Практическа работа по микробиология. Семинар по микробиология

Федерална агенция за образование

Държавна образователна институция

- Иркутски държавен университет»

Малка работилница за микробиология

Наръчник за преподаване

Иркутск 2009.

UDC 579 (076.5)

Отпечатано с решението на редакционния и издателски съвет на държавния университет в Иркутска

Wilkina Workshop по микробиология: Проучване. Ръководство за изследвания По-висок. проучвания. Институции в специалитетите "Микробиология", "Биология" и "Физиология".

6. Микробната маса не трябва да замърсява ръцете, масата и околните елементи. Разситата микробна суспензия се неутрализира при използване на дезинфектанти.

7. След края на работата на културата учителят ще предаде учителя, зашеметите тръби и чаши, поставени в термостата.

8. Бактериологични контури, игли, пинсети и други метални предмети след контакт с микроорганизми изгарят в пламъка на алкохола и се поставят в специален статив.

9. Използва се материални и покривни очила, пипети, шпатули и др. Той се поставя в 3-5% разтвор на карболова киселина или други дезинфекциращи разтвори.

10. Изпускателни култури в тестовите тръби, ястия Петри и др. Неутрализират с помощта на дезинфекционни разтвори през деня, след това ястията се кипи и измиват.

11. Необходимо е стриктно да се спазва личната хигиена - след края на работата е необходимо да се измият внимателно ръцете си със сапун.

12. Необходимо е да се спазят техниките за безопасност при работа с електрически уреди и химически реактиви.

Обща микробиология
Глава I. Микроскоп и микроскопирополна техника
1. Светло-оптична микроскопия
2. Микроскопия в тъмно поле
3. Микроскопия за фаза контраст
4. Луминесцентна (флуоресцентна) микроскопия
Глава II. Общи идеи за отглеждане, техники за посев и необходимото оборудване за работа с микроорганизми
Глава III. Методи за приготвяне на наркотици на микроорганизми
Глава IV. Изследване на микробната клетка
1. Форми на клетки на микроорганизми
2. структурата на клетките на микроорганизми (цитохимични изследвания)
3. оцветяване на клетки на микроорганизми от грам
4. оцветител за бактерии
5. Капсули за оцветяване
6. Цвят Жгутиков
7. Боядисване на бактериите на ядреното вещество
8. Оцветяване на включванията на клетки на микроорганизми
Глава V. Хранене на микроорганизми
1. Стойността на отделните хранителни елементи
2. Изготвяне на хранителни среди
3. Методи за стерилизация
Глава VI. Отчитане на броя на бактериите и разпределението на чистата култура
1. Отчитане на броя бактерии в почвата
2. Определяне на качеството на бактериите
3. Отчитане на броя на микроорганизмите във вода и други течности
4. Отчитане на броя на бактериите във въздуха
5. Изолиране на чисти бактериални култури
Глава VII. Определяне на формата на бактерии
Глава VIII. Трансформация от микроорганизми на безотични органични вещества
Ферментационни процеси
1. Алкохолна ферментация
2. Ламинираща ферментация
3. Ферментация на мазна киселина
4. Ферментация на пектин вещества
5. Ферментация на целулоза
6. Окисление на фибри
7. Окисление на мазнините
8. Окисление на въглеводороди
Глава IX. Трансформация чрез микроорганизми на органични и минерални азотни съединения
1. Амонификация
2. Нитрификация
3. Денитрификация (дишане на нитрати)
4. Биологично фиксиране на атмосферен азот
Глава X. Трансформация от микроорганизми на серни съединения, желязо и фосфор
1. Трансформация от микроорганизми на серни съединения
2. участието на микроорганизми в превръщането на желязо
3. Трансформация чрез микроорганизми на фосфорни съединения
Селскостопанска микробиология
Глава XI. Общ микробиологичен анализ на почвата
1. Изследователски методи
2. Групи микроорганизми, състав и подготовка на хранителни носители
3. Вземане на средната почвена проба и приготвянето на пробата към микробиологичен анализ
4. Приготвяне на суспензия на почвата
5. Отчитане на различни групи микроорганизми
6. Определяне на общия брой микроорганизми в почвата чрез директна сметка под микроскопа
Глава XII. Изследване на центрове на микроорганизми
1. Метод за рисуване на стъкло върху N. G. студ
2. Изследване на микробна ценоза в почвата съгласно метода на PEFE и GAB
3. Метод на придипване на капилярия в модификацията на Аристовская
4. Идентифициране на микроорганизмите на групата на автохтон, участващи в разлагането на хумусни вещества, съгласно метода на грозде в модификацията на топлината
5. откриване на микроорганизми, участващи в разлагането на хумусни вещества, съгласно метода на топлина
Глава XIII. Определяне на биологичната активност на почвата
1. Определяне на биологичната активност на почвата върху интензивността на разграждането на мрежата (Mishoustina, Eastore и Petrova)
2. Определяне на общата микробиологична активност на почвата за въглероден диоксид
3. Определяне на амонизиращата почвена активност
4. определяне на амонизиращата активност на микроорганизмите
5. Определяне на активността на нитрификация на почвата
6. Определяне на дентиричната активност на почвата
7. Дефиниция на активността на азотни микроорганизми
Глава XIV. Проучване на кореновата зона на бактериите и корените
1. Отчитане на бактериите в ризосферата по метода на красивото
2. отчитане на ризосферата и кореновата микрофлора по метода на последователни лауди на корените от E. 3. Tepper
3. Изолиране на чисти култури на нодула бактерии, количествено счетоводство в почвата, определяне на тяхната дейност и вирулентност
Глава XV. Анализ на бактериалните лекарства
Глава XVI. Микробиология Feed.
1. епифитна микрофлора на зърното и нейната промяна при съхранение на фуражи
2. Анализ на силози
3. Мая на фураж
Глава XVII. Микрофлора на мляко и млечни продукти
1. Бактериологичен анализ на млякото
2. Методи за освобождаване на млечнокисели бактерии в чиста култура
3. Запознаване с микрофлора на масло
Индекс на литературата

Препис.

1 Министерство на образованието и науката Руска федерация Федерална агенция за образование Московски държавен университет по инженерна екология Kustova N.A. Лабораторен семинар по микробиология Москва 2005

2 микробиологични лабораторни работилници са предназначени за студенти от специалитети 3207 и 3302 за дисциплината "Основи на микробиологията и биотехнологията", както и за студенти от катедрата "Биотехнология на екологичната и промишлеността" на дисциплината "екологична и промишлена микробиология". Семинарът се състои от три раздела. Първата част е посветена на проблемите на общата микробиология. Произведенията на този раздел изследват морфологичната структура на различни групи микроорганизми, методи за микроскопични изследвания, микробиологични техники за посев, методи за стерилизация и методи за количествено отчитане на микроорганизмите. Вторият раздел съдържа работа по използването на микроби в биотехнологията, за да се получат различни вещества от органични киселини, алкохоли, антибиотици, ензими. Произведенията на третия участък са проучени въпроси на екологичната микробиология. Част от работата показва ролята на микроорганизми в глобалните биогеохимични цикли, а останалите са посветени на проблемите на биотехнологичната опазване на околната среда. Всяка тема съдържа теоретично въведение и практическа част, в която се използва описанието на използваните методи, процедурата за извършване на работата, съдържанието на работния доклад, както и контролни въпроси. 2.

3 Предговорният лабораторен семинар по микробиология е предназначен за студенти от 3 курса на специалитети 3207 и 3302 по дисциплината "Основи на микробиологията и биотехнологията", както и за студенти от четвъртата година на катедрата "Биотехнология на екологичната и промишлената биотехнология" на Специализация "Биотехнологична защита на околната среда" в дисциплината "екологична и индустриална микробиология. Лабораторният семинар се основава на "методически насоки за лабораторната работа" ЕД. P.I.Nikolaeva, използван в катедрата по "процеси и микробиологични машини" от момента, в който е създаден отдел. В преподаването на микробиология в инженерите за обучение за микробиологичната индустрия е направен огромен принос от S.N., KB. N.V. Pomortseva. Под негово ръководство бяха изготвени методически инструкции изследователи Отдели: M.A.BRUZADINA, т.е. Ломоваова, Н.А. Кустова, те. Ламатина и К.А.Соловьова. Промяната учебна програма В съответствие с новата специалност екологичният инженер е наложил да разшири хода на микробиологията и да го допълва със задачите по биотехнологични методи за опазване на околната среда. Лабораторният семинар се състои от три раздела. Първата секция е посветена на общата микробиология: морфология на микроорганизмите, методи за неговото изследване, микробиологични техники за сеене, методи за количествено отчитане на микроорганизмите. Вторият раздел обхваща някои примери за използването на микроби в промишлеността. Третият раздел обхваща въпросите на екологията на микроорганизмите, тяхната роля в глобалните цикли на елементите, както и в биотехнологичните методи за опазване на околната среда. Подготовката на този семинар присъствал от студента на катедрата на Н.В. Сиабрев и с.В. Е.С. Горшина. Авторът изразява дълбока благодарност към задника. кафене. Микробиология MSU N.N. Бебе за ценни коментари и съвети, както и с. P.P. Madev за помощ при проектирането на текст и илюстративен материал. 3.

4 4 Общи правила за работа в микробиологичната лаборатория Правилата за работа и поведение в лабораторията на правилата и поведението в микробиологичната лаборатория имат много общо съгласие с правилата за работа в химическите лаборатории, но имат свои собствени специфики. Микробиолог в повечето случаи работи с чисти култури на микроорганизми, т.е. С микроорганизми от всякакъв вид, изглед и напрежение. Тъй като външните микроби са разположени на всички околни предмети и във въздуха, се прилагат специални методи на работа, за да се избегне инфекцията на изследваната култура на микроорганизма или самия човек. За тази цел хранителни среди, ястия, инструменти са стерилизирани, лабораторията и работните места съдържат чисти, отговарят на определени правила при работа с микроби. Не трябва да има допълнителни обекти в лабораторията. Необходимо е редовно да се извършва мокро почистване. Различни повърхности на лабораторните помещения се подлагат периодично на дезинфекция. Дезинфекцията е дезинфекция, т.е. Унищожаване на причинители на инфекциозни заболявания при обекти външна среда. За да направите това, използвайте 0.5 3% хлорен разтвор или 3 5% разтвор на фенол (карболова киселина). Десктопът трябва да бъде дезинфекциран с 70% разтвор на етил или изопропилов алкохол. Дезинфекцията на въздуха се постига чрез проста вентилация (най-малко мините). По-ефективен начин за дезинфекция на облъчване на въздуха на помещението чрез ултравиолетови лъчи с бактерицидни лампи. Особено често ултравиолетовото облъчване се използва за стерилизиране на бокса. Бокс специална малка стая за тихи култури, количествено счетоводство на микроорганизми на чаши на Петри и някои други произведения, изискващи особено ясни условия. Преди работа боксът е облъчен в мин. Таблицата е избърсана с алкохол, стени и етаж периодично измиване. Вместо бокс, лабораторията може да бъде оборудвана с ламинарни шкафове (фиг. 1), които също са стерилизирани чрез бактерицидни лампи. За

5 Работата включва фен за създаване на ламинарен поток от стерилен въздух, пропуснат през бактерицидни филтри. Основното оборудване на микробиологичната лаборатория включва: микроскопи, термостати за отглеждане на микроорганизми, оборудване за стерилизация (автоклав и сушилен шкаф), центрофуги, дестилатор, хладилник за съхраняване на музейни култури на микроорганизми, шкафове за поставяне на стъклария и реактиви, необходими устройства (фотоелектроколориметри, \\ t рН-чрелове и др.). Всеки ученик е фиксиран от работното място, върху което са поставени: микроскоп, затворен от капак, бактериологичен контур, субект и покривни очила, стерилни пипети, алкохолна горелка, филтърни ленти, стъклен маркер, съд с дезинфекцираща се течност. На масата не трябва да бъде нищо, което не е пряко свързано с работата на работата. В лабораторни класове в микробиологията трябва да се спазват правилата за безопасност. пет

6 6 Безопасност на безопасността в лабораторията в микробиологична практика, прибори от химически очила са широко използвани. Трябва да се внимава, когато работи с него. Раздели счупени ястия внимателно почистете. Когато често се използват анализи, силни алкални и киселинни разтвори. Необходимо е да се работи с тях с голяма грижа, тъй като тези вещества вредно действат върху кожата и облеклото. Ако киселината се наведе случайно, тя трябва да бъде плаваща с голямо количество сода и след това да се изплакне няколко пъти с вода. Разсипаните алкали трябва внимателно да бъдат унищожени и елементите, към които тя трябва да се лекува със слаб разтвор на оцетна киселина. Когато киселините или основите на кожата на кожата, те трябва незабавно да се измият обилно с вода. В микробиологичната лаборатория те се занимават с живи микроорганизми. Основните произведения са стерилни, т.е. Работете с една култура на микроорганизми, която не трябва да се зарази с аточни микроби. За да се предотврати замърсяването на сеитбата, се използват специални методи за стерилизация. Освен това е важно да се спазят чистотата в лабораторията. Прибори за хранене с култури на микроорганизми не трябва да остават отворени. Биомаса на микроорганизми, ако не е необходима за анализи, се изхвърля само след стерилизация в автоклава. Културите на микроорганизмите произвеждат газов или алкохолна горелка от пламък, така че изгарянията трябва да бъдат наблюдавани и на първо място, внимателно да вземете дълга коса. Горелката трябва да се изгаря само когато е необходимо. Ако памучен корк, алкохол или хартия, пожари, угасвани от кърпа случайно се обръщат при сеитба. С по-големи огнища, пожарогасителят използват пожарогасители. Използвани пипети, субект и покривни очила, шпатули и др. Поставени в съд с дезинфекцираща течност. Студентите трябва постоянно да помнят, че се занимават с микроорганизми, които далеч не могат да бъдат безопасни, особено в работата по разпределението на микробите от екологични обекти. Ето защо, в края на урока, учениците трябва да поставят на работното място и да измият ръцете си със сапун.

7 Ако неизправността на електрическата мрежа трябва да изключи електрическите уреди и централизираното им захранване. Раздел 1. Обща микробиологична тема 1. Морфология на микроорганизмите и методите на нейното проучване Микробиологията изследва органите, които имат микроскопични размери, т.е. Измерени микрометри или фракции на микрометри. Един микрометър е 10-6 метра и е съкратен като MKM. Микроорганизмите се характеризират с интензивен метаболизъм и са в състояние да извършват различни химически трансформации. Различните микроорганизми са различни в тяхната структура и в тези биохимични процеси те извършват. Комбинацията от тях в една група е причинена не само от малкия размер, но и от общите методи на отглеждане и изследване. Да изучава структурата на микроорганизмите, външния им вид, форма, размери, т.е. Да изучавате морфологията на микроорганизмите, използвайте микроскоп. Най-малките частици, които могат да се видят в съвременните светлинни микроскопи, имат повече от 1/3 от дължината на вълната на светлината, т.е. Не по-малко от 0.2 цт, което е свързано с използването на видимата част на светлината, имаща дължина на вълната от 0.4 цт до 0.7 микрона. Микроскопно устройство на фиг. 2 показва появата на микроскоп MBI-3, общ в научната и образователната практика. Обектът, който се разглежда, лекарството е поставено на масата на обекта и се осветява от дъното с лъчите на светлината, които излизат от осветител, падат върху огледалото, след това преминават през кондензатора и се фокусира върху препарата. Основни парчета микроскоп: окуляри, тръба, въртяща се накрайник с лещи, маса с клипове за лекарства, кондензатор, макросим микрозаза за насочване към острота и, накрая, статив, в който е монтиран всичко това. 7.

8 Преди микроскоза, проверете коректността на осветителната инсталация (от Kelerur). За да направите това, преместването на касетата на илюминатора със електрическа крушка, постигнете ясно изображение на резбата 8

9 светеща лампата върху затворена напълно диафрагма на кондензатора, така че това изображение да е напълно запълнено с отвора на кондензатора. Увеличаването на диафрагмата на илюминатора отвори конденза на диафрагмата и придвижване на кондензатора, постигане на остър образ на диафрагмата на илюминатора в областта на изгледа на микроскопа. Така че светлата светлина не слепи очи, предварително намалява спиралата на лампата. И накрая, изображението на отвора на блендата е монтирано в центъра на зрителното поле, а отворът на осветител е отворен така, че цялото зрително поле да свети. Микроскопът е оптична система с две нива на увеличение: първото увеличение се извършва от лещата, вторият окуляр. Обективът дава увеличено обратен образ на обекта, който се счита за окуляр. В резултат на това очите на наблюдателя виждат силно увеличен обратен образ на темата. Следователно движението на оставащия обект се възприема от окото като движение вдясно. Общ нарастване на микроскоп, т.е. Разглежда се увеличение, в което се счита обектът под микроскоп, се определя като продукт на увеличаване на лещата и окуляра. Обективът дава увеличение от 10, 40, 60, 90 пъти, окуляри понякога. Ако се прилага бинокулярна дюза, тя дава допълнително увеличение. На фиг. 3 показва схематична диаграма на оптична микроскопска система. Обективът за формира валидно обърнато изображение в равнината на обекта А. Изображението, дадено от обектива, се увеличава по-нататък с очния на Е. Тъй като Z е във фокуса на окуляра Е, наблюдателят вижда повишен въображаем образ a in X равнината, която обикновено се намира на 25 см от окото. На разстояние, най-удобно за почти изглед. Трябва да се има предвид, че такава идея за механизма за формиране на изображения е в висока степен Опростено, защото игнорира ефекта от дифракцията и редица други фактори. При работа с микроскоп учениците изучават микроби с увеличение понякога. Най-голямото увеличение, което дава оптичен микроскоп, 3000 пъти. Най-малкият размер на частиците, който може да се види в такъв микроскоп, 9

10 е 0.2 μm, което се дължи на дължината на вълната на видимата част на спектъра. Морфология на микроорганизмите Светът на микроорганизмите включва огромно разнообразие от форми, които не представляват нито една систематична група. Основните предмети на микробиологията са бактерии, но освен тях, микробиолозите все още изучават дрожди, гъби, микроскопични водорасли и някои най-прости. На фиг. 4 представя основните групи микроорганизми (с изключение на най-простите); Съотношенията на техния размер са запазени. Всички живи организми, различни от вирусите клетъчна структура. В съответствие със своята клетъчна организация те са разделени на прокариотна и еукариотна. 10.

11 Основната разлика между еукариотите от прокариотите се състои в присъствието на вторични кухини, разделящи ядрото и други клетъчни структури от цитоплазмата. Това е появата на вторични кухини, позволени да направят скок в еволюцията на целия жив свят чрез увеличаване на вътрешната повърхност на мембраните на EUKARYOT. Това стана възможно в съответствие с увеличаването на скоростта на дифузия, в същото време извършват по-голям брой биохимични реакции върху мембрани. Prokaryotm са бактерии, включително актиномицети и цианобактерии. EUKARIOTES са всички растения, животни, дрожди, гъби, най-прости. Сред прокариотите в момента е разпределена група от архебактерии, която включва метаноген, екстремни халофили, (живеещи в много осолена вода) изключително термофилни бактерии, окислителна и възстановяваща молекулна сяра, както и термоплазма, лишени от клетъчна стена. Новото разделяне е направено въз основа на сравнение на нуклеотидни последователности в малки рибозомни РНК сегменти. единадесет

12 Археите се различават в състава на клетъчните стени, липидите и някои други физиологични биохимични характеристики (например, те имат друг механизъм за фиксиране на CO 2). По този начин, в структурата на клетъчната организация, в момента се разпределят 3 групи: Archbacteria, (според новата археа номенклатура, архите), EUBAXACAXIA (според новата номенклатура на бактериите, бактериите) и еукариоти (според новата номенклатура на EUKARYA ). Работа 1. Микроскопско проучване на бактерии Морфологични бактерии Теоретично въвеждане Тази група микроорганизми е най-многобройни, широко разпространени в природата и има голяма индустриална стойност. За микроорганизми се използва двоичната номенклатура, както в зоология и ботаника. В съответствие с тази номенклатура всеки вид има име, състоящо се от две латински думи. Първата дума означава род, а вторият изглед. Генеричното име винаги е написано от главната буква и образеца с линията. Повечето от бактериите на едноклетъчни организми сферични, ролкови или извита форма. Сред бактериите има малко количество цветни форми. Бактериите са много малки, диаметърът на клетката на сферичните бактерии е 1 2 микрона. Бактериите се умножават с разделение (при благоприятни условия, разделянето се случва след мин.). Някои бактерии са подвижни. Способността за преместване е свързана с наличието на специална органична флагела. Най-простите под формата на сферични бактерии (cockki). Те се намират или под формата на единични топки, или топки, които са удобни един с друг. Чрез местоположението на клетките след разделяне, сферичните бактерии са разделени на монококи (единични кокци), тетракучи (комбинирани 4), сарцини (комбинирани 8), стафилококи (клъстер), стрептококи (вериги за коккини). 12

13 бактерии с форма на пиле са най-многобройни бактерии. Те имат цилиндрична форма на клетки със заоблени или заострени краища и варират в една голяма степен по отношение на дължината на ширината. Те могат да бъдат поставени поотделно или да образуват къси или дълги вериги. Прилепките могат да бъдат различни дължини, обикновено няколко μm и ширината е около 1 микрона. Някои бактерии с форма на въжени са в рамките на специалните спорове за повикващия. Всяка клетка образува един спор, който служи за прехвърляне на неблагоприятни условия. Спор при подходящи условия (температура, влажност, хранителни вещества) покълва, превръщайки се в пръчица. Устойчивостта на бактериалния спор е по-добра от съпротивлението на живите организми. Например, спорът Bacillus Subtilis Hay Stick издържа на температурата от 100 ° C в продължение на 3 часа. Този спор за стабилност затруднява борбата с инфекциите. Извиненията на микроорганизмите се различават по степен на клетка на клетките и по броя на завоите. Те са разделени на вибрания, спистси и спирошет. Ако бактериите имат една непълна извивка на спиралата, тогава тя се нарича вибрина. Ако бактерията има няколко спирални къдрия, тя се нарича Spirilli и микроби, които имат аргумент с голям брой малки къдрици, се наричат \u200b\u200bспирошет. Нихитните бактерии са нишки, състоящи се от цилиндрични или дискови клетки. Нишките на някои видове са затворени в лигавицата, които могат да бъдат импрегнирани с железни хидроксиди или манганови соли. Процесът на натрупване на тежки метали от разтвори се наблюдава в клетките на някои Ferrucks. Големи нихи бактерии r. Beggiatoa се отлага в серни клетки. Хубавите бактерии обикновено живеят в морски и пресни води, има и в разлагане на органични остатъци, в червата на животните. Цианобактериите включват голяма група организми, които съчетават прокариотната структура на клетката с възможност за извършване на фотосинтеза. Цианобактериите клетъчни пигменти в допълнение към хлорофил а (зелено) съдържат фикотинов пигмент 13

14 синьо. На тази основа те са били наречени сини Xeopal водорасли. Повечето от тях са многоклетъчни организми, които са дълги, най-често забранени нишки (трихомия). Клетките в нишките се комбинират с обща външна стена. Понякога лигавицата на "рогозки" образуват лигавицата. Възпроизвеждането се извършва чрез разлагане на нишката в отделни раздели. Някои видове се движат с плъзгащи се (r. Спирулина). Actinomycetes (разклоняващи се бактерии, лъчисти гъби) Голяма група от конроден микроорганизми, които образуват тънки разклонителни нишки с дължина от няколко mm и диаметър 0,5 1.5 цт. Те са вид група микроорганизми, които в морфологични термини имат прилики с гъби (фиг. 5). Клетки Значителна част от представителите на тази група могат да се разклонят, което е характерен знак за гъби. Въпреки това, дължината на клоновите влакна на актиномицетите достига няколко милиметра, докато дължината на мицела от гъби от няколко сантиметра. Гифовете на гъбите обикновено са по-дебели от резбите на Actinomycete. Според морфологията и развитието на актиномицети са разделени на по-високи и по-ниски форми. Най-високите са организми с добро 14

15 разработени септични или незадействащи мицелий и специални органи на понятието. Споровете се формират под формата на вериги за специални географски GIF файлове на въздушна микроза. Структурата на структуриращите органи е различна в различни типове: дълга или къса, права или спирална форма (фиг. 6). Според присъствието на мицела и структурата на органите на храчките, най-високите актиномицети приличат на мицелни гъби. Някои актиномицети имат мицели само в млада култура, която се разпада с възрастта с образуването на ропост и коккоидни клетки. По-ниските форми на актиномицети нямат истински мицел. Способността да се образува мицел се изразява в тях само в тенденциите на клетките към клон. Долните актиномицети включват, например, видове от рода mycobacterium, които имат свойство за промяна на формата на клетки с възрастта на културата (фиг. 7). Този имот се нарича племорфизъм. Сред най-високите Actinomycetes, водещото място в естествените среди заемат видовете Streptomyces. Aktinomycetes играят голяма роля в процесите 15

16 Формиране на почвата и създаване на плодородие на почвата. Actinomycetes унищожават сложни органични съединения (целулоза, хумус, хитин, лигнин и т.н.), недостъпни за много други микроорганизми. Почти всички видове Streptomyces генерират специфични жизненоважни продукти с антибиотични свойства. Някои видове са причинители на растителни заболявания, животни и хора. В допълнение към основните форми на бактерии, има продукти и свързващи бактерии, които носят увеличените процеси. (Фиг. 8) 16

17 Оценките са различни. Някои бактерии служат за разплод, в други, за да прикрепят клетката към субстрата. 17.

18 18. Практическа част Целта на работата е да проучи морфологията на представителите на бактериите. Процедурата за извършване на работата, изпълняваща първата работа, учениците изучават жалбата с микроскоп, след това разглеждат готови наркотици на представители на бактерии, след това Те независимо подготвят препаратите на живи бактерии и микроскопия. Първо, учениците са микроскопични завършени фиксирани бактериални препарати. Фиксираните препарати са микроорганизми, суспендирани във водна среда, изсушена върху субектното стъкло и боядисани с анилинови багрила. Подготовката на някои живи микроорганизми ученици се приготвят самостоятелно. За да направите това, към чистото стъкло на стъклото се нанася върху чистото стъклено стъкло, в което калцинираният и студен бактериологичен контур е направен от малко количество микроби, изследвани, тя се разбърква внимателно и покрита с покриваща стъкло. Излишната вода се отстранява чрез филтърна хартия. Лекарството е поставено на масата на субекта и се фиксира от скобите. Първоначално погледнете в окуляра и въртящ се макролинт, остър образ на обекта се постига с малко увеличение с лещата 10Х. След това микроскопът се прехвърля към голямо увеличение с лещата 40x. Въртенето на винтовете трябва да бъде направено с повишено внимание, тъй като с твърде остро спускане можете да смачквате лещата. В микроскоза, трябва да се има предвид, че микроскопът, особено с големи мащаби, не улавя цялата дълбочина на обекта, следователно, с постепенно спускане на тръбата, използвайки microvint, обектът е видим първи, а след това в Оптична секция. 1. Вижте фиксирани лекарства на микроорганизми. Lactococcus lactis причинителят на млечна ферментация; Сферични коки за клетъчна форма; Клетките са свързани към веригата. Използвани за производство на млечни киселинни продукти.

19 Lactobacillus acidophilum речни бактерии; Причинителят на лактовата ферментация. Използвани за производство на млечни киселинни продукти. Acetobacter Aceti Rodid бактерии, окислителен етанол в оцетна киселина. Използвани за производство на оцет. Streptomyces griseus actinomycete, форма на клетка под формата на тънки разклонени нишки; Изливане на антибиотичен стрептомицин. Saccacharopolyspora еридрата актиномицет, форма на клетка под формата на тънки разклонени нишки; Антибиотичен производител на еритромицин. 2. Преглед на препарати на живо Bacillus subtillis клетъчна форма под формата на фини движещи се пръчки; формуляри; Изливане на ензимни препарати. Spirulina platensis цианобактерии; формата на клетки под формата на една нишка, състояща се от цилиндрични клетки плътно в непосредствена близост до друга; Има плъзгащо движение. Използва се под формата на хранителна добавка. Съдържание на отчета 1. Латинско наименование на микроорганизма. 2. Морфология на клетката (дават чертеж с индикация за увеличаване на микроскопа и поддържане на съотношението на размерите на клетките). 3. Използване на изследвани бактерии в промишлеността. Контролни въпроси 1. Опишете микроскопското устройство. 2. Как да се определи увеличаването на микроскопа? 3. Каква е формата на бактериални клетки. 4. Назовете характеристиките на морфологията на Actinomycete. 5. Какви представители на бактериите знаят и какви са техните практическа стойност? Работа 2. Морфология на еукариотни микроорганизми Теоретично въведение 19

20 към еукариотните микроорганизми, които са проучени от микробиолози, включват: гъби, дрожди, микроволци и някои най-прости. Морфологични гъби гъби, които духат микроорганизми, имаща филаментална форма на клетки. Образуваните от тях дълги разклонени нишки се наричат \u200b\u200bGifami. GIF файлове в агрегат образуват мицел. Според техните размера на Gifs на гъби, много по-големи актиномицети. Мицелът в редица мухъл гъби се разделя на дялове (септични мицел) и няма други видове дял. В биотехнологията като производители се използват главно мухъл гъби. Под името "мухъл гъби", някои представители на Ficomyzets, вземане на проби и несъвършени гъби са комбинирани. На плътни субстрати, мухъл гъби образуват заоблени пухкави, уеб-подобни, служещи или прахообразни колонии на зелено, жълтеникаво, черно или бяло. Колониите на плесен се състоят от голям брой GIF. Повечето от GIF файла се развиват във въздуха и се разделят в дебелината на субстрата. GIF файлът често се образуват от кондиитници, върху които са оформени спорове или вътре в спорангий или под формата на екзоспори, разположени с вериги. Konidespora или Conidia, служи за развъждане на болета (Фиг. 10). Конидията, попадаща в благоприятни условия, покълва в мисей. Мулковите гъби са много широко разпространени в природата и имат мощно ензимно устройство. Следователно те са основните деструктори на органични съединения в природата. Мулковите гъби също се използват широко в индустрията за производство на органични киселини, антибиотици и ензими. Двадесет

21 Морфологията на дрождите дрожди е отделна група от едноклетъчни микроскопични гъби, които са от голямо практическо значение. Морските клетки са големи клетки със заоблена или овална форма (фиг. 11). Някои дрожди могат да образуват елементарен мицел, който се нарича "pseudomitelius". Размерът на клетките варира от 3 цт до 10 цМ дължина и широк от 2 до 8 микрона. Повечето дрожди, умножени по убийството. В същото време на 21

22 Клетъчните повърхности изглеждат малка изпъкналост на бъбреците (понякога и няколко и няколко), постепенно се увеличават по размер и накрая, отделени от клетката му, която я произвежда. Бъбрекът, отделен от майчината клетка, става нова клетка от дрожди. Някои дрожди, умножени с разделение. В съдържанието на фино зърно в живата дрожди (протоплазма), големите вакуоли са добре забележими. Вакуолите са кухини вътре в протоплазма, напълнени с клетъчен сок. Състои се от електролити, разтворени във вода, протеини, въглехидрати и ензими. При млади дрождеви протеоплазматични клетки, хомогенни и при по-късни етапи на развитие в протонната повърхност се появяват вакуоли, пълни с клетъчен сок с метаболитни продукти. По време на изтощението на хранителната среда, много дрожди идва спори. В някои видове спорове за дрожди на заоблена форма и покрити с гладка обвивка. При благоприятни условия споровете покълнат. Дрождите са широко разпространени в природата. Те се намират на грозде, на други плодове и плодове, в мляко, във вода и почва, както и върху човешката кожа. Много дрожди извършват ферментация на алкохол и се използват за производство на алкохол в производител на хляб, винопроизводство, пивоварство. 22 Морфологията на най-простите най-прости са едноклетъчни организми на животинския свят. Сред микроорганизмите те са най-трудните подредени, като примитивни органи са специфични за многоклетъчни животни. Някои от тях имат роби и анален дупки, контрактилни и храносмилателни вакуоли. Най-простите неклетъчни (клетъчни дивизии) и сексуални средства се умножават. Класификацията на най-простите се основава на методи за движение. 1. Sarcodic. Преместете и улавете храна с помощта на псевдоения или фалшиви крака. Типичен представител е амеба. Размерите на AMEB не надвишават МКМ.

23 2. Ножове. Имате тесна плазмена обвивка и се движете с мигачи. Почвените форми на аромати са много малки (2 5 микрона) и водата е голяма (до 20 микрона). Типичен представител е Еджлена. 3. Карикатура. Най-силно организираната най-проста. Клетъчните размери варират от 20 до 80 микрона. Типичен представител е парамециум инфусорски, който се култивира върху фураж. 4. спори. Фиксирани форми. Много патогенни, като патоген на малария палазмий. Най-простите са широко разпространени в природата. Те се намират във водните тела, в Ил и почвата. Стойността на най-простия характер е много разнообразна. Те живеят в стомашно-чревния тракт на различни животни, участват в храносмилането на растителната храна, участват в минерализацията на органични остатъци в почвата и също са важен компонент на биоценозата в лечебните заведения. Хранене от бактерии и суспендирани вещества, те допринасят за осветлението на водата. Най-простите изпълняват функцията на показателите: за развитието на определени форми, може да се прецени качеството на почистването на отпадъчните води. Така преобладаването на AMEB и отсъствието в състава на активните инфузии показва лоша работа на лечебните заведения. Tetrahymena Infusor се използва широко за първична оценка Токсичност. Различни типове най-прости са представени на фиг. 12. Морфологията на водораслите е широка група растителни организми. Общи за всички тях, наличието на хлорофил и причинено от тази фотоавтотрофна мощност за синтезиране на органични вещества, използвайки енергия слънчева светлина и въглероден диоксид. В много водорасли, зеленият цвят на хлорофила е прикрит като други пигменти. Сред тях са много малки едноклетъчни и многоклетъчни форми, дължащи се на микроорганизми, както и 23

24 Многоцветни организми, живеещи в моретата и океаните и понякога достигат гигантски размери. Обектите на изучаване на микробиологията са някои водорасли микроскопични размери. Те имат разнообразие от форма и живеят както на земята, така и във водната среда (фиг. 13). 24.

25 Практическа част Целта на работата е да проучи морфологията на представителите на различни групи еукариот. Процедурата за извършване на работни студенти самостоятелно подготвя оживени наркотици на представители на гъби, дрожди, водорасли и протозои; Микроскопията ги с лещата X40 и скица, показваща увеличаване на микроскопа. Aspergillus niger мухъл гъби форма на клетките под формата на мицел с дялове; На някои GIF файлове има неразклонени конидиони с спорове. Кондииците са едноклетъчни, сферично подути, на повърхността на океана са късообразни клетки (стериги), всеки от които сваля веригата на конидий, оцветен в черно. Използва се за получаване на органични киселини и ензими. Penicillium chrysogenum gifs имат дялове; На някои GIF файлове има разклонени кондиини с спорове. Конидиите се образуват в краищата на водите на разклонени конидиони. Използва се за получаване на антибиотичен пеницилин. 25.

26 дрожди Sacchamomyces cerevisiae единична мая с овални и заоблени клетки; умножете чрез убийство. Използва се в приготвяне на хляб, производство на алкохол. В природата има на повърхността на плодовете и други плодове. Saccharomyces Vini клетъчна форма овална и закръглена; умножете чрез убийство; След като приветства, известно време не е разделено, образувайки малки "клонки". Използвани в винопроизводството. Родотрола глутинис елипсовидна клетъчна форма; единични клетки; умножете чрез убийство. Боядисани в оранжев цвят поради съдържание в каротеноидни клетки. Може да расте в среда с петролни въглеводороди като въглероден източник. Използван като фуражна мая. Candida Tropicalis дрожди с овални и силно удължени клетки, образуващи "псевдометри". Може да расте в минерална среда с въглеводороди като въглероден източник. Използван като фуражна мая. На индустриален мащаб се отглеждат върху отпадъците, произведени от алкохол, хартия. Водорасли хлорела вулгарис микроскопични зелени водорасли, имащи заоблени клетки (5 10 микрона в диаметър); Умножаваме автократи, които са оформени в майчината клетка в количество от 4 до 32 и се освобождават след черупката. Може да се използва за масово култивиране, за да се получи захранващ протеин, както и за регенерация на въздуха в затворени системи (подводници, \\ t космически станции и т.н.). Scedesmus sp. се отнася до група зелени водорасли; има овална форма на клетки; Външните клетки често са със заострени краища; Клетките са свързани заедно четири. Използва се за получаване на хранителния протеин. 26.

Най-простото лекарство се подготвя от активната утайка на аероната. Разгледайте морфологията на най-откритите представители на най-простите и скицирайте ги. Съдържанието на доклада 4. Латинско наименование на микроорганизма. 5. Клетъчна морфология (дават чертеж с индикация за увеличаване на микроскопа и поддържане на съотношението на размера на клетката). 6. Използване на учебни микроорганизми в промишлеността. Контролни въпроси 1. Опишете формата на клетките на представителите на гъбите и тяхната практическа употреба. 2. Опишете формата на дрождеви клетки; Име на представители и ни разкажете за практическата им употреба. 3. Разкажете ни за морфологията на микроводите и тяхната практическа употреба. 4. Назовете представители на най-простата и разкажете за тяхното използване в биотехнологията. Работа 3. Методи за изучаване на морфологията на микроорганизмите Най-често срещаният метод за изследване на морфологията на бактериите е микроскоп на фиксирани лекарства, приготвени от чисти култури на микроорганизми или от тестовата проба. Изследването на микроорганизми в състояние на живот се използва в изследването на по-големи форми и наблюдаване на клетъчна мобилност. Подготовка на фиксирани лекарства на микроорганизми за приготвяне на фиксирани лекарства на микроорганизми първо приготвят намазка, изсушавайки го, фиксирани и след това оцветени. Брокедите се приготвят за перфектно чисти стъпала на стъкло. Намаленото стъкло може да бъде етилов алкохол, смес от равни обеми алкохол и етер и други 27

28 течности. Най-лесният и най-практичен начин за обезмасляване на стъклото ги търка от двете страни от част от домакинския сапун. Сапун се отстранява със стъкло с парче суха вата или салфетка. При производството на намазка от колония от бактерии, отглеждани на агарова среда, те първо нащрекват капка вода или физиологично решение на слаб стъкло. След това калцинирайте бактериологичния контур в горелката на пламъка. След това охлаждайте цикъла на вътрешната стена на епруветката, заснемете част от колонията без агарен контур. Контурът с култура е направен в капка вода или физиологичен разтвор върху стъклото и прави 2 3 кръгови движения. Част от бактериите се суспендират в течността. Излишъкът от бактерии, останал на цикъла, се изгаря в пламък на горелката, отопление на горещ контур. След това охладената линия намазва капка суспензия върху стъкло. Районът на намажете трябва да бъде в диаметър 1.5 2 cm. Размазването трябва да бъде тънко с равномерно разпределение на материала. Ако намазката се приготвя от култура, отглеждана на течна хранителна среда, след това наблюдавайки същите правила за стерилност, те получават капка линия или пипета и я прилагат до средата на стъкленото стъкло. Пипетата с остатък от култура се потапя в съда с дезинфекционно решение. Капка е равномерно разпределена върху чашата от бактериологичен цикъл. Контурът изгаря в горелката на пламъка и се поставя в стъклото. Размазването се суши във въздуха или в струя топъл въздух, държейки го за надлъжни ребра над горелката на пламъка. Границите на намазката са очертани от восъчния молив на задната част на стъклото и отстрани на намазката при едно крайно стъкло постави броя на лекарството. За тези белези е лесно да се съсредоточите върху местоположението на намазката върху стъклото. Изсушен намазка фиксиран. Фиксирането преследва следните цели: 1) убиват микроби, което прави лекарството безопасно кога по-нататъшна работаШпакловка 2) Прикрепете микробите към стъклото, така че да не се измиват при боядисване и измиване с вода; 3) Подобряване на чувствителността на боята. 28.

29 Най-простото, най-подходящо за всички микробиологични обекти и най-често срещаният метод на практика е фиксиране в пламъка на горелката. За това, субектното стъкло се извършва 3 4 пъти през най-горещата горна част на пламъка на горелката, предотвратявайки прекомерното прегряване на лекарството, за да не причиняват денатурация на протеини и разстройства на структурата и морфологията на бактериите. Разграничаване на прости и сложни методи за оцветяване. Лесно използване на цветовете за откриване на микроби в изследвания материал, определете тяхното количество, форма и местоположение. Обикновено оцветяване се прилага за лекарство от всяка една анилинова боя. Най-често за тези цели, фуксин червен цвят, както и алкален разтвор на метиленов син (Enek Lefball) синя боядисване. Техника за оцветяване: добре фиксиран препарат се поставя в намазка на стъклен мост над банята. На повърхността на намазката на пипетата или от капкомера прилагат една от определените бои. Фучсин се държи на размазване от 1 3 минути и синьо 3 мин. Боята с намазка се източва, лекарството се промива с вода, изсушава се във въздуха или предпазливо се забива с филтърна хартия. Към изсушената маза се нанася капка потапяне, лекарството се поставя върху интерфейса на микроскоп и микроскопия с потапящ леща (90) в предаваната светлина. Диференциални методи за боядисване на бактерии. Сложните методи за оцветяване са от голямо значение за определяне и диференциране на различни видове микроби. Те се основават на особеностите на физикохимичната структура на микробната клетка и се използват за подробно изследване на структурата на клетката и откриване на отличителни характеристики по отношение на някои багрила. С тези методи, намажете се боядисват с няколко бои и се лекуват допълнително с гуми или обезцветяване вещества с алкохол, киселина и т.н. Към тези методи включват най-важния метод за оцветяване за диференциране на бактериите в грам. В същото време се разкрива методът 29

30 способността на бактериите да държат боята или разклонението в алкохол, която е свързана с химическата структура на клетъчната стена. Всички бактерии върху структурата на клетъчната стена са разделени на две групи: 1) Грам-положителният грамист и 2) не са боядисани от грам-отрицателен грам. Отношението към грама цвят е толкова важен диференциален знак за бактерии, който непременно се споменава в тяхната характеристика и служи като таксономичен знак. 30 Методът на оцветяване по отношение на грам за фиксирана намазка е полагане на лента от филтърна хартия, преди GeCane на Gentiane. 3 5 капки вода се нанася върху лентата. След 1 2 минути хартията се отстранява от пинсети и разтворът се излива в лекарството. След 30 секунди 1 min, разтворът на лугола се източва. Прилагат се няколко капки 96 перорален алкохол. Цъфтят за 1 минута до изчезването на серпурските пипсове. Препаратът се промива с вода. Фуксинът се излива върху намазването и издържа на 1 2 минути. Боята се източва, лекарството се промива с вода, суши се с филтърна хартия. Микроскопично с потапяща система. Грам-положителните бактерии са боядисани в лилаво-синьо (например, пръчка от мазна киселинна ферментация Clostriidium pasteurum), и грам-отрицателен в розово-червено (чревната пръчка на Escherichia coli). В допълнение към този традиционен метод за оцветяване по отношение на грам, има бърз и прост метод за диференциация на грам без оцветяване. Бактериалните клетки (по-добри от 1 2 дни) се поставят в капка 3% KOH върху плъзгача, разбърква се с кръгови движения и след 5 8 с цикъла рязко. Суспензията на грам-отрицателните бактерии става вискозна и се простира за цикъла, образувайки лигавици. Грам-положителните бактерии са равномерно разпределени в капка алкални (както във вода). Реакцията се счита за отрицателна, ако образуването на лигавици не се наблюдава в продължение на 60 s. Увеличаването на вискозитета е причинено от лизис на клетъчни стени на грам-отрицателни бактерии в разтвор

31 алкални и ДНК освобождаване. Методът на диференциране на бактериите чрез грам без оцветяване трябва да се използва само за предварителна диагностика или преброяване на примерното съотношение на колонии от грам-положителни и грам-отрицателни бактерии. Идентифициране на живите и мъртвите клетки по метода на оцветяване метиленов син Броят на живите и мъртвите клетки може да се определи чрез разтвора чрез разтвор на метиленов син. Методът се основава на различни пропускливост на живи и мъртви клетки на микроорганизми. Клетъчната пропускливост в мъртвите клетки е счупена, така че багрилото течно преминава през цитоплазмената мембрана и се адсорбира чрез протоплазма. Под микроскопа мъртвите клетки изглеждат сини, живи с безцветни или палеголи. Цветът е както следва: спад от 2% от метиленовия разтвор се нанася върху слайда, покрита с покритие, излишната боя се забавя от парче филтърна хартия. Лекарството се разглежда под микроскоп, в 10 области се разглеждат броят на живите и мъртвите клетки; Броят на мъртвите клетки е изразен в%. Пример: средният брой жилищни клетки в едно поле на видимост 10, средният брой на мъртвите клетки в едно зрително поле 5, \\ t общ брой Клетките в едно зрително поле на клетките 100% 5 клетки х Х 33.3% 15 по този начин броят на мъртвите клетки в изследваната суспензия на микроорганизмите е 33.3%. Определяне на размери на клетките за определяне на размера на клетките на микроорганизмите е необходимо да има специален окуляр с скала (микрометър на окуляра) и микрометен обект. Оклален микрометър, при 31

32 Най-простият случай е стъклен диск с линейна скала, приложена върху нея, която се инвестира в окуляра (фиг. 14А). Обектът на микрометъра е плъзгач, в центъра на който е гравиран с линейна скала с дължина 1 mm, с разделение от 10 микрона. Преди измерване е необходимо да се определи цената на делене на микрометъра на окуляра за всяко увеличение на микроскопа. За това обектът на микрометра е поставен върху темата на микроскопа и се счита за лекарство; В същото време една от видимите разделения на микрометровия обект се комбинира с нулева маркировка на скалата на очната микрометър и съществува съвпадение на разделения от една и съща скала (фиг. 15). Изчислете колко очни и обективни разделяния падат върху този сегмент и изчислете цената на делене на микрометъра на окуляра. Ако след това поставите лекарствените микроорганизми на масата на темата вместо на обекта на микрометъра и го смятате за 32

33 С едно и също увеличение можете да измерите величината на микробната клетка, като използвате очната скала на микрометъра като владетел. За точни измервания се използва специален микрометър на окуляра с плъзгаща се нулева маркировка, свързана с измервателния барабан (Фиг. 14В). Тя ви позволява да определите размера на микроорганизмите с точност на десети от микрона. Нулевата марка е двойната вертикална линия, средата на която съответства на пресечната точка на две тънки линии под формата на кръст. Преди измервания е необходимо да се знае цената за разделяне на мащаба на измервателния барабан. Референцията е микрометровият обект. Въртящият се измервателния барабан, нулевата маркировка, ще управлява няколко дивизии на обекта на микрометъра. Двойната вертикална линия показва броя на пълните революции на измервателния барабан. Провеждане на измервания на микроорганизми, преместете нулевата маркировка по обекта и помислете за свидетелството на измервателния барабан. Практическа част Целта на работата за овладяване на основните методи за изучаване на морфологията на микроорганизмите. 33.

34 Процедура за извършване на работа 1. Приготвяйте фиксирани препарати от млечнокисели бактерии от биоцифа и ацидофилин. 2. Извършване на картина от грамът на клетки Bacillus subtilis (грам +) и Escherichia coli (грам). 3. Определете дрождевите клетки на сакхаомиите. 4. Определете броя на живите и мъртвите Saccharomyces cerevisiae в дрождеви суспензия. 34 Съдържанието на доклада 1. Морфологията на клетките на млечнокиселите бактерии (чертежи на фиксирани лекарства от млечна киселина бактерии с индикация за увеличаване на микроскопа). 2. Фигури на фиксирани препарати от грам-отрицателни и грам-положителни бактерии. 3. Определяне на цената за разделяне на очната микрометър за измерване на барабана. 4. Saccharomyces cerevisiae размер на дрождите клетки. 5. броя на живите и мъртвите клетки в дрождената суспензия. Контролни въпроси 1. Как да се подготви фиксирана бактериална подготовка? 2. Каква е причината за разграничението на бактериите в цвета на грам? 3. Какъв е методът за оцветяване върху грам? 4. Как да се определи размерът на микроорганизмите? 5. Как да се определи броят на живите и мъртвите клетки на микроорганизмите от цвета на стилното синьо синьо? Тема 2. Отглеждане на микроорганизми: принципите на приготвяне на хранителни среди; Методи за стерилизация; Методи на култури и пел на микроорганизми. Класификация и подготовка на хранителни среди култивират микроорганизми Това означава изкуствено създаване на условия за техния растеж. За отглеждане

35 микроорганизми в лабораторията или в индустрията се използват хранителни среди, съдържащи всички вещества, необходими за жизнената активност на микроорганизмите. От околната среда хранителните вещества идват в клетката на микроорганизма и обменят продукти от клетката в сряда. За жизнената активност на микроорганизмите, вода, въглерод, кислород, азот, сяра, фосфор, калий, калций, магнезий, желязо и микроелементи са необходими. Всички тези вещества трябва да се съдържат в хранителната среда. Дори и без един от тях, той няма да бъде изобщо или ще бъде незначителен. Въглерод, водород, азот, фосфор и сяра се наричат \u200b\u200bбиогенни елементи, тъй като те представляват около 90 95% от сухата маса на клетките. Калий, магнезий, калций и натрий се наричат \u200b\u200bмакроелементи или пепелни елементи. Те представляват до 5 10% от сухата маса на клетките. Желязо, манган, молибден, кобалт, мед, ванадий, цинк, никел и някои други тежки метални катиони се наричат \u200b\u200bмикроелементи и съставляват процента на сухата маса на клетките. Най-голямата стойност За всеки жив организъм има въглерод. Тя е част от всички органични молекули в клетката и нейните акции представляват около 50% от суха биомаса. Във връзка с въглерода всички организми са разделени на автотрофно и хетеротрофично. AutoTrofa като източник на въглерод се използва въглероден диоксид. Хетеротрофите се нуждаят от готови органични съединения. Източникът на въглерода за повечето от микроорганизмите може да служи като различни органични вещества: протеини и техните продукти, въглехидрати, мазнини, въглеводороди. Азотът в неговата стойност е на второ място след въглерод. Азотът е част от аминокиселини и други клетъчни компоненти, които осигуряват жизнеспособността на организмите. Азотът е 14% от сухото вещество на клетките. Изходният азот сервира азот-съдържащи органични или минерални съединения. Решенията на амоняка и нитратите най-често са източници на минерален азот. Протеини, аминокиселини, нуклеотиди се използват като органични източници на азот. Някои прокариоти могат да използват атмосферен азот. 35.

36 фосфор и сяра са част от важни клетъчни биополимери. Фосфорът (3% от сухото вещество на клетката) е част от нуклеотид и АТР и сярата (по-малко от 1%) в някои аминокиселини. Източникът на фосфора обикновено се използва фосфати и сярна сяра. Фосфор и сяра могат също да бъдат използвани в органични съединения. За микроорганизми макроленията се изискват в малки количества: йони алкални метали (Na +, K +) и алкални земни метали (mg 2+, СА 2+), които играят важна роля в живота на микроорганизмите. Макроленията в микробни клетки са необходими за регулиране на пропускливостта, осмотичното налягане, стойностите на рН. В допълнение към тези метали са необходими редица елементи в количествата следи за увеличаване на микробите (микроелементи). Минералният състав на хранителната среда образува разпределението на електрически заряди върху клетъчната повърхност. Промяната на потенциала за електрически клетки може да промени техните физиологични дейности. Една от основните функции на участието на елементите за проследяване в ензимната катализа. В момента четвъртата част от всички ензими в клетката е свързана с метали. В допълнение към основните компоненти на хранителната среда за нормалното развитие на някои микроби, са необходими дори допълнителни вещества, които се наричат \u200b\u200b"растежни фактори". Растежните фактори са комбинираното име на различни химическа природа връзки. Основно тези органични вещества, добавянето на което при много малки количества стимулира растежа и репродукцията на микроорганизмите. Те имат за микроби същото значение, че витамините за по-високи организми. Ростовските фактори са предимно витамини от група Б, които играят ролята на регулатори и метаболитни стимуланти в микроби или аминокиселини. Растежните фактори използват автолизат на дрожди, екстракт от дрожди, местни протеини (кръв, серум) и т.н. Нуждите от микроорганизми на микроорганизми са много разнообразни. Поради тази причина няма универсален 36

37 медии, еднакво подходящи за култивиране на всеки микроорганизъм. В зависимост от целта на отглеждането и нуждите на този микроорганизъм, хранителните среди се различават в три знака: според състава, физическото състояние и предназначението. В състава, хранителните среди са разделени на две групи: 1) естествено (естествено); 2) изкуствени (синтетични). Естествено наречена среда с неопределен химичен състав, тъй като те включват продукти от растителен или животински произход, отпадъци от различни индустрии, съдържащи органични съединения. Естествените хранителни средства осигуряват интензивен растеж на голямо разнообразие от микроорганизми. Те съдържат богат набор от органични и неорганични съединения, включително всички необходими елементи и допълнителни вещества. Например, в лабораторията най-често се използват следните хранителни вещества. 1. Месо-пептън бульон (MPB) Извличането на месо съдържа продуктите на непълното разпадане на пептън протеин, в който има органичен въглерод, органичен азот, фосфор, съдържащ серфур-съдържащ органична материя. MPB също съдържа минерални вещества, необходими микроорганизми. MPB се използва в отглеждането на много видове бактерии. 2. Екстрактът от бирен клин, изработен от спозотели на ечемик, съдържа като източник на захарен въглерод (главно малтоза), азотни вещества, пепелни елементи, различни растежни фактори и витамини от група V. Beer Sushlo е добра среда за развитието на мнозина Микроорганизми, по-специално дрожди, гъби. Добрата естествена среда са мляко, картофи, шеги на плодове и зеленчуци. Промишлеността обикновено се използва полусинтетична или естествена среда. Много често микробиологичните отпадъци се използват като източник на въглерод хранително-вкусовата промишленост: Melassia (захарни отпадъци), 37

Министерство на земеделието на Руската федерация Федерална агенция за риболов Камчатка Държавен Технически университет Катедра по биология и химия Химия и микробиология на приготвянето на вода

Фамилно име на шифър работно място Област Sifres Общо: Задача на практическата турне от регионалната сцена на XXXII All-Russian. Биохимия. Идентификация на екстракти Оборудване: Тръби за изпитване (3 тестови епруветки с екстракти

Фамилия Cipher Име Област / Градско работно място Общо: Куестове на практическата обиколка на регионалния етап на XXVIII All-Russian Olympiad на учениците по биология. 2011-12 UCH. година. Биохимия от 11 клас. Оборудване,

Микробиология Обяснителна бележка към работната програма на курса "Микробиология", степен 9, основана на автора на избираемия курс "Микробиология" Аврчинкова О.е. Биология. Избираеми дисциплини. Медицински

Задачи Микробиология (макс. 20 точки) Целта на работата: да се подготвят и анализират препаратите на две известни млечни продукти. Оборудване: микроскопи, горелки или алкохоли, слайдове,

Царството на прокариотите. Това са най-простите, повечето малки и широко разпространени организми, които съществуват на земята повече от 2 милиарда години, но заедно

Система Биологичен свят Всички организми на земята, съществуващи на Земята, са разделени на четири царства: пушки, гъби, растения, животни. Дробики принадлежат към прокариотам (доилни организми), гъби, растения,

Проект Тема на темата за микроорганизмите, живеещи в стоящ резервоар на Бутовския гора на град Москва Автор (и): Касаева Диана, Касаева Кристина, Tkachenko Alisa Училище: GBou Sosh 1945 Клас: 10 Глава: 5 Глава:

Лабораторна работа "Изграждане на тела на шапките" цел: да проучи структурата на тела на коси оборудване за гъби: шапки гъби (бяла гъба, весел, шампаньон, клата, маслото, opension и др.)

Федерална държавна образователна институция по висше професионално образование "Омск държавен аграрен университет, наречен на Институт за ветеринарна медицина и биотехнология на ветеринарната медицина и биотехнологията.

Одобрявам заместник-главния държавен санитарен доктор на Руската федерация - главен лекар на Федералния център за Госен епидемадец на Министерството на здравеопазването на Русия Е.н. Беляев на 20 февруари 2004 г. N 24FTS / 900 дата

Изследователска работа Дрожди: вълнуващ живот на малки гъби Автор на труда: Студент 5 "B" Клас GBOU гимназия 1748 "Вертикална" Кута Хора Георги Валериевич Ръководител: Носова Елена Владимировна, \\ t

Метод за откриване на гъби от мая и мухъл в хранителни продукти Методични препоръки за откриване на гъбички и плесен в хранителни продукти.: Методически препоръки. - М.: Федерален център

Тема 4. Бактерии. Гъби. Лишаи. Част А. 1. Наличието на цианобактерии лишери осигурява 1) абсорбция на атмосферна и почвена влага 2) използването на светлина за образуване на хранителни вещества

Биология Науката за биологията на дивата природа изучава: каква проучвана биология z структура и препитание на живи организми; z законите на индивида и историческо развитие организми. 3 органична система

1. Отрифициране на бактерии се отнасят до 1) хемотрофам 2) фотоотробен 3) сапротрофам 4) хетеротрофам тема "фотосинтеза" 2. Енергията на слънчевата светлина се превръща в химическа енергия в клетки 1) Фототрофове

Микробиология и генетична задача 1. Подгответе и анализирайте наркотиците от две известни млечни продукти. (Mach.10 точки) Оборудване: микроскопи, горелки или алкохол, слайд стъкло,

Квалификационни тестове в специалността "Бактериология" Банка задачи за тестване За да се подготвите за сертифициране, изберете един или повече верни отговори 1. В съответствие със Задължителния ред на Gksen RF N

Задачи 3. Униклетъчни и многоклетъчни организми. Кралство гъби 1. Какво се съдържа в черните топки в краищата на дългите клони в гъбата на Мукор? 1) микроскопични плодове 2) хранителни вещества 3)

Федерална държавна бюджетна образователна институция на висшето образование "Оренбургски държавен аграрен университет" методични препоръки за независима работа Учение

Морфология на микроорганизмите Вариант 1 1. Грасилиците са: А. Тона-публикуваните бактерии B. бактерии B. бактерии с дефектна клетъчна стена. G. Бактерии с деликатна клетъчна стена. 2. К.

Задача за учениците: Трябва да изберете правилните отговори (може би от един до няколко). Морфология на микроорганизмите Вариант 1 1. Грасилични басейни - това е: А. Тона-публикувано бактерии B. Tolstovanny

Водораслите водорасли по-ниски растения водорасли обширни и нехомогенна група от по-ниски растения. Водораслите са най-многобройни и една от най-важните за планетата фотосинтезизиращи организми. Те се срещат

Общинска бюджетна обща образователна институция Алар средно образование "Прегледано" глава на протокол от 0 гр. "Договорен" заместник-директор за UVS MBou 0 g "Одобряване"

1 основни техники за работа с микроорганизми задача 1. Въведение в микробиологията. Оборудване за безопасност при работа с микроорганизми, целта на проблема. Тази задача ще ви запознае с правилата за безопасна работа

Задачи 2. Клетъчна структура на организмите 1. Какъв химичен елемент е част от жизненоважни органични клетъчни съединения? 1) флуор 2) въглерод 3) мед 4) калий 2. като басейно вещество

Мулкова гъби влияние на физическите фактори върху растежа и развитието на гъби. Logunov stepan 7g Ръководител на проекта Булячев MB Уместността на изследването на спорите на гъбите се отличава с висока устойчивост на неблагоприятни

Тест 5 Вариант 1. Темата "гъби" задачи с избор от един верен отговор. 1. Основната разлика в гъбите от растенията е, че те са: имат клетъчна структура, вода и минерални соли се абсорбират от почвата,

1. Обяснителна бележка Програмата е предназначена за FGBOU VPO BSU, приложима за завършване на училище в специалността 03.02.03 - микробиология на програмата за обучение на висококвалифицирани специалисти в посоката

Федерална агенция за образование

KARACHAY-crycassian Държавна технологична академия

Министерството на производствените технологии за животновъдството

Микробиология

Методически инструкции

към лабораторни и практически учебни класове

аграрен институт

Cherkessk - 2010.

Съставен на базата на приблизително и работна програма На курса "микробиология" в съответствие с държавата образователен стандарт Висше професионално образование в специалността 110305 "Технология на производството и преработката на селскостопански продукти" и 110201 "Агрономия" (2000).

Обсъдени на срещата на столовете на катедрата (протокол от 2.07.2009 г.)

Одобрена от методологическата комисия на Аграрния институт (Протокол № 6 от 01.01.2001 г.). Публикувано с решение на образователния и методологическия съвет на Държавната технологична академия Karachay-Chkkess (протокол от 01.01.2001 г.)

Компилатори:кандидат на биологични науки, доцент , кандидат на селскостопански науки, доцент , помощник

Рецензенти: – кандидат на биологични науки

доцент на катедрата "Агрономия"

доцент на катедрата "Tppzh"

Редактор: K. S.-H. Науки, доцент
Съдържание

Въведение ................................................. ................................................ .. 6.

1. Микроскопия ................................................. ........................... .. 7.

1.1. Понижаваща микроскопия .............................................. ...... .7 .7.

1.1.1. Микроскопско устройство .................................................. ...... 7.

2. Работете с микроорганизми ............................................... ........... Осем

2.1. Методи за подготовка на наркотици ..................................................... , 8.

2.1.1. Сукника приема култура за наркотици ................................. 8

2.1.2. Изследването на живите клетки на микроорганизмите по метода

пресовани капки .................................................. ............................. .. 8.

2.1.3. Фиксирани препарати на микроорганизми ............................. 9

Осветителната система се намира под темата за предмета. Огледалото отразява светлината, която пада върху него в кондензатора. Едната страна на огледалото е плоска, а другата е вдлъбната. Когато работите с кондензатора, е необходимо да използвате плоско огледало. При работа без кондензор се използва вдлъбната огледала с малки лещи за мащабиране. Кондензаторът се състои от 2-3 кратки фокусиращи лещи, събира лъчи, идващи от огледалото и ги насочва към обекта. Кондензаторът се изисква при работа с потапящи системи. В кондензатора има диафрагма на ириса (венчелистче), състояща се от стоманени херпални плочи.

Боядисаните препарати се считат за почти напълно отворен отвор, неоцветени - с намалена бленда на диафрагмата.

Лещи - Мултиплейс система, за качеството, от която зависи образът на обекта. Външният обектив се нарича фронт, той осигурява увеличение. Останалите лещи изпълняват функциите на корекция на оптични недостатъци.

Обективът са сухи и потопени (потапяне). Когато работите със сухи лещи, въздухът се намира между предната леща на обектива и обекта на изследването. При работа с потапящ леща V \u003d 90-те години между покривното стъкло и лещите на обектива са кедрово масло, чиято рефракционен индекс е близък до индекса на пречупване 1,515 и 1.52, съответно. Обективите имат увеличение на 8x, 40x и 90x.

Окуляр Той служи като директно продължаване на "лещите" (обектива) на човешкото око.

Окучният окуляр се състои от две лещи - горната част и по-ниска колектив, сключени в металната рамка. Цел на окуляра - увеличаване на изображението, което дава лещата. Увеличаването на окуляра е гравирано на ръба му. Работейки увеличение на окулярите, вариращи от 4 до 15 пъти.

OCAW са там различни видовеИ изборът зависи от обектива. С дълготрайна работа с микроскоп, използвайте бинокуларна дюза, тъй като подобрява видимостта на обекта, намалява яркостта на изображението и по този начин запазва визията.

Работа с микроорганизми

2.1. Методи за приготвяне на лекарства

2.1.1. Техника за производство на култура за препарати

Бактериологичната игла от тръбата се изгаря в пламъка, което е малко количество микробна маса. Ако културата е течна, тогава е по-добре да използвате цикъла за това, в други случаи игла.

2.1.2. Изследване на живите клетки на микроорганизми по метода на натрошен спад

Разгледайте живите клетки на микроорганизми по метода на натрошени капки, предварително оцветяване на обекта с водопроводни багрила - витално оцветяване(Багрила: метиленов син, неутрален червен в концентрации от 0.001 до 0,0001%).

Микроскопични лекарства, леко затъмняване на зрението; Кондензаторът е леко понижен, потокът светлина се регулира от вдлъбната огледала. Първоначално те използват малко увеличение - лещата 8Х, след като се открият референтния ръб, е монтиран лещи 40x или потапяне (90x).

В случай на използване на натрошен метод на капка върху чистата стъкло, се прилага капка вода от чешмата. Това прави културата и се смесва с вода. Излишната вода се отстранява чрез филтърна хартия. Когато използвате потапящ леща върху слайд стъклото на кедрово масло и микроскопия.

2.1.3. Фиксирани препарати на микроорганизми

Фиксираните препарати включват такова лечение на живи клетки, което дава възможност за бързо прекъсване на потока от жизнени процеси в обекта, запазвайки фината си структура. В резултат на фиксиране, клетките са здраво прикрепени към стъклото и по-добър резултат. Фиксирането е необходимо в случай на работа с патогенни микроорганизми (за целите на сигурността).

Улавяне на намазка. Нанася се капка вода от чешма към чисто стъкло. За обезмасляване очилата използват смес от етилов алкохол и серен етер в съотношение 1: 1. Калцинираната бактериологична игла от епруветката с култура отнема малко количество микробна маса и прави капка вода. Капка тръгва по линия на стъклото на квадрата от около 4 cm2.

Ако суспензията е дебела, тя първо се отглежда с вода. За това, калцинният контур взема малко окачване и се прехвърля към капка вода към друг слайд. Суспензията с нормална дебелина се намазва с тънък слой върху стъклото, след това намазването се суши във въздуха при стайна температура или със слабо отопление, държейки лекарството високо над горелката на пламъка. Не се препоръчва силно нагряване на лекарството по време на сушене, за да се избегне коагулация на протеини, изкривяване на структурата и формата на клетките. Изсушен препарат фиксиран.

Фиксиране на намазката. То се извършва над горелката за пламъкили с помощта на химикалсъюз. В първия случай, лекарството три или четири пъти бавно се провежда от долната страна над пламъка на горелката, във втория случай се използват хромови съединения: формалин, осмиева киселина, ацетон. Един от общите техники за фиксиране е обработката на лекарството с 96% алкохол или смес от равни обеми етилов алкохол и етер (Никифоров течност). За това лекарствата са потопени при 10-30 минути в фиксираща течност.

Оцветяване на лекарството. Няколко капки боя се прилагат върху намазката. В зависимост от вида на боя и целта на изследването, продължителността на оцветяването варира от 1 до 5 минути, в някои случаи, заемащи до 30 минути. В края на оцветяването лекарството се промива с вода, водата се отстранява чрез филтърна хартия, суши се във въздуха и микроскопията.

Има прости и диференцирани методи за оцветяване.

За обикновен Оцветяването се използва от всяко еднократно багрило (метиленово синьо, фуксин, целен лилаво), цялата клетка се оценява.

За диференцирани Цветовите отделни клетъчни структури са боядисани с различни багрила (живопис от грам, рисуване).

Изследване на морфологични микроорганизми

3.1. Форма на клетки

3.1.1. Бактерии

Във формуляра всички бактерии се разделят на сферични (кокосови), оформени и сложни.

Сферични бактерии - Cockki.

1. Микрококи -единични сферични клетки ( Микрокок. agilis.).

2. Diplococci -готварски готвачи, свързани с две. ( Azotobacter. хрокок).

3. Tetracokki.- символ коки, свързани четири.

4.Streptococci.- сферични бактерии, свързани в вериги (предимно палогенни, както и млечнокисели бактерии Lactococcus. lactis.).

5. Sarcines. - символни бактерии, които се групират в 8 клетки, възникват в резултат на клетъчно разделение в три взаимно перпендикулярни равниния. Някои видове саркин образуват големи частици, в които 4 саркани са разположени от всяка страна. Типичен представител Sarcina. флава. (Жълт сарцин) е най-често срещаният представител на въздушната микрофлора.

Всички сферични форми на бактерии, с изключение на StreptoCtococcus. lactis., преглеждане на фиксирани и боядисани фугични препарати.

Бактерии с форма на ролка. Те включват форми, които не са формират спорове (раждане Pseudomonas., Achromobacter., Lactobacillus. et al.) и формиране на спорове (раждане Bacillus., Clostridium. и т.н.).

Нещастен пръчик Pseudomonas. stutzeri. – цитоплазмата е блокирана равномерно.

Строителни пръчки Bacillus mycoides.и Bacillus mesenttericus.Под микроскопа изглежда неравномерно боядисан. Споровете не се оцветяват като по-плътни структури. Клетки Bacillus. mycoides. Намира се с вериги, тя е стрептобачилия.

Бръснените бактерии се разглеждат на фиксирани и боядисани препарати.

Кръстосна форма.

1. Вибрации – леко извити клетки.

2. Спилас може да има една къдрица под формата на руска буква в, две къдрици под формата на латинска буква S или няколко - под формата на спирала.

3. Спирошет - дълги и тънки клетки с много къдрици; Дължината на клетките надвишава тяхната дебелина от 5-200 пъти.

Vibrihions и Spirilillas са удобно разглеждани на фиксирана и боядисана подготовка, изработена от тор, жив, предварително инкубиран в рамките на няколко дни в термостата. От различни микроорганизми на този препарат често срещат свирения.

С спирохтами можете да се запознаете с фиксирано боядисано лекарство на зъбната плака, препаратите на пластира от най-галения зъб са особено успешни. Стоматологичните спирохс са много тънки, с форма на коса, къси (само 2-3 къдрия).

3.1.2. Aktinomycets.

Actinomycetes са лъчеви гъби. Mycelium Actinomycetes върху хранителни среди, диференцирани: една част е потопена в субстрата (субстрат мицел), а другият е над субстрата (въздушен мицел).

Много представители на актиномицетите произвеждат пигменти, така че въздухът ми и особено колониите са боядисани в синьо, синьо, лилаво, розово, кафяво, кафяво или черно цветове. Actinomycetes са боядисани с хранителна среда в подходящите цветове.

Плъзгачът на колонията Actinomycet се нанася върху слайда със средата. Второто стъкло плътно притисна това парче към стъклото, смачкано и намазано върху стъклото. Лекарството се изсушава, фиксиран, цвят, разглеждан под микроскоп, където мила-едноклетъчните нишки са частично видими.

3.1.3. Мая

Дрожди - едноклетъчни микроскопични гъби са разнообразни във форма: елипса, круша, заоблена, цилиндрична. Ние се размножаваме във вегетативни и сексуално.

За лабораторни класове използват хлебни дрожди. Малка част от маяя маса няколко часа преди класовете се поставят в топла кремообразна вода и се поставят на топло място. Средната течност се образува. Капка от тази течност се нанася върху слайд стъклото, покрито с покритие, нанесете капка кедрово масло и погледнете през лекарството с потапяща система. Свещ и разделящи се клетки са видими.

3.2. Методи за химически изследвания

3.2.1. Оцветяване на микроорганизми от грам

Този метод за диференциране на микробните клетки се основава на разликата в химичен състав Клетъчни черупки. В клетките на някои видове микроорганизми, неразтворим в алкохол е съединение от йод с основната боя, и в други видове, това съединение се появява временно и след обработката с алкохол се разтваря. Микроорганизми на първата група се нарича грам-положителен второ - грам-отрицателен.

Техника оцветяване в грам. Към орантираната чаша от микроорганизми се прилагат три тънки размазания на различни култури на микроорганизми (две от тях са контрол, с добре познато отношение към грама цвят). Намазванията се сушат във въздуха, фиксират над пламъка на горелката и се оцветяват в продължение на 1 минута с фенолен разтвор на генитон (или кристален лилав), задържащ стъкло в леко наклонено положение. След това багрилото се източва и, без да се промива лекарството с вода, се прилага към нея за 1 min с разтвор на лугола (до намазка на намазката). Стъклото се съхранява в наклонена позиция. Лекарството без промиване с вода се лекува, непрекъснато се люлее, 96% алкохол за 15-20 s. Важно е да се прилепват времето за обезцветяване, тъй като грам-положителните клетки се обезцветяват, когато определеният период е надвишен.

Измиване с вода, лекарството е оцветено с фуксин pffff за 1 min. Грам-положителните микроорганизми придобиват тъмно лилав цвят, а грам-отрицателният цвят е боядисан в цвета на допълнителното оцветяване (фуксин).

Резултатите от живопис в грам зависи от възрастта на културата: в старите култури, мъртвите клетки винаги са боядисани, мрачни. Ето защо е по-добре да използвате млади едногледални култури.

Добри предмети за оцветяване клетки на микроорганизми от грам са дрожди, Bacillus mesenttericus. или Bacillus subtilis. (грам-положителна) и чревната пръчка на Escherichia coli (грам-отрицателна).

Бои и реагенти за оцветяване в грам.

1. Фенолен разтвор на тинтядски виолетов:грейска виолетова - 1 g, алкохол 96% - 10 ml, фенол кристален - 2 g, дестилирана вода - 100 ml.

В някои случаи се прилагат хекиана Алкохолен разтворлилаво:genzian Purple (или кристален виолетов) - 1 g, алкохол 96% (изправен) - 100 ml, глицерин - 5 ml. Сместа се поставя в термостата в продължение на 24 часа, след това се филтрува.

2. Решение на Лугола(причиняване на калий - 2 g, кристален йод - 1 g, дестилирана вода - 300 ml). Първоначално се приготвя концентриран разтвор на калиев йод в 5 ml вода, йодът се разтваря в него, след това водата се прибавя към 300 ml.

3. Алкохол96%.

4. Фучене pfefefe.(воден разтвор на карболова фуксина, цидиране): 1 ml carbolic fuchsina, и 9 ml дестилирана вода. Получава се както следва: 1 g фучене, 5 g фенол кристал, 96% от алкохола - 10 ml, няколко капки глицерол, 100 ml дестилирана вода, фуксин се разтваря в етанол, добавя се, разтворен фенол във вода . Разтворът се разбърква и остава в продължение на няколко дни. Преди употреба се филтрира.

3.2.2. Цветен спор за бактерии

Спорите на бактериите в сравнение с вегетативните клетки са силно устойчиви на неблагоприятни условия на околната среда. Те са заоблени, овални или елипитни образувания. Ако диаметърът на спора не надвишава диаметъра на клетката, в която се образува спорът, клетката се нарича bacillina, Ако надвишава, в зависимост от подреждането на спора в центъра или в края на клетката, тази клетка се нарича съответно clostridial. или plexdial. . В клетката Bacillina спорът може да бъде поставен в центъра на клетката - централнапозиция в края - терминали по-близо до един от краищата - santerminal.позиция.

Когато наблюдават живите бактерии, образуващи спорове, техните спорове могат да бъдат освободени от по-силно пречупване на светлинни лъчи. Спори, устойчиви на киселини, толкова едва оцветени с багрила. Това е голямата плътност на обвивката, ниската концентрация в нея на свободна вода и високи липиди в спорове. В боядисани прости начини или в грам, споровете остават безцветни (Отрицателен цвят).

Всички методи за боядисване на рисуване се основават на единна принципа: Първо, споровете се третират с различни вещества: хром, солна, сяра, оцетни киселини, амоняк, каустик или водороден пероксид, след това оцветяват клетката със спор при нагряване и накрая обезцветяват цитоплазма и допълнително го оцветяват с контрастна боя .

Метод на CILY-Nielsen в модификация на Muller.Преди да се определи намазването на бактериите върху подготовката на пламъка, се подготвят по обичайния начин. След това разтвор на 5% хроминова киселина се прилага към фиксиран в пламъка и охладеното лекарство. След 5-10 минути се измива с вода. Лекарството е покрито с лента от филтърна хартия и е изобилно омокряне на хартията на карболовия фуца. Загрейте лекарството над пламъка преди появата на пари (не до кипене), след това го извадете настрани и добавете нова част от багрилото. Тази процедура се извършва в рамките на 7 минути. Важно е боята да се изпари, но хартията не се храни. След охлаждане се отстранява, лекарството се промива с вода и се забива добре с филтърна хартия. В резултат на това лечение, клетките с спорове са равномерно изгорени.

След това оцветяване на цитоплазмата на клетките (но не и спорове), третиране на 1% разтвор на солна или сярна киселина за 15-30 s. При подготовката на спора за наркотици Bacillus. mycoides. или Bacillus. mesentericus. Препоръчва се да се обезцветява цитоплазмата 16-18 ° С (измерена на глас от 21 до 37-40). При превишаване на този път споровете могат да бъдат обезкуражени. След това лекарството се промива с вода и се оцветява с метиленов син 2 минути.

Оцветяването се оказва контраст и ярки червени спорове ясно се открояват на синята фона на цитоплазмата.

Peshkova метод. Лекарството е фиксирано в пламъка, който се излива метиленов синьо леферлера, донесете го на кипене и варете 15-20 s, държейки чаша над пламъка. Размазването се промива с вода и се оцветява за 30 с 0.5% воден разтвор на неутрален червен. Отново се измиват, изсушават и допълнително изследват лекарството с потапяне на маслото на лещата. Споровете са боядисани в синьо или синьо, цитоплазмата - в розово.

За проучването на спора удобните обекти могат да служат Bacillus. mesentericus. или Bacillus. mycoides. На възраст от 4 дни.

Реагенти за оцветяване на бактерии.1. Carbolic Fuksin.Циница(Виж 3.2.1).

2. Метиленов синьо леферлера(Виж 3. 2. .1).

3. Наситен воден разтвор на метиленово синьо.2 g боя и 100 ml дестилирана вода.

4. Хромова киселина,5% разтвор.

5. Salo.(или сярна киселина,1% разтвор.

4. Отглеждане на микроорганизми

4.1. Хранителни медии

4.1.1. Готвене на хранителни вещества

Месо-пептън бульон (MPB).За готвене на месо-пептън медийно използване месен бульонкоето се получава, както следва: 500 g ситно нарязано прясно месо се излива в емайлирана тенджера от 1 1 чешмяна вода, загрява се до 50 ° С и се оставя за 12 часа при стайна температура или 1 час при 50-55 ° С. Месото се притиска, екстрактът се напълва с марля със слой от памучна вата, валя 30 минути, за да коагулира колоидалните протеини и се филтрува два пъти (първи път след марля с памук, втори - през хартиен филтър). Филтратът се покрива с вода до 1 1, излива се в колбите, затворени с памучни щепсели и стерилизира при 120 ° С 20 минути (щепселите на колбата са затворени върху горната част на капачките от хартия).

Месовият бульон може да се използва по всяко време за приготвяне на носител. Ако те се приготвят веднага, не се изисква предварителна стерилизация на месния бульон.

За приготвянето на MPB до 1 литър месен бульон добавете 5-10 g пептън(Първият продукт на протеинова хидролиза) за увеличаване на калоричното съдържание на средата и 5 g катастрофа солда създаде осмотична активност. Средата се загрява до разтваряне на Пептън, като непрекъснато разбърква.

Задайте неутрална или слабо алкална среда, залепена 20% разтвор на Na2C03 към образуването на мокра червена лактова хартия. За да проверите рН на околната среда, е удобно да използвате индикатора бромимолблау:1-2 капки, смесени са в порцеланова чаша с бульон. В неутралната среда Blamat Blama е зелен, в кисел - жълт, в алкално-синьо.

След установяване на рН, средата отново се кипи 5-10 минути, а протеините, които се струват, когато реакцията на средата се смесват, се филтрува през хартиен филтър, без да се осветява бульон или я осветява с протеин. За това пресните яйчни белтъци се бият с двойно разстояние през количеството вода и се смесват с охладени до 50 ° с бульон. Сместа се кипи, разбърква се, върху слаба топлина от 10 минути, след това се филтрува. Прозрачното месо-пептън бульон се излива в тръбите, покриват с памучни тапи и стерилизира при 120 ° С 20 min.

Месо-пептън агар (MPA).15-20 g агар се добавят към 1 литър МПБ. Средата се загрява до разтваряне на агара (температурата на топенето - 100 ° С, втвърдяване - 40 ° С), настройте слабо алкалната реакция на средата с 20% разтвор на Na2C03 и се разлива през фунията в епруветките за изпитване (приблизително 10 ml агар от чаши на Петри и 5 ml, за да се получат скосени агар - JAMPS).

При разпръскване на агарови ръбове тръбите трябва да останат сухи, в противен случай щепселите се придържат към стъклото. Епруветките със среда се стерилизират в автоклав при 120 ° С 20 min.

4.2. Методи за стерилизация

Стерилизация - Това е пълното унищожаване на микроорганизми в хранителни среди, ястия и др.

Има няколко метода за стерилизация. По-често се прилага стерилизация с отопление.

4.2.1. Запалване или калциране

Възможно е да се учи директно преди да се използват платинови примки, игли, шпатули, малки метални предмети (ножици, лаклети, пинсети), както и стъклени пръчки, тема, стъкла и др.

4.2.2. Стерилизация суха топлина

Използва се за преработка на ястия и сухи материали, като нишесте, тебешир. В този случай, стерилизаторът се поддържа при 170 ° С в продължение на 2 часа (от момента, създаването на необходимата температура) в електрически сушилни шкафове. Повишаването на температурата над 170 ° C не се препоръчва: памучни тапи и хартия започват да се срутват.

Преди стерилизацията, стъклените ястия са затворени с памучни тапи и опаковане с хартия. Чаши, тръби, пипети, памучна вата, увити в хартия или поставени в специални случаи и моливи, в които стерилни ястия могат да се съхраняват след стерилизация.

В края на стерилизацията, шкафът се открива само след като температурата намалява до дъното, в противен случай стъклото може да се пръсне.

4.2.3. Стерилизация с фермик

Флуидите (100 ° С) се третират със суха топлина и някои хранителни среди, които не могат да издържат на по-високи температури (среда с въглехидрати, mph, мляко). Провеждайте стерилизация в KoCH кипяща скала за 30 минути за 3 дни дневно. Такава стерилизация се нарича частично.

С еднократно затопляне при температура от 100 ° С в продължение на 30 минути, вегетативните клетки умират, споровете на много микроорганизми остават жизнеспособни. След такова загряване, средата се поставя в 24 часа до термостата при 28-30 ° С. Споровете, запазени при първото отопление, имат време да покълнат в вегетативни форми, които умират с последващо нагряване. След това тази операция се повтаря още 2 пъти.

4.2.4. Стерилизация с наситен ферибот под налягане

Това е най-бързият и най-надежден начин за стерилизиране, в който най-устойчивите спорове умират. С него се стерилизират повечето хранителни среди.

Лечението с наситен ферибот се извършва в херметически затворен дебел ограден котел - автоклав.На капака или отстрани на автоклава има кран за изходната пара, манометър и предпазен клапан. Манометърът показва колко налягането на пара вътре в котела е по-високо от нормалното. За да се предотврати експлозия, когато граничното налягане е превишено, се задейства предпазен клапан, като се дава двойка.

Набор от манометър във физически атмосфери съответства на определена температура.

Надеждната стерилизация се постига с нагряване при 120 ° С и налягане от 1 атм за 20 минути.

Стерилизацията се извършва, както следва. Налейте вода в автоклава, стерилизираните елементи се поставят в него, завийте капака на автоклава и започнете отопление. Кранът е оставен отворен, докато целият въздух, който е в автоклав, няма да бъде заменен с водни пари. Когато двойки започват да напускат кран с непрекъснат струя, кранът е затворен, налягането на пара в автоклава се регулира до 1 atm и се поддържа на това ниво 20-30 минути. След това нагряването се спира, изчаквайки стрелката на налягането да падне до 0, внимателно (малко) отворете кранчето и слезте по пара. Само след това развийте капака на автоклава. Ако кранът се отваря по-рано от спада на налягането, течността в стерилизираните съдове ще кипи и тормози щепселите от тях.

Autoclave се използва за фракционна стерилизация с флуидна пара. В този случай капакът не завива, за да осигури свободно от двойка.

4.2.5. Пастьоризация

Пастьоризацията е непълна или частична, стерилизация, което означава нагряване при 65-80 ° С в продължение на 30-10 минути, съответно, последвано от бързо охлаждане до 10-11 ° C. Пастьоризиране на мляко, бира, вино и други продукти.

Материали и оборудване

MPB, агар, Lacmus Red, Brommat Blau, порцеланови плочи с кладенци или чаши, стъклени пръчки, 20% Na2C03 разтвор, епруветки в статив (за леене на агар), фунии, памучни, петриеви ястия, пипети Mora mora на 1 ml, хартия За обвивки на чаши и пипети, колби с капацитет 250 ml, тежки нишки.

5. Отчитане на броя и разпределението на чистата култура на микроорганизми

5.1. Методи за отчитане на броя на микроорганизмите

5.1.1. Отчитане на броя на микроорганизмите (CFU) в почвата чрез метода на хранителни плочи в комбинация с метода на последователни разреждания

Почвата е най-благоприятната среда за развитието на микроорганизми. Поради голямата хетерогенност на състава му, за да се вземе предвид броят на микроорганизмите в него от изследваната зона в средатапроба на почвата.

Първо се приготвят суспензии (метод на разреждане), съдържащ различни почвени концентрации в 1 ml вода. За да направите това, на стерилно стъкло, стерилна порцеланова шпатула или алуминиева чаена лъжичка отнема от буркан или торба с почвата в 1 гр. Има шпатула, една лъжица пламък, задвижвана в пламък на горелка или, акостиране в алкохол, изгаряне. При сгъване на почвата чашата е покрита с друго стерилно часовник.

Шлифоване на почвата, наблюдение на условията на асептиците, прехвърляне към колбата при 250 ml с 99 ml стерилна вода. Сместа се разклаща 5 минути, без да се омокря. Стерилна пипета се приема 1 ml суспензия, съдържаща 10-2 g почвата и се прехвърля в епруветка с 9 ml стерилна вода. Пипетата се промива многократно с вода в тръбата, за да се промият клетките от стените, доколкото е възможно. Друга стерилна пипета се взема от колбата още 1 ml суспензия и се поставя във втората колба, също съдържаща 99 ml стерилна вода. Тази пипета се измива по същия начин, както в първия случай. Епруветката и втората колба се разклащат 1 min. Концентрацията на почвата в тръбата ще бъде 10-3 g, във втората колона -10-4. По същия начин, 1 ml суспензия от втората колби във втора епруветка с 9 ml и 99 ml стерилен кран Водата и 99 ml стерилна чешмяна вода се прехвърлят във втората стерилна пипета. Получават се нови суспензии, съдържащи съответно в 1 ml, съответно 10-5 и 10-6 g почва.

Практически работи

За ученици от втора година

По микробиология

1. Микробиологична лаборатория.

2. Микроскопични изследвания. Запознаване с микроскоп.

3. Методи за оцветяване на лекарства. Методи за приготвяне на лекарства

за микроскопия.

4. Методи за събиране на материали. Хранителни среди.

5. Метод на бактериологични изследвания върху примера на Staphylococci.

6. Отглеждане и индикация за вируси.

9. Влиянието на екологичните фактори върху микроорганизмите.

10. Серологични реакции. Реакция на аглутинация.

11. Реакция на хемаглутинация.

12. Допълване на свързваща реакция.

13. прецизна реакция. Груба реакция.

14. Имунофлуоресцентна реакция. Реакция на имунитет (проби от кожата).

Операционна реакция.

15. Ваксини.

16. Подготовки за суроватка.

Въведение

Инструментариум Тя е разработена, за да помогне на учениците от Московския медицински колегия на железопътния транспорт Mitita за подготовката на практическа работа в рамките на дисциплината "Основи на микробиологията, вирусологията и имунологията".

Модул за обучение

Тема: Вижте софтуера

Вид на класовете: практически

Място на класове: Микробиологична лаборатория

Време: 16 * 2 часа

Ученикът трябва да знае:

СЕКЦИЯ 1

Медицински бази

Бактериология и микробиология

Практически работен номер 1

Предмет: "Микробиологична лаборатория"

Микробиологичната лаборатория е организирана с болници и санитарни и епидемиологични станции. Има и специални лаборатории, в които работят с патогени от особено опасни инфекции.

вирусологични лаборатории и др.

Задачата на микробиологичната лаборатория включва:

1) бактериологична диагностика на инфекциозни заболявания;

2) санитарни и бактериологични проучвания на вода, въздух и предмети

околен свят;

Лабораторията включва:

1) лабораторно помещение с остъклен бокс за провеждане

микробиологични проучвания (в бокса трябва да бъдат инсталирани

бактерицидна лампа);

2) измиване;

3) подготвител (помещение за приготвяне на ястия и други

помощни дейности);

4) автоклав;

5) стаята за получаване на анализи и издаване на резултати от научните изследвания;

6) vivarium;

Микробиологичната лаборатория трябва да бъде оборудвана:

• термостат
• хладилник
• сушилни камери,
• центрофугира
• лабораторни ястия;

Както и оборудване:

• алкохол или газова горелка
• бактериологични контури
• dz. Решение