بهداشتی و باکتریولوژیکی آب ، هوا و اجسام

محیط زیست؛

آزمایشگاه شامل موارد زیر است:

1) اتاق آزمایشگاه با جعبه لعاب دار برای هدایت

تحقیقات میکروبیولوژیکی (در جعبه باید نصب شود

لامپ ضد باکتری)؛

2) شستشو ؛

3) آمادگی (اتاق برای تهیه ظروف و سایر موارد

کار کمکی) ؛

4) اتوکلاو ؛

5) اتاقی برای دریافت تجزیه و تحلیل و صدور نتایج تحقیقات ؛

6) ویواریوم ؛

آزمایشگاه میکروبیولوژیکی باید مجهز به موارد زیر باشد:

• ترموستات ،
• یخچال ،
• اتاقهای خشک کردن ،
• سانتریفیوژ ،
• ظروف شیشه ای آزمایشگاهی ؛

و همچنین تجهیزات:

• مشعل الکل یا گاز
• حلقه های باکتریولوژیکی
• des راه حل