Laboratorní práce na mikrobiologii a sanitaci. Metodický vývoj na tomto tématu: Metodické pokyny pro laboratorní práce na základech mikrobiologie

Lekce č. 1.

Příprava živných médií a metod jejich sterilizace

Vlastnosti pěstování mikroorganismů

Účel: Prozkoumat pravidla práce v mikrobiologické laboratoři, vlastnosti kultivace mikroorganismů, způsobů přípravy živných médií a způsobů jejich sterilizace.

Úkoly

Seznámit se s pravidly chování při provádění mikrobiologického workshopu.

Prozkoumejte vlastnosti kultivace mikroorganismů.

Prozkoumejte metody přípravy a rozlití živných médií.

Zkontrolujte metody sterilizace nádobí a živných médií.

Připravte si a nalijte MPA živné médium.

Získejte akumulativní kulturu sena a bramborových tyčinek.

Literatura

ANIKEEV V.V., Lukovskaya K.A. Průvodce praktickou prací na mikrobiologii. M.: Enlightenment, - 1983.

Gusev M.V. Mikrobiologie: tutoriál pro univerzity / m.v. Gusev, L.A. Mineyev. - Moskva, 2004

Emtess V.t. Mikrobiologie: Učebnice pro univerzity / V.T. Emtess, E.n. Mishoustin. - M.: Drop, 2005.

Lukovskaya k.a. Mikrobiologie s virologickými bázemi. M.: Enlightenment, - 1983.

Základy mikrobiologie, virologie a imunologie. / Pod. Upravil Vorobiev A.a. a Krivoshein Yu.S. - M.: Mastery, 2001.

Pimenova m.n. Průvodce praktickou prací na mikrobiologii. Moskva, 1971.

Workshop na mikrobiologii. Ed. NETUROVA A.I. - M.: Akademie, - 2005.

Tepper e.z. Workshop na mikrobiologii. - M.: Drop, 2004.

Materiály a vybavení. Sterilní Petriho misky skuželovité kuželové baňky na 100-150 ml, Agar výživný, pepton, seno, bramborové hlízy, křída, dlaždice, alkohol, baňky, vlna, gáza, pipety, váhy, více, termostat.

Základní pojmy.Kultivace, kultura, povrchová pěstování, hluboká kultivace, pěstování pěstování, kontinuální kultivace, čistá kultura, kumulativní kultura, setí, inkubace, průchod, elektrické média, kumulativní média, optimální média, přírodní média, syntetické média, semi-syntetická média, agar, Sterilizace, farmování, tindalization, pasterizace, autoklávování, MPA.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Prozkoumejte pravidla práce při provádění mikrobiologického workshopu.

Úkol číslo 2. Zkontrolujte klasifikaci živných médií, vlastnosti jejich přípravy a rozlití, metody sterilizace živinových médií a nádobí.

Číslo úlohy 3. Připravte se a nalijte MPA živinové médium do sterilních Petriho misek.

Úkol číslo 4. Získejte úložnou kulturu sena stick(Bacillus subtilis).

Seno je jemně řezaných a umístěno do baňky s objemem 500 ml, naplnění na jednu čtvrtinu objemu, přidejte špetku křídou a vaříme 15-20 minut, dokud životní prostředí nezíská barvu neformálního čaje. Odmazání sena se nalije do sterilních kuželových baňek na 100-150 ml vrstvy 1,0-1,5 cm, uzavřené bavlněnými zátky a umístěny v termostatu při teplotě 22-25 ° C.

Dva dny na povrchu média se rozvíjí whitish filmVy. Subtilis. který se stárnoucí, na 3-4. den, se stává šedavě zeleně. Ostatní mikroorganismy jsou zřídka roste v malých množstvích.

Úkol číslo 5. Získejte úložnou kulturu bramborových tyčinek (Vy. Subtilis var. Mesenttericus).

Vymyje se hlízy brambor, ne čištění, nakrájíme na kruhy. Povrch je otírán křídou, aby se médium neutralizovalo a umístěno do sterilních Petriho misek na dvojité vrstvě filtračního papíru navlhčeného destilovanou vodou. Šálky s bramborovým médiem jsou uchovávány v autoklávu v 0,5 atm po dobu 10 minut a vloží se do termostatu s teplotou 27-30 ° C po dobu 3-4 dnů.

Na povrchu bramborových plátků je vytvořen hustý vrásčitý film kultury bramborové hůlky. Zbarvení filmu může být odlišná: bílá šedá, narůžová, žlutohnědá, černá, která závisí na odrůdách kultury, které dostaly preferenční vývoj.

Otázky řízení

Klasifikace živinových médií.

Metody sterilizace laboratorních jídel a nutričních médií.

Způsoby přípravy jednotlivých živných médií (MPB, MPA, MPH, CA, KA atd.) Zaměření na živná média.

Vlastnosti kultivace mikroorganismů (povrchní a hluboké, periodické a kontinuální). Kumulativní a čisté kultury.

Metody přípravy nativní a pevných léčiv mikroorganismů.

Prozkoumejte hlavní fáze vývoje mikrobiologické vědy, příspěvek ruských a zahraničních vědců k jeho rozvoji. Vyplňte tabulku č. 1.

Tabulka číslo 1. Historie vývoje mikrobiologie

Lekce číslo 2.

Příprava živých a pevných léků mikroorganismů a známého s jejich morfologií

Účel: Zkontrolujte způsoby a techniky pro přípravu mikrodručů ve studii mikroorganismů a seznámí se s jejich morfologií.

Úkoly:

Prozkoumejte vlastnosti morfologie bakteriálních buněk.

Připravte fúzi a pevné mikroorganismy.

Materiály a vybavení. Posuňte sklo, bakteriologická smyčka, alkohol, filtrační papír, krystalizátor s můstkem pro přípravky, promytí vodou, vodnými roztoky barvivy - fuchsin, methylenová modři, gentálně (dále jen zařízení pro přípravu mikrokrůz); Ponorný olej, mikroskop; Masová voda, kvasinky, sušené a bramborové hůlky.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Proveďte celoživotní studii bakteriálních buněk s následujícími metodami, nakreslete obrázky:

Způsob drceného poklesu.Mikrobiologická smyčka se aplikuje poklesem jednoho z kapalin. Kryté sklo na okraj okraje poklesu a postupně spustilo.

Kapky závěsné metody.Ve středu potahového skla se použije malá kapka studie ve studii tekutiny a převrácení nad prohloubením speciálního posuvného skla.

Příprava předtiskem. Z agarového média, na kterých mikroorganismy rostou s pevným trávníkem nebo ve formě jednotlivých kolonií, vyřízněte malou krychli a přenášejí jej do posuvného skla tak, aby byl povrch s mikroorganismy vypracován. Potom se čistý povlak sklo aplikuje na trávník nebo kolonii, mírně přitlačila smyčka nebo pinzeta na něm a okamžitě odstranit, snaží se nepohybovat. Výsledný lék je umístěn otisk dolů v kapce vody nebo methylenové modře (1:40) na snímku.

Úkol číslo 2. Připravte pevnou přípravuVy. Subtilis, vy. subtilis.var. mesenttericus, St. Lactis, S. Cerevisiae, E.Coli(Obr. Č. 1, 2, 3, 4 Aplikace), Udělat obrázky.

Aplikace. Skleněný sklíčko je suchý na plamenku alkoholu. Bakteriologická smyčka, sterilizovaná na plamenech hořáku, nátěr materiálu ve studii se aplikuje ve středu předmětu skla. Pokud se kultivace mikroorganismu pěstuje na hustém živinovém médiu, vodní kapky na sklo, malé množství materiálu je vyrobeno do bakteriologické smyčky a stěrky.

Sušení a fixace. Lék se suší ve vzduchu a pak pevný. Konvenční mikroorganis kartáče jsou upevněny tepelně, vodivé sklo 2-3krát přes hořák plamene se stěrkou nahoru.Fixace smear vede k smrti mikroorganismů, hustá lepení na povrch skla a snadnější citlivost mikrobů k barvivu.

Zbarvení. Nalijte povrch roztokem roztokem jakéhokoliv barviva po dobu 2-3 minut (methylenová modrá, gentineviolet, fuchsin). Rozlišovatjednoduchý a diferenciální Barvení mikroorganismů. V prvním případě je celá klece poškrábaná, takže jeho tvar a velikosti jsou jasně viditelné. Diferenciální barvení odhaluje pouze určité buněčné struktury a náhradní látky.

Proplachování. Potom se barvivo s nátěrem promyje vodou z vedení, spodní strana léku otřete filtrační papír s pásem, jemně suchý a mikroskopie.

Celkové charakteristiky mikroorganismů. Výrazné známky prokaryotické a eukaryoty.

Tvar a velikost bakteriálních buněk. Morfologické typy bakterií.

Základy systematiky mikroorganismů. Poloha bakterií v systému organismů a jejich variability. Známky bakterií použitých při určování druhu.

Stručný popis pořadí schizomycetales.

Stručný popis pořadí Actinomycetales. Nocardia. Mycobakterie.

Stručná charakteristika řádu myxobakterií.

Houby. Stručný popis zigo-, akulu a deuteromycetes.

Vyplňte tabulku číslo 2.

Tabulka číslo 2. Výrazné známky eukaryot a prokaryotů

Lineární chromozomy

Otázky pro samostudium

Stručný popis hotelových skupin bakterií (dle determinant bakterií Berdygia).

Morfologické vlastnosti a Systematika řasy.

Morfologické vlastnosti a systematika nejjednodušší.

Lekce číslo 3.

Zbarvení inkluzí, kapslí a endospor, malování gramem

Účel: Prozkoumejte způsoby barvení sporů, kapslí a inkluzí bakteriální buňky; Prozkoumejte své cytologické vlastnosti na příkladu barvy v gramu.

Úkoly:

Detekujte granule lipidů v kvasinkových buňkách.

Detekte glykogenové polysacharidy v kvasinkových buňkách.

Detekovat kapsle bakteriálních buněk negativním kontrastem (na příkladuAzotobacter).

Diferenciální kolapsový spor a cytoplazmus metodou ozhechki.

Proveďte barvu bakterií gramem.

Materiály a vybavení. Skleněné sklo, bakteriologická smyčka, alkohol, filtrační papír, krystalizátor s můstkem pro přípravky, vodní kabely s vodou, mikroskopem. Vodné roztoky barviv - fuchsin, methylenová modrá, gentianviolete, carbolský fuchsin ochucený, Súdán III. Ponorný olej, kyselina sírová 1%, řasenka, kyselina chlorovodíková 0,5%, Lugol roztok. KulturaYou.subtilis, you.mycoides, s.cerevisiae, E. coli.

Základní pojmy.Moerein, volusutin, nukleoid, glykogen, kapsle, buněčná stěna, polysacharidy, polyfosfáty, metarmatické zrna, monotrily, přepisy, lofotrikha, baclomický tvar, clostridiální tvar, plectridial forma, exine, intamus, metachromosie.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Zjistěte zahrnutí polyfosfátů (volutinu) v kvasinkových buňkách. Volusutin v houbách a kvasinkových buňkách jsou lokalizovány ve vakuách, v bakteriích a aktiv actinomycetech v cytoplazmě. Je náhradní fosor- a látka obsahující dusík, deriváty nukleové kyseliny. Charakteristickým vlastnictvím je Metachromosia, tj. Schopnost získat další barvu než zlikvidovat své látky.

Zbarvení Volyutin podle metody Omeliansky.Na předmětu Sklo připravte tenký stěr kultivace mikroorganismu, suší se ve vzduchu, upevněná na plamenech, obarvené carbolovy fuchin 30-40 s a promyje se vodou. Rozlišení, ponoření do baňky s 1% roztokem kyseliny sírové o 20-30 s a je okamžitě promyje vodou. Kyselina sírová Zdobení cytoplazmy a zrna volutinu zůstávají malované fuchsin. Léčivo je stylizováno methylenovou modrou (1:40) 20-30 s, promyje se vodou, suší se ve vzduchu a mikroskopii. Na přípravě obilného volyutinu namalovaného v červené barvách cytoplazmy - v modrém (obr. Č. 1, 2 aplikace).

Úkol číslo 2. Detekujte granule lipidů v kvasinkových buňkách. Rezervní lipidy v kvasinkách a myceliální houby jsou reprezentovány neutrálními tuky; V bakteriích provede tato funkce kyselina hydroxymalaová.

Zbarvení tuku inkluze.K poklesu vodné suspenze mikroorganismů na skluzu se přidá pokles roztoku Súdánu III, pokryté potahovým sklem a mikroskopií, s použitím objektivu VI-40. Súdán III se rozpouští v tukových inkluzích bakteriální buňky, malovat je do oranžově červené. Buněčný cytoplazma zůstává bezbarvý.

Číslo úlohy 3. Detekte glykogenové polysacharidy v kvasinkových buňkách. Náhradní látky sacharidy přírody v bakteriálních buňkách se hromadí ve formě granulí. Granulez - látka podobná škrobu, když interakce s činidlem Lugolu, barvení v modré barvě; Glykogen - polysacharidový barvení ve stejných podmínkách v červeno-hnědé barvě. Granulezes se vyskytuje pouze v prokaryotických buňkách.

Malování glykogenu a granule. K poklesu suspenze mikroorganismu na posuvném skle přidejte kapku slabého roztoku Lugolu, pokrytého potahovým sklem a mikroskopií, pomocí objektivu VI-40.

Úkol číslo 4. Detekovat kapsle bakteriálních buněk negativním kontrastem (Azotobacter).

Detekce kapslí na negativní životní přípravu.Mikrobiologická smyčka mikrobiologické smyčky se aplikuje s velkou kapkou černé jatečně upravené těleso a kapka ve studované kultuře mikroorganismu jsou distribuovány pomocí snímku a suší se. Zvážit s ponorným systémem. Na tmavém pozadí carcas, průhledné zóny kapslí kolem prudce nastínil buňky (obr. 8 8.).

Úkol číslo 5. Diferenciální kolaps sporu a cytoplazmy (yVy. Mycoides).

Metoda přepání. Sušený přípravek nalije 0,5% kyselina chlorovodíková A zahřívané 2 minuty před vzhledem páry. Šmoule se promyje vodou, pokrytou filtračním papírem a nalil carbolovy fuchsinové cíle. Obarvené po dobu 5 minut, když se vyhřívají, dokud se neobjeví páry. Promyje se vodou a rozlišovat v 1% kyseliny sírové 0,5-1 minuty (čas je stanoven experimentálním způsobem). Omyjte vodou a plněte 30 s methylenovou modrou. Opět se opět promyje, suší a mikroskopie. Spory jsou natřeny v růžové barvě, cytoplazmus - v modrém (obr. Č. 2).

Úkol číslo 6. Proveďte barvu bakterií gramem. Rozdíl v chemickém složení buněčných stěn bakterií ovlivňuje jejich schopnost být natřen v gramu. Na tomto základě jsou bakterie rozděleny na gram-pozitivní a gram-negativní (jazýček č. 3). Gram-pozitivní skořápky obsahují více polysacharidů, másle a kyseliny výuky; Gram-negativní mušle mají vícevrstvou strukturu s vysokým obsahem lipidů (lipoproteiny a liposacharidy). Gram-pozitivní mikroorganismy během barvení tvoří nerozpustný v alkoholovém připojení jod s hlavním barvivem, grampoziční se záporná sloučenina se rozpouští v alkoholu.

Zbarvení v gramu.Používá se na sklo kožní sklo a poté tři rozmazané se zpracovávají najednou: od kultury bakterií, vědomě gramově pozitivní, od kultury bakterií vědomě granitálně a mezi nimi stěr z kultury studia mikroorganismu. Použijte mladé jednořetězněné kultury.

Šmouhy se suší ve vzduchu, upevněné na hořáku plamene a barveny 1% vodným roztokem 1min Geciankiolete. Barvivo se promyje roztokem zavazadlového prostoru a nalije se smear se stejným roztokem po dobu 1 minuty. Léčivo se promyje vodou a diferencuje v baňce s 95% ethanolem (0,5-1,0 min). Po diferenciaci smyku se lék okamžitě promyje vodou a vyrazí dalším barvivem - 0,1% vodným roztokem fuchsina 2-3 minuty. Lék se konečně promyje vodou, suší se ve vzduchu a mikroskopii s ponořením olejem. Na přípravě se gram-pozitivní bakterie namalují v lila-fialové barvě, gram-negativní - v růžové maliny (obr. Č. 2 aplikace).

Tabulka číslo 3. Postoj bakterií na barvu v gramu

Staphyloccocus aureus.

Escherichia coli.

Streptococcus.

Proteus vulgaris.

Bacillus subtilis.

Pseudomonas aeruginosa.

Sacharomyces.

Shigella sp.

Zkontrolujte otázky a úkoly

Struktura skořepiny bakteriální buňky. Vzdělávací kapsle.

Poměr bakterií na barvu v gramu. Rozlišovací rysy gram-pozitivních a gram-negativních mikroorganismů.

Buněčné membrány a intracelulární membránové struktury.

Jaderné přístroje, složení, organizace a replikace.

Ribozomy, plynárenské vakuoly a další bakteriální organely; jejich význam.

Zapnutí bakteriální buňky (polysacharidy, polyfosfáty, lipidy, inkluze síry).

Metody chovných bakterií. Formace houby z bakterií.

Bičík. Pohyb bakterií. Taxíky.

Otázky pro samostudium

Dědičné faktory mikroorganismů.

Mechanismy způsobující změnu genetických informací mikroorganismů.

Lekce č. 4.

Kvantitativní účetní mikroflóra a voda

Definice mikrobiálního čísla

Účel: Proveďte kvantitativní popis vzduchu a vodních mikroorganismů.

Úkoly

Zkontrolujte metody kvantitativního měření mikroflóry vzduchu a vody.

Proveďte mikrobiologickou analýzu vzduchu a hygienického a bakteriologického vyšetření vody.

Materiály a vybavení.Petriho misky se sterilní MPA, sterilními pipetami na 1 ml, vodní lázeň, elektrický kabát, teploměr, vodovodní kohoutek, voda z větev vody, alkohol, zápasy.

Základní pojmy.Obecné mikrobiální vody,obecné mikrobiální číslo vzduchu, index vzorku, barvy, sanitární a nižší mikroorganismy, autochthonická mikroflóra, mikroflora alkohonová, zóna odběr vzorků.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Používán s definicí OMCH (obecný mikrobiální číslo) vzduchu.

Infect Petriho misky otevřené v prostorách ve studiu nebo na ulici po dobu 5 minut. Petriho Cup Cover je odstraněn a bez otáčení, dejte to poblíž. Na víčku Petriho misek ukazuje zkušenosti, datum výsevu. Infikované Petriho misky jsou umístěny v termostatu při teplotě 25-28 ° C.

Po 2-3 dnech, počet kolonií mikroorganismů vyvinutý na agarové desce Petriho misek.Zároveň bere v úvahu následující: o přibližných odhadech (omelian) na ploše 100 cm2 po dobu 5 minut, tolik mikroorganismů a sporů je vypořádáno, kolik z nich je obsaženo v 10 litrech vzduchu. Nechte, aby každá kolonie vznikla z jedné buňky nebo sporu. E.tato metoda poskytuje pouze přibližná data, ale relativní počet mikroorganismů ve vzduchu různých prostor vám umožní detekovat poměrně přesně. Vyplňte tabulku č. 4, nakreslete závěry.

Například: 5 kolonií bylo nalezeno v Petriho sporáku, šálku 2 cm. Oblast je s \u003d πr2 \u003d 3,14 * 4 \u003d 12,5. Pak v 10 litrech obsahují

Tabulka číslo 4. Celkové mikrobiální číslo (OMCH) ve vzduchu prostor.

Kolonie mikroorganismů izolovaných ze vzduchu na MPA desky mohou být použity k identifikaci druhu. Nejčastěji ze vzduchu se odlišuje kolonií mikrokoky, sarcin, některé bacily a bakterie.

Úkol číslo 2. Rozložit zkušenost s určením vody.

Pro výzkum ve sterilních baňkách převezte vodu z vodovodu. Z baňek trvat 1 ml vody se sterilní pipetou a přispívají k Petriho misku s leštěným médiem (MPa) (teplota by neměla být nad 45 ° C). Šálek je uzavřen a pečlivě naklápěna, míchaný živné médium, dejte desku zmrazené, umístěné v termostatu. Po 3-5 dnech se Petriho kolonie vyvinuté v šálcích vypočítávají a stanoví počtem bakterií v 1 ml vody.

Po započítávání kolonií se stanoví mikrobiální číslo vody - počet mikroorganismů na 1 ml studia vody, s přihlédnutím k chovu, pokud byl vyroben.

Data jsou vydávána ve formě tabulky číslo 5, vyvodit závěry.

Tabulka číslo 5. Obecné mikrobiální číslo (OMCH) pitné vody

Vodní voda

Otázky řízení

Vlastnosti mikroflóry vzduchu. Šíření mikroorganismů ve vzduchu.

Normy hygienického stavu vzduchu prostoru.

Sanitární a mikrobiologický výzkum vzduchu.

Mikroflóra pitné vody.

Mikroflóra přírodních vod. Distribuce mikroorganismů ve vodě.

Sanitární indexy pitné vody. Obecné mikrobiální číslo vody. Kolya index, vodní titr.

Znečištění a samočistící vodní útvary. Úloha mikroorganismů v procesech samočinného očištění vodních útvarů.

Biologické čištění pití a kanalizace.

Sanitární a bakteriologické vyšetření vody. Definice OMCH, RAL-index, titr.

Sanitární mikroorganismy vzduchu, vody, půdy.

Požadavky na sanitární mikroorganismy.

Mikroflóra potravin (kyselé mléko, ryby, maso, klobása, konzervované potraviny).

Charakteristika skupin mikroorganismů používaných při posuzování bezpečnosti potravinových surovin a potravinářských výrobků.

Sanitární a bakteriologické normy pro různé potravinářské výrobky.

Metody hygienického a bakteriologického výzkumu potravinářských výrobků.

Půda jako stanoviště mikroorganismů.

Environmentální faktory pro šíření půdních mikroorganismů.

Vztah mezi mikroorganismy půdy.

Účast v půdní mikroflóry v procesech mineralizace organických látek a tvorby humusu.

Sanitární a bakteriologické vyšetření půdy.

Lekce číslo 5.

Získání čisté kultury mikroorganismů

Nefelometrická metoda kvantitativního účetnictví mikroorganismů

Účel: Izolovat čisté kultury mikroorganismů, zvládnout nešetrickou metodu účetnictví pro počet mikroorganismů.

Úkoly

Proveďte uvolňování čisté kultury metodou "Vyčerpání" mrtvice.

Proveďte kvantitativní hodnocení mikroorganismů s metodou přídavného poměru

Materiály a vybavení.Petriho misky se sterilní MPA, ryby, goroly kamery, mikroskopy, mikrobiologické smyčky, alkohol, zápas.

Základní pojmy. Čistá kultura, růst, reprodukce, binární dělení, laskavá, buněčný cyklus (monomorfní, dimorfní, polymorfní), doba výroby, specifická míra růstu, výnos z biomasy, ekonomický koeficient, stacionární fáze růstu, fáze zpoždění, fáze exponenciální reprodukce, stacionární fáze , Plnicí fáze, pokračující kultura, tekoucí kultura, synchronní kultura.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Získání čisté kultury mikroorganismů

Uvolnění čistých kultur aerobží se provádí vážením akumulační kulturou na povrchu pevného živného média. Výsev se provádí depletící zdvih. Poté, co kolonie rostou, věří v čistotě vybraných kolonií vizuálně a mikroskopu. Po 3-6 dnech si vyberou a popisují izolovanou kolonii mikroorganismů (pomocí vzhledu aplikace).Kolonie je popsána podle následujícího schématu:

Množství kolonie: bod (D je menší než 1 mm), malé (D - 1-2 mm), střední (D - 2-4 mm) a velký (D - 4-6 mm nebo více).

Tvar kolonie je zaoblené, amoeboid, Rhizoid.

Optické vlastnosti - transparentní, matný, fluorescenční, průsvitný (průsvitný), neprůhledný, brilantní.

Barva - Oslavte barvu kolonie a výběr pigmentu ve středu.

Povrch - hladký, hrubý, složený, buggy.

Profil - plochý, konvexní, kráter, rostoucí v agaru atd.

Okraj kolonie je dokonce, vlnitý, pádlo, Rhizoid, atd.

Struktura kolonie je homogenní, jemně nebo hrubá.

Konzistence - olej, tvrdý, viskózní, film.

Úkol číslo 2. Proveďte kvantitativní hodnocení mikroorganismů s metodou přídavného poměru.

a) nefelometrická metoda. Hustota buněkS. Cerevisiae. V kapalném médiu se stanoví olejometricky (FEC) pomocí kyvety s délkou optické dráhy 0,5 cm a zeleným světelným filtrem (A \u003d x 540 nm). Pro získání spolehlivých výsledků musí být hustota buněk v rozmezí 0,1-0,6. Při koncentracích buněk nad 0,6 vyskytuje sekundární světelný rozptyl, což vede k nižším výsledkům. Z tohoto důvodu, suspenze velkých hustot před měřením světla by měla být chována vodou v 2, 4, 6, 8 a 10 krát. Výsledky měření optické hustoty každé suspenze (použije se voda) jsou zaznamenány v tabulce č. 6.

b) Počítání buněk v komoře Hot-Objem. Pro přechod z hodnot fotoelektrocolorimetru (FEC) k počtu buněk mikroorganismů v médiu, jejich počet vypočítává jejich počet za použití počítatelné komory tepla a ředění kvasinkové suspenze, které byly použity pro stanovení jejich hustoty s olejometrickou metodou. Buňky se počítají ve velkých čtvercích mřížky, pomocí čočky 8 *. Celkový počet vypočtených buněk by měl být nejméně 600. Počet buněk v 1 ml odpovídající suspenze se vypočítá vzorcem M \u003d 1000 * A * N / H * S, kde m je počet buněk v 1 ml suspenze; A je průměrný počet buněk na velkém čtverci mřížky; h - hloubka komory (1/10 mm); S - Square Square Mesh (1/25 mm2 ); n je stupeň chovné suspenze; 1000 mm3 - 1 ml. Získané výsledky, miliony buněk v 1 ml jsou zaznamenány v tabulce. № 6.

Tabulka číslo 6. Počet kvasinek buněk v suspenzí, instalovaný pomocí horké komory a odpovídající fackování

Čtení FEC.

Sestavte kalibrační křivku na základě datové tabulky. Č. 6, kterým se na ose abscisy, počet kvasinkových buněk a na osu ordinátu optická hustota odpovídajícího suspenze. Kalibrační křivka je postavena pro rychlá definice Počet buněk určitého typu mikroorganismů podle čtení FEC.

Zkontrolujte otázky a úkoly

Akumulační kultury a tělesný princip. Čisté kultury, metody přijetí a hodnoty.

Reprodukce mikroorganismů.

Bakterie buněčných cyklů. Růst jednotlivých mikroorganismů a populací. Vyvážený a nevyvážený růst.

Parametry růstu plodin: doba generace, specifická míra růstu, výnos z biomasy, ekonomický koeficient.

Růstové křivky, vlastnosti jednotlivých fází. Růst mikroorganismů s nepřetržitým pěstováním. Synchronní kultury.

Lekce číslo 6.

Sanitární a bakteriologický výzkum potravin

Účel: Provádět hygienické a bakteriologické posouzení stavu potravy.

Úkoly

1. Určete celkový mikrobiální číslo některých potravin.

2. Určete přítomnost BGPP (intestinální stick bakterie).

Materiály a vybavení. Petriho misky s MPA, Petriho miskami s endovým médiem, 1 ml pipety, malty stúpy, skalpely, trubky s 9 ml sterilní vody, zkumavky s CESLER MEDIID, sterilními baňky se 100 ml vody, šupinami.

Základní pojmy. Specifická potravinářská mikroflóra, nespecifická mikroflóra potravin, BGPP, sanitární mikroorganismy.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Určete dostupnost BGPP a společného sektoru potravin, provádět následující kroky v sérii:

1. Příprava potravinářských výrobků pro výzkum.

Je triturován ve sterilní porcelánové malty 10 g hitů (pořízených sterilních z různých míst), postupně přidává 90 ml roztoku isotonického chloridu sodného, \u200b\u200ba vlevo při teplotě místnosti po dobu několika minut. Sterilní pipeta se širokým nosem je nasekaná suspenzí pro plodiny a ředění (1 ml). Předpokládá se, že 1 ml připravené suspenze obsahuje 0,1 g zdrojového produktu (chov 10-1 ). Produkty konzistence kapaliny jsou nasazeny a chovány pro plodiny bez předchozí přípravy.

2. Příprava chovu potravin pro setí.

U konzistikou potravy se ředicí produkty připraví následujícím způsobem: 1 ml produktu se odebírá sterilní pipetou a přivede do zkumavky obsahující 9 ml sterilního isotonického roztoku chloridu sodného, \u200b\u200bmíchá se. Recepce (10.-2 ) Jsme podrobeni dalšímu chovu na požadovaný počet časů (více 10).

Obrázek č. 1. Příprava ředění a sadění suspenze půdy na pevných živinách

3. Definice společného osiva.

Vybráno pro výsevu ředění jsou 1 ml do sterilních Petriho misek s roztavením 45-500 MPa, po které se míchají. Médium se nechá zmrazené, plodiny se pěstují na den při 37 ° C, po kterém se vypočítá počet pěstovaných kolonií (kód). Určete celkový počet bakterií v 1 ml nebo 1 g produktu.

4. Stanovení dostupnosti BGPP.

Pro výsev se použije, že množství produktu, ve kterém v souladu se zavedenými normami je poskytováno pro absenci BGPP. Z vybraných ředění studovaných vzorků vzorků se 1 ml odebírají a spadají do zkumavek s přístrojem Kessler. Uložené zkumavky se inkubují při teplotě 37 ° C 24 hodin. Při absenci známek růstu (tvorba plynu nebo změna životního prostředí) provést závěr o dodržování výrobku ve studiu. Pokud existují známky růstu, je založen na středu Endo. Sevings jsou inkubovány 18-20 hodin při teplotě 37 ° C. Při prohlížení setí jsou kolonie poznamenány, podezřelé nebo typické pro BGKP (forma červená, růžová, světle koronární kolonie s kovovým třpytem nebo bez něj). Z nich jsou drogy živých a pevných buněk natřeny v gramu, mikroskopii. Detekce gram-negativních, neformačních sporů tyčinek se zaoblenými konci indikuje možnou dostupnost BGPP.

Data o celkovém osazování a přítomnosti střevních hůlek jsou zahrnuty do stolu. Udělejte závěry o mikroflóře různých potravin s použitím hygienických a mikrobiologických standardů (SANPINE 2.3.2.560-96) (Tab. Č. 7).

Tabulka číslo 7. Některé hygienické a bakteriologické normy (Sanpine 2.3.2.560-96)

Ruský sýr

0,001

Zmrzlina

1*10 5

0,01

Zkontrolujte otázky viz Lekce č. 4.

Lekce číslo 7.

Půdní mikrobokenózy

Účel: Prozkoumejte druhovou kompozici a distribuci půdních mikroorganismů.

Úkoly

1. Podpora charakteru půdní mikroflóry a dominantního druhu.

2. Vyrábět kvantitativní a vysoce kvalitní účetnictví půdní mikroflóry.

Materiály a vybavení.Sklenice kůže, sterilní Petriho misky s MPA,váhy, více, skalpel, malta, gumová rukavice, baňka se sterilní destilovanou vodou 90 ml, sterilní baňka s objemem 250 ml, trubky s 9 ml sterilní vody, pipety na 10 ml a 1 ml, mikropipety pro 0,1 ml, sklo špachtle.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Zkontrolujte povahu půdních a rhizosférických mikrobokenóz metodou soustružení (na chladu).

Na rovném povrchu půdy je řez vyroben nožem, jejichž hloubka závisí na studovaném horizontu. Skočené a nízkotučné sklo (současně trvá několik brýlí) pevně přitlačené na svislou stěnu řezu a usnout půdu. Brýle jsou drženy v půdě od týdne do několika měsíců.

Po dobu expozice je expozice odstraněna ze zadní strany brýlí, experimentální povrch brýlí se suší ve vzduchu a upevňuje třikrát, strávit zadní stranu plamene hořáku. Po upevnění je sklo ponořeno do vody se zkušeným povrchem dolů, aniž by to přivedlo ke dnu. Po promytí je léčivo ponořeno do roztoku karbolického erythroinu po dobu 30 minut až 24 hodin. Lakované léky jsou vyšetřeny pod mikroskopem s ponorným systémem. V mikroskopi se poznamenává charakter mikroflóry, hustota soustružení skla a dominantních forem.

Úkol číslo 2. Určení OMS půdy.

Příprava půdní suspenze chovu.Pozorování sterility je 10 g půdy šité a nesou do sterilní malty. Vzorek půdy v maltě je zvlhčován do stavu pasty, který přidává 2-3 ml vody z první baňky obsahující 90 ml sterilní vody a 5 minut je z kobylka v gumové rukavici. Po tření půdy z malty se přenese vodou do druhé suché baňky, získá se první ředění - 1/10. Pohodlová suspenze v baňce se třepe po dobu 5 minut, je možné stát 30 ° C a pak se sterilní pipeta nese 1 ml půdní suspenze z baňky ve zkumavce č. 1 s 9 ml sterilní destilované vody, Druhé ředění se získá - 1/100. Podobně připravit řadu následných ředění půdní suspenze -1/1000, 1/10000, 1/100000 a více v závislosti na zamýšleném počtu mikroorganismů (obr. Č. 1, lekce č. 6).

Pro přidělení a kvantitativní účetnictví bakterií je pozastavení půdy zaseta na jeden z živných médií (MPA, KAA, půdní agar, ESBI prostředí; pro účetnictví Actinomycetes, KAPA nebo prostředí Chapeca se používá prostředí KAPA nebo Chapeca). Kolonie bakterií na Petriho miskách se počítají po 3 - 5 dnech, houbách a kvasinkách - po 5 - 7, aktinomycetes - až 7 - 15. Obsah mikroorganismů v 1 g půdy pro stanovení vzorcem:a \u003d b * v, kde a - počet mikroorganismů v 1 g půdy,b. - průměrné kolonie,v - Chov. Porovnejte druhovou kompozici a řadu půdní mikroflóry, vodu a vzduchu a závěr.

Zkontrolujte otázky a úkoly, viz Lekce č. 4.

Lekce číslo 8.

Transformace mikroorganismy sloučenin dusíku

Účel: Studovat zvláštnosti transformace mikroorganismů organických sloučenin dusíku.

Úkoly

Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do proteinových amonification procesů.

Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do procesů močoviny.

Materiály a vybavení: Středa reprodukování procesu proteinu a močoviny, mikroskopů, zařízení pro přípravu mikro-přípravku.

Základní pojmy. Ammonifikace, proteázy, peptidázy, ureázy, deamakce, dekarboxylace.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Prozkoumejte mikroorganismy, které provádějí ammonifikaci proteinu, provést výkres. Pro studium ammonifikaci proteinových látek s živným médiem může sloužit masový vývar s přidáním 3% peptonu.30 ml média se vlije do baňky na 100 ml a přidá se o 1/3 lžičku půdy. Baňky jsou uzavřeny bavlněnými zátky. Na médiu jsou dva papíry suspendovány - červená lactium nebo univerzální indikátorový papír navlhčený destilovanou vodou, pro detekci uvolněného amoniaku a filtru, navlhčeným alkalickým roztokem olověného acetátu, pro detekci sirovodíku a merkaptanu. Opravte je mezi korkem a stěnami krku baňky. Papír by se neměl dotknout média. Na 3-5 dní inkubace při 28-30 ° C se analyzuje obsah baňky. Určete patogeny procesu ammonifikace proteinu a jejich výrobků jejich živobytí.

Mikroskopický.Pro detekci patogenů shnilého rozpadu proteinových látek se lék živých bakterií připraví v rozdrceném poklesu, stejně jako pevný a lakovaný lék. Více než jiné, jsou v léku pohyblivé buňky.Proteus vulgaris. (Obr. Č. 4)převládající v prvních fázích kolapsu proteinů. Jedná se o nepřijatelné, nerovné délky hůlky. Kromě toho je na přípravě spousta buněk tvořících sporBacillus mycoides a Clostridium Sp. (Obr. Č. 1, 4 Aplikace). Nedávné spory jsou umístěny terminálně a průměr z nich překračuje šířku buňky.Vy. Mycoides. způsobuje ammonifikaci proteinových látek v aerobních podmínkách aS. putricus. - V anaerobiku, ale také se může vyvinout v aerobních podmínkách, pokud existují aerobní mikroorganismy, které absorbují kyslík.

Atmosféra NH3, barvení zavěšeného pásu červeného laktního papíru do modré barvy. Olověný papír černý pod působením síranu vodíku, pokud je pokryta stříbrným květem, to znamená, spolu s h2 S jsou stále rozlišeny merkaptany (například methylmercaptan ch3H).

Úkol číslo 2. Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do procesů močoviny amonification, provést výkres. Chcete-li dodržovat proces ammonifikačního procesu močoviny, je možné použít živinové médium následující kompozice (g / l destilované vody): draselný tartrát nebo sodík (víno, mohou soli kyseliny jablečné) - 5,0; močovina - 5,0; NA2 NRO 4 - 0,5; MgSO 4 · 7H20 - 0,2.

Médium se rozlití v 30 ml do baňek na 100 ml, infikují půdu a vloží se do termostatu při 25-30 ° C. Pro detekci amoniaku se páska červeného lakmusového papíru suspenduje pod bavlrubkou. Po 3-5 dnech je kultura analyzována. Nainstalujte výběr amoniaku na tvorbu červené laktiové papíru.

Mikroskopický.Studie postižené amonifikační patogeny z sotva znatelného filmu na povrchu média se připravuje přípravu a obarvené fuchinem. Nejčastěji jsou buňky pozorovány pod mikroskopemUrobacillus pasteurii (vy. Probatus), méně často - Planosarcina ureae (Obr. Č. 5 žádosti).

Zkontrolujte otázky a úkoly

Mineralizace dusíku. Bakterie zapojené do proteinových amonifikací.

Rozložení nukleových kyselin.

Rozložení močoviny, močových a hybrových kyselin.

Charakteristika nitrifikačních procesů. Mikroorganismy, které tvoří dusičnany v půdě.

Obnovení nitrátů a dusitanů v přírodě.

Denitrifikace (dusení dusičnanová generace).

Asimilace nitrateultur.

Azotfixation free-žil mikroorganismy.

Asociativní azotfixation.

Symbiotická azotfixace. Charakteristika uzlu bakterií.

Interakce uzlu bakterií s vlastníkem rostlin. Tvorba bakterií.

Symbiotická nitrogenace non-rostlin.

Chemie procesů dusíku.

14. Vyplňte číslo tabulky 8.

Tabulka číslo 8. \\ T Charakteristika procesů cyklu dusíku a mikroorganismů zapojených do transformace sloučenin dusíku

Ammonifikace močoviny

I fázové nitrifikace

Symbiotic Azotfixation.

Lekce číslo 9.

Transformace dusíku mikrodanismu

Účel: Studovat zvláštnosti transformace mikroorganismů minerálních sloučenin dusíku.

Úkoly

1. Pro studium zvláštností toku nitrifikačních procesů (I, II fáze) a mikroorganismy zúčastněných v nich.

2. Studovat zvláštnosti procesů denitrifikace a mikroorganismů zúčastněných na nich.

3. Pro studium zvláštností toku procesů dusíku a mikroorganismů se na nich účastní.

Materiály a vybavení. Baňky s kapalnými eshbi médiem pro pěstování nitrofixerů, média hroznů pro pěstování nitrifiátorů, místo hority pro pěstování denitrivátorů, mikroskopické malby, mikroskopy.

Základní pojmy. Nitrifikace (I a II fáze II), imobilizace dusíku, výroba asimilantních dusičnanů, dusičnanová generace nitraultu (denitrifikace), dusíkaté dusíkaté dusíkaté mikroorganismy, asociativní azotifikace, symbiotická nitrogenáza, Legemoglobin, nitrogenáza, nitroreduktáza.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do nitrifikačních procesů, provést výkres. Pro akumulaci nitrifikačních bakterií používají živinový médium S. N. vinogradsky (g / l destilované vody):

Média jsou sterilizovány a nalije do baňek s vrstvou 1,0-1,5 cm a infikují se ozdobnou půdou s hrudkou. Baňky jsou uzavřeny bavlněnými zátky a umístěny v termostatu při teplotě 25-28 ° C pro 14-21. den.

Mikroskopický. Pro studium nitrifikačních bakterií z kapaliny v baňkách připraví mikroskopy. V zorném poli mikroskopu je viditelná akumulace oválných nebo natažených buněkNitrosomonas (první fáze) a krátké nakrájené buňkyNitrobacter (druhá fáze). Zástupci laskavostiNitrosomonas. (Obr. Č. 6 Aplikace) Mají oválný tvar, v některých případech se blíží míči, mají mobilitu a jsou vybaveny jedním dlouhým bičím. Odlišné typyNitrosomonas. velmi rozšířený v půdě a od sebe se liší podle velikosti nebo formy buněk, jakož i poměrem k aktivní reakci média. Nejvíce studovanějšíNitrosomonas Europea. Kohaktní buňky nebo oválné, 0,5-1,5 μm, pohyblivé, s dlouhým polárním flagelou.Nitrobacter. - malé zaoblené, vejce ve tvaru vajec nebo hruškovité tyčinky, jednorázové nebo spojené do malých skupin obklopených sliznickou kapslí(Obr. Č. 7 aplikace). Mezi bakteriemi tohoto druhu je obvyklé rozlišit mezi dvěma typy:Nitrobacter Winogradskii a Nitrobacter Agilis.

Provádí se také oxidace amonné formy v dusitanuNitrosocystis a nitrososospira. dusitane k dusičnanuNitrospina.

Úkol číslo 2. Prozkoumejte mikroorganismy, které provádějí procesy denitrifikace, vytvářejí výkres. Pro akumulaci denintric bakterií se používá následující prostředí (v g / l): Segnetová sůl - 20; Kno.3 - 2,0; Na 2 NRO 4 - 0,5; MgSO 4 · 7N 2 O - 0,2; Feso 4 · 7n 2 Oh stopy. Médium se rozlité s vysokou vrstvou ve velkých trubkách na okraj a sterilizovat. Důkladně se míchá s půdou, aby se odstranily vzduchové bubliny a zavřete gumovou trubku, do které je ve střední části zvýšena skleněná trubka z 2 stran. Zástrčka posouvá část tekutiny do skleněné trubky. Pod zástrčkou by neměly být bubliny vzduchu. Vaseline Olej se nalije do trubky nad médiem pro vytvoření anaerobních podmínek jsou umístěny v termostatu při teplotě 30 - 35 ° C po dobu 5-6 dnů.

Mikroskopický.Od středu substrátu čistá pipeta vezme kapku a připravený pevný a lakovaný lék, který se pak zvažuje pod mikroskopem s ponorným systémem. Nešťastné kulové buňky nebo krátké hůlky převažují na přípravěParacoccus denitrificans (bakterie denitrificans ) (Obr. Č. 7 přílohy). Na médiu s ferronetickou solí se častěji vyvíjíP. Stutzeri (Achromobacter Stutzeri - Palcoidní buňky ve velikosti 2,0 - 4,0 μm, pohyblivé) (obr. Č. 7 aplikace). V tomto případě je kultura tvoří zelenavě žlutý zářivkový pigment. Související s denitriféry:Pseudomonas aeruginosa. - Malé tyčinky (1,0 - 1,5 μm velikost), jednorázové nebo spojené s dvojicemi, pohyblivými, nést 1 - 2 polární fréza. Často je pozorován se zelenými médiem, zejména při použití uhlíku kyseliny citrónové, což indikuje vývojPseudomonas fluorescens. - Malé tyčinky (1,0 - 2,0 μm ve velikosti), pohyblivé, mají 3 - 4 polární fréza.

Číslo úlohy 3. Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do fixace atmosférického dusíku, proveďte kresbu. Pro akumulaci volně živýho dusíku se používá eshbi středa. Složení živného média (g / l destilované vody):mannitida, glukóza nebo sacharóza - 20.0; NA2 NRA 4 - 0,2; MgSO 4 - 0,2; NaCl - 0,2; K 2 SO 4 - 0,1; SASZOZ - 5.0.

Životní médium, ne sterilizační, je v lahví do baňek 100-150 ml, vrstvy 1 - 1,5 cm a infikují skleníkovou půdou (1/3 lžičky). Baňky jsou uzavřeny bavlněným tampónem a umístěny v termostatu při teplotě 28 až 30 ° C.

Po 5 - 7 dnech na povrchu média je vytvořen hnědohnědý nitotobacter fólie. Tekutina v baňce je pěnící a vede vůni kyseliny olejové, což ukazuje na vývoj v prostředí bakteriíCl. Pasteurianum.

Mikroskopický. Připravte pevnou mikrokraktaci z povrchového filmu. Nejběžnější dva typy Azotobacter jsou nejčastější:Azotobacter Chrookoccum. - V mladé kultuře má zaostávané, pohyblivé, 3-7 mikrony ve velikosti.(Obr. Č. 8 žádosti). Ve staré kultuře jsou natažené buňky spojeny s dvojicemi a sartzi-jako pakety, obvykle obklopené lanovkou kapslí. V buňkách hodně brilantní zrna volutinu. Kolonie na husté výživné mediální sliznice, rozmetání nebo konvexní, bezbarvé nebo natřené v tmavě hnědé až černé barvě;Azotobacter vinelandii. - V mladé kultuře buněk lepkavých, ve velikosti 2-3 mikronů. Ve staré kultuře tvaru buněk sférický. Z kapky kapaliny připravit přípravuClostridium pasteurianum - mobilní buňky hackoidních buněk, 3 - 7 mikronů, jednorázových nebo párů a krátkých řetězců(Obr. 1.10 Aplikace). Spory oválné, jsou vytvořeny výstředně, zatímco buňky Spioners mají formu citronu. V buňkách se hromadí mnoho rozdělených rozprav. Kolonie bělavé, hladké, lesklé.

Zkontrolujte otázky viz Lekce č. 8.

Lekce číslo 10.

Účel:

Úkoly:

Prozkoumejte mechanismus úniku fermentace alkoholu a morfologii jeho patogenů.

Prozkoumejte průtokový mechanismus a typy fermentace kyseliny mléčné, morfologii příčinných činidel.

Prozkoumejte vlastnosti konverze alkoholu na kyselinu octovou a morfologii bakterií kyseliny octové.

Zkontrolujte mechanismus toku oliv a morfologie jeho patogenů.

Materiály a vybavení. Brine, Kefir, pekařství kvasinky, pivo, médium pro pěstování bakterií molicových kyselin, zařízení pro lakování, mikroskopy.

Základní pojmy. Fermentace alkoholu, účinek pasteur, homofermentační mléčné fermentace, heterofermentační fermentace mléčné kyseliny.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do fermentace alkoholu, provést výkres. 50 ml 20% roztoku sacharózy se vlije do baňky pro 250 mers a asi 1 g kvasinek, rozvedené v 10 ml roztoků sacharózy (20%). Uzavřete a udržujte teplotu asi 35-40 ° C po dobu několika dní.

Mikroskopický.Většina typů kulturních kvasnic používaných v praxi patří rodiněSaccharomyces (Saccharomices Cerevisiae, \\ t obr. № 1, 2 aplikace) aSchizosaccharomyces. Tyto kvasnice se liší od divoké na tom, že jsou schopni odolat velkým koncentracím cukru (až 70%) a alkohol (do 14%), se vyvíjejí při pH 4-6, tvoří méně spotřeby fermentace.

Úkol číslo 2. Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do fermentace kyseliny mléčné, proveďte kresbu.Chcete-li seznámit se s bakteriemi fermentace kyseliny mléčné (homofermentální fermentace), můžete použít připravené produkty velikosti mléka (yoke, acidofilní, kefír) a solanka (heterofermentační fermentace). Tyto výrobky se aplikují se smyčkou na snímku a vytvářejí tenké stěr. Obarvené pro 3-5 min vodný roztok methylenové modře.

Mikroskopický.V produktech kyseliny mléčné, následující patogeny homoferace fermentace jsou nejběžnější -Streptococcus lactis. .Lactobacillus Bulgaricus. (Obr. Č. 9 přílohy) je velká tyčka (4-5 μm dlouhá), pevná, gram-pozitivní, je umístěna ve formě jednotlivých buněk a krátkých řetězců, optimální teplotě vývoje 40-45 ° C ;Lactobacillus acidofilus - morfologie je blízká bulharštině, ale má další teplotu optimální vývoj - 37 ° C.

Mezi patogeny heteroferenční fermentace jsou běžnéLactobacillus brevis, lactobacillus brassicae, leuconostoc mesenteroides et al. (mikroflóra solanka). Bílý nebo smetanový sametový vrásčitý film na povrchu solanky nebo na kefir mluví o přítomnostiGeotrichum candidum ( Oidium lactis.) (Obr. 9 přílohy) je mléčná forma, která vždy doprovází k fermentaci kyseliny mléčné.

Číslo úlohy 3.Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do konverze alkoholu do kyseliny octové, provést výkres.Kuželové baňky nalil tenkou vrstvu piva (0,5-1,0 cm). Baňky jsou uzavřeny bavlněnými zátky a vloženy do termostatu při teplotě 30 ° C. Po 5-7 dnech se povaha filmů tvořilo, mikroskopické malované tahy popisují.

Mikroskopický. Bakterie kyseliny octové jsou kombinovány do roduAcetobacter.typický pohledAcetobacter Aceti. (Obr. Č. 9 přílohy) je reprezentován slabě pohybujícími se lepkavými eliptickými buňkami o šířce 0,6 až 0,8 s délkou 1,0-3,0 um, jednoduché, ve dvojicích nebo řetězcích. Často tvoří involuční formy ve formě nafouknutých, rozvětvených nebo vláknitých formací. Bakterie kyseliny octové jsou snadno zvýrazněny od piva.

Úkol číslo 4.Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do fermentace molicové kyseliny. Surové brambory jsou nakrájeny na plátky, naplněné zkumavkou na 1/3 objemu, přidejte špetku křídou a naplněn vodou na okraj. Zkumavky na vodní lázni na teplotu 80 ° C po dobu 10-15 minut. Pak jsou trubky uzavřeny zástrčky a přenosem na termostat s teplotou 25 ° C0 C. Po 2-3 dnech v kapalině se detekují bakterie fermentace molicové kyseliny.

Mikroskopický.Detekované fixní přípravkyCl. Rasteurianum, Cl. Butirum. (Obr. Č. 1, 10 přílohy) - mobilní tyčinky se zaoblenými konci, jednoduché a parní místnosti. Ve starých kulturách, jeden z konců buněk detekuje spor.

Otázky řízení

Fermentace alkoholu.

Droždí. Forma, struktura, reprodukce a klasifikace.

Oxifikace ethylalkoholu v kyselině octové.

Chemie a příčinná činidla laktové fermentace (domácí typ).

Chemie a příčinná činidla laktové fermentace (heteropherimentální typ).

Musticová kyselinaa acetobutyl fermentace.

Fermentace molicové kyseliny pektinových látek.

Anaerobní vlákno rozklad.

Oxidace vláken mikroorganismů.

Vyplňte tabulku č. 9 "Charakteristika fermentačních procesů".

Tabulka číslo 9. Charakteristika procesů konverzí uhlíku (fermentace a oxidace sloučenin dusíku)

Otázky pro samostudium

Metody výživy a příjem živin.

Potravinářské potřeby mikroorganismů.

Typy potravinářských mikroorganismů.

Metabolismus mikroorganismů. Fermentace, dýchání, fotosyntéza.

Lekce číslo 11.

Transformace mikroorganismy sloučenin uhlíku

Účel: Studovat zvláštnosti různých typů fermentace a morfologie jejich patogenů.

Úkoly:

Prozkoumejte fermentační mechanismus pektinových látek a morfologii jeho patogenů.

Studovat zvláštnosti přeměny celulózy v aerobních podmínkách a morfologii jeho patogenů.

Prozkoumejte vlastnosti fermentace celulózy v anaerobních podmínkách a morfologii jeho patogenů.

Materiály a vybavení. Akumulační kultury mikroorganismů, které provádějí fermentaci pektinových látek, rozklad vláken, mikroskopy, zařízení pro barvení drog.

Základní pojmy. Fermentace molicové kyseliny, pektin, pektináza, celulóza, celulóza.

Pokrok

Číslo úkolu 1.Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do fermentace pektinových látek, provést výkres. Pro izolaci pektinukleárních bakterií se použije lněné nebo velkolepé živné médium. Z stonků připraví sada s délkou 5-7 cm, umístěných do zkumavek, nalil vodou z vodovodu a vařila 10-15 minut. Extrakční látky, které mohou sloužit jako zdroj uhlíku pro souběžné molychové kyseliny bakterie, byly odstraněny. Voda se nalije, kameny se nalije novou částí vody, trubky jsou těsně uzavřeny bavlněnými zátky a sterilizují v autoklávu při 1 atm 20 minutách. Když jsou zkušební trubice ochlazeny, médium je infikováno kusem čerstvé lněné slámy. Infikované trubky jsou umístěny v termostatu při teplotě 35 ° C. Po 3-5 dnech začíná proces fermentace pektinu, kapalina je zamumpálena a pění.

Mikroskopický.S cílem studovat morfologii bakterií fermentace pektinu připravit na životnost. Tenisky jsou odstraněny z trubky, zatlačte kapalinu pokles na skleněné sklo, připravit pevné a životní přípravky (v roztoku Lugol). Buňky jsou viditelné na přípravěClostridium pectinovorum. aClostridium felsineum., vegetativní a rozjímavý, malovaný jodem na granuinu v tmavě modré barvě (obr. Č. 9 aplikace).

Úkol číslo 2.Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do rozkladu vláken (anaerobních podmínek), udělejte výkres.Pro získání akumulativní kultury anaerobních foremcelulosentní bakteriepoužijte Imchenhetsky středa. V Asi 1-2 g filtračního papíru nebo bavlny, kulatá baňka s plochým dnem a nalil potřebu příštího kompozice k médiu (v g / l): knh4 Hpo.4 - 1.0; Kn.2 Ro.4 - 0,5; NA2 NRA.4 - 0,5; CAC12 - 0,03; Pepton - 5; MgSO.4 - 0,4; Sacoo.3 - 2.0; NaCl - 0,5; Mnso.4 a feso.4 stopy;pH média 7.0-7.4. Médium je infikováno malým množstvím půdy, zavřete baňku s kortikálním korkem s otvorem pro uvolňování plynů a vložte do termostatu při 30-35 ° C. Volitelné podmínky v tomto případě jsou určeny přítomností celulózy - zdrojem uhlíku, který může být konzumován pouze specifickými celulózovacími bakteriemi, které mají enzym celulázu, stejně jako anaerobní podmínky. Pepton, zavedený ve středu v malém množství, silně stimuluje proces fermentace. Po 7-10 dnech začíná fermentace celulózy, která trvá 2-3 týdny. Filtrační papír, jak fermentovaný je mírně kondenzovaný, žloutnutí a postupně se zhroutil.

Mikroskopický. Mikroskopie kus papíru. V anaerobních podmínkách se proces rozkladu vlákna provádí bakterie roduClostridium.. Cl. Omelianskii. (Obr. Č. 9 přílohy) má formu dlouhých řádných buněk do 8 μm, ve starých kulturách přibližně 10-15 μm, jsou umístěny jednotlivě nebo připojené k nitě. Spóra sférická, tvoří na konci buňky, buňka bere tvar bubnu. Vydává se z půdy a vody. Optimální růstová teplota 30-35 ° C.

Číslo úlohy 3.Prozkoumejte mikroorganismy zapojené do rozkladu vláken (aerobních podmínek), provést výkres.Pro izolaci aerobních buněčných šířících se bakterií se použije krmné médium HePinson. Složení média (g / l):2 NRA.4 - 1.0; NaCl - 0,1; Sasl.2 - 0,1; Flecl.3 - 0,01; MgSO.4 - 0,3; Nano.3 - 2.5; PH média 7.2-7.3. Sterilní živné médium se nalije do kuželových baňek s vrstvou 1,5-2,0 cm, médium je infikováno kusem půdy a sázkový filtr s kuželem se sníží na povrch média. Baňky jsou uzavřeny vatovým tampónem a umístěny v termostatu při teplotě 25-30 ° C po dobu 10-14 dnů. Na hranici živného média a vzduchu jsou vytvořeny optimální dietní podmínky a aerobní dýchání buněčných reklamních bakterií. V této zóně je nejintenzivněji proces zničení filtračního papíru. Po 8-10 dnech se na filtru objevují žlutá oranžová skvrna kolonií buněčných šířících bakterií. Papír se rozkládá a filtr se postupně usadí na dně.

Mikroskopický. Z zničených hmot vlákny v mikrobiologické smyčce baňky se připraví stěrka v kapce kapaliny. Nejčastěji na léku zjištěných zástupců objednávekFlosacteriales. aCytofagales. Skupiny posuvných bakterií (obr. Č. 10 aplikace).HodnostCytofága. Je reprezentován dlouhými halogenovými buňkami s špičatými konci, několik zakřivených (2-10 μm). Kolonie žluté, oranžové, hnědé, hladké, sliznice.

HodnostSellvibrlo. Je reprezentován malými, mírně zakřivenými pohyblivými tyčinkami (2-4 mikrony). Kolonie jsou skryté sliznice. VálecCelfalcula. Má formu krátkých tlustých zakřivených tyčinek s špičatými konci (2,0 x 0,7 mikronů).

HodnostSoragium. V mladé kultuře je forma hustých mírně zakřivených lepkavých buněk se zaoblenými konci (2-5 mikrony). Ve stárnutí kultury se tvoří ovocná těla, sestávající z mikrokysturu. Chopkidoidní buňky jsou zkráceny, pokryté hustou skořápkou, zakoupením špatných obrysů. Kolonie jasně oranžové, fialové barvy.

HodnostPolyangium. To je reprezentováno téměř rovnými hlodavým buňkami se zaoblenými konci (3,5-8 mikrony). Ve stárnutí jsou tvořeny oválné mikrofony, které jsou spojeny a ovocná tělesa tvaru hrušky. Ovocné těleso žluté, oranžové barvy, sedět přímo na substrátu.

Kromě bakterií se houby formy podílejí na aerobní destrukci vlákna.Aspergillus, penicillium, fusarium, Cladosporium, trichoderma A některé aktinomycety.

Zkontrolujte otázky viz Lekce č. 10.

Lekce číslo 12.

Ekologie mikroorganismů

Účel: Zkontrolujte vliv faktorů prostředí na růst a vývoj mikroorganismů.

Základní pojmy.BondNate Psychrofils, psychrotrofní mikroorganismy (volitelné psychrofily), termofily, inspektivní mikroorganismy, halobily, lyofilizace, lepené aeroby a anaeroby, mikroerofilie, aeroto-oreaeroby, antiseptika.

Otázky řízení

Vliv teploty na růst a vývoj mikroorganismů. Environmentální skupiny bakterií ve vztahu k teplotě.

Vliv vlhkosti na růst a vývoj mikroorganismů.

Vliv světla a různých záření na růst a vývoj mikroorganismů. Efekt magnetického pole.

Vliv koncentrace kyslíku na růst a vývoj mikroorganismů.

Účinek reakce médiao růstu a vývoji mikroorganismů. Sloučeniny a ionty toxické pro bakterie.

Adaptivní reakce mikroorganismů.

Lekce číslo 13.

Stanovení citlivosti bakterií na antibiotika

Účel: Pro stanovení citlivosti mikroorganismů na antibiotika.

Úkoly:

1. Určení citlivosti mikroorganismů na antibiotika difúzí v agaru pomocí papírových disků

Materiály a vybavení.Petriho misky s MPA, sterilní kotouče navlhčené antibiotikovými roztoky, čistými kulturami bakterií saprofitních a plísní houby, pipety, alkohol, špachtle.

Základní pojmy.Antibiotika, bakteriostatické a baktericidní účinky, R-faktory, odpor.

Pokrok

Číslo úkolu 1. Určení citlivosti mikroorganismů na antibiotika difúzí v agaru pomocí papírových disků.

Disco-difuzní metoda pro stanovení citlivosti mikroorganismů na antibiotika je založena na registraci průměru růstové zóny kolem papírového disku s antibiotikem. Na povrchu nutričního agaru v Petriho miskách chůze se zkušebními mikroby, papírová kola impregnovaná antibiotikami a Šálky se inkubují při 37 ° C. Dostupnost Microbiálního růstu zpoždění růstudisky ukazují citlivost patogenu na léčivo, absence zóny pro zpoždění výšky na stabilitě.

Průběh definice. Kultura mikroorganismů se aplikuje na sterilní Petriho misky s MPA. Denní bullonová kultura se používá jako výsevný materiál - na povrch MPA se aplikuje 0,2 ml bakteriální suspenze a je rovnoměrně rozložena třepáním šálku s následným odsáváním přebytečné kapalné pipety.

Šálky se suší po dobu 30-40 minut při teplotě místnosti. Pak se povrchy impregnované různými antibiotiky platí pro povrch naočkovaných média s pinzetami. Disky jsou pevně aplikovány na povrch pro blízký kontakt s médiem. Disky jsou umístěny ve stejné vzdálenosti od sebe a asi 2 cm od okraje šálku. Poháry vložené do termostatu se otočily vzhůru nohama spodku nebo dal pod kryt kohoutku kružnice filtračního papíru, aby se zabránilo rozmazání trávníku kondenzační vodou a inkubovány při teplotě 37 ° C po dobu 18 hodin.

Posouzení výsledků.Pomocí pravítka se průměr mikrobiálního růstu zpoždění růstu stane kolem disků, včetně průměru samotného kotouče. Jednotlivé kolonie nebo tenký film růstový film uvnitř zpoždění růstu se neberou v úvahu. Absence zón růstu mikrobů zón kolem disků označuje nedostatek mikrobiální citlivosti na tuto antibiotikum. S mikrobem růstovým zpožděním zóny o průměru až 10 mm je kmen považován za malou citlivou. Zboží prodlení Microbe o více než 10 mm indikuje citlivost kmene. Čím větší je zóna zpoždění růstu, tím vyšší je citlivost mikroorganismů k antibiotikum. Výsledky platit pro tabulku číslo 10.

Tabulka číslo 10. Citlivost mikroorganismů k antibiotikám.

Antibiotické vlastnosti streptomycinu. Antibiotické vlastnosti penicilinu. Lekce číslo 14. Základy lékařské mikrobiologie Účel: Prozkoumejte mikroorganismy - patogeny zvířat a lidí. Literatura Lebedeva m.n. Mikrobiologie. - M.: "Medicine", 1969. Základy mikrobiologie, virologie a imunologie / pod. Editorial Board Vorobiev A.a., Krivoshein Yu.S. - M.: Mastery, 2001. Problémy pro diskusi Charakteristika patogenních kokobů na příkladu stafylokokje. Zánětlivé choroby. Septikémie. Charakteristika patogenních kokobů na příklad streptokoky. Lokalizované hnisavé zánětlivé infekce, tonzilitida, šarlatin. Charakteristika patogenních kokkquitů na příkladu pneumokoku. Zápal plic. Charakteristika patogenních kokobů na příkladu meningoccusu. Meningitida. Charakteristika patogenních kokobů na příklad gonokoku. Gonorrhea, Blenorreya. Charakteristika gram-negativních non-relativních bakterií na příkladu plagánové tyčinky. Mor. Charakteristika gram-negativních non-relativních bakterií na příkladu tyčových tyčinek. Tulara'yia. Charakteristika gram-negativních non-relativních bakterií na příkladu Brucell. Brucelóza. Rodina střevních bakterií na příkladu střevní tyčinky. Charakteristika skupiny typhowoidních a paratyphoundic bakterií. Abdominal typhowoid \u200b\u200ba paratif. Kauzativní činidla potravinářské toxickofekce. Salmonelóza. Charakteristika patogenů dysenterie. Typy dyzenterie. Charakterizace cholery vibrovaných. Struktura kapslí bakterií na příkladu Klebsiell. Charakterizace Bacill sibiřské vředy. Formy sibiřských vředů. Charakteristika hemofilních bakterií na příkladu hůlky proti kašli. Patogenní anaeros na příkladu patogenů plynu gangrény. Patogenní anaeros na příkladu tetanus tyčinky. Patogenní anaeros na příkladu patogenů botulismu. Charakteristika distanční tyčinky. Charakteristika bakterií odolných vůči kyselinám na příkladu tyčinek tuberkulózy a tyčinek leprosy. Charakteristika patogenních hub na příklad Actinomycetes. Dermatomikózy. Charakteristika patogenních spirochetů na příkladu bledého treponamu. Syfilis. Charakteristika patogenního spirochete na příklad návratového titru Spirochetes.Tato příručka stručně shrnuje teoretické základy sanitární mikrobiologie, stejně jako některé experimenty spojené s definicí různých ukazatelů vzduchové mikroflóry, vody a půdy. Různé se skládá ze dvou sekcí - obecně sklizených lékařských mikrobiologie a klinické mikrobiologie. V první části jsou hlavními metodami mikrobiologického výzkumu, metody specifické terapie a prevence infekčních onemocnění, ve druhé - metody jejich labo ... 1.32 MB. přidáno 11.06.2011. Tutorial. Cemeta. - Kemerovo, 114 p. Předmět a úkoly mikrobiologie. Hlavní vlastnosti mikroorganismů Historická esej vývoje mikrobiologie. Vyhlídky pro rozvoj a dosažení moderní mikrobiologie v národním hospodářství, potravinářský průmysl. Principy systematiky. Strukturální organizace mikroorganis ...

Pokyny

provádět praktickou práci

pro profesi:

19.01.17 Kuchař. Cukrář

Vývojář:

Veretenniková Om. učitel

Valuyki, 2016.

Vysvětlivka

Skutečné pokyny pro provádění praktické práce na disciplíně "základy mikrobiologie, sanitace a hygieny v produkci potravin »Byly vyvinuty na základě federálního státního vzdělávacího standardu (dále jen" GEF) podle povolání: \\ t

01/19/17 Cook. Cukrář

Metodické pokyny Pro praktickou práci jsou určeny pro studenty prvního ročníkuProvádění praktických a laboratorních prací je zaměřeno na řešení následujícíhoÚkoly:

zvýšit povědomí a sílu učení znalostí;

rozvíjet schopnost analyzovat, porovnat studované objekty, provádět výzkum, provádět tabulky, schémata, klastry, vyvodit závěry;

rozvíjet studenty logické myšlení, informativní schopnosti, nezávislost;

naučte využívání znalostí a dovedností v životě.

Při studiu, upevnění materiálu používá následující typy nezávislá práce:

Práce s textem učebnice.

Pracovat s prezentací.

Pracovat se studovaným předmětem.

Práce s tabulkou.

Práce na kompilaci klastru, schémat.

Práce s hotovými mikrocretami. Příprava mikro-přípravků.

Struktura pokynů:

1. Téma
2. Účel práce
3. Zařízení pro práci
4. Řízení
5. Kontrola a aktualizace znalostí studentů potřebných k výkonu práce
6. Podmínky výkonu

Každá praktická a laboratorní práce by měla být zarámována v notebookech pro praktickou práci v souladu s doporučeními.. (Příloha 1)

Sledování výsledků dokončené práce se provádí na základě písemné zprávy a výsledků pozorování studentů v průběhu práce v souladu skritéria pro odhady pro realizaci praktická práce.

Seznam praktická práce

Praktické práce číslo 1

Mikroskop zařízení a pravidla pro práci s ním.

Praktická práce # 2 Studium pod mikroskopem morfologie kvasinek a plísní

Praktické práce číslo 3 Schémata struktury bakterií buněk, kvasinek, houby.

Praktické práce číslo 4-5

Praktické práce číslo 6Schémata přípravy dezinfekčních řešení a jejich skladování

Praktický úkolvědecké dovednosti aplikovat teoretické znalosti podle disciplíny v praxi

Praktické práce číslo 1 Mikroskop zařízení a pravidla pro práci s ním.

Účel práce: Prozkoumejte zařízení světelného biologického mikroskopu a zvládněte pravidla pro práci s ním.

Zařízení, materiály: Mikroskop; Připravené mikrocrety

Mikroskop (od řečtiny.micros. - malý I.scopio. - Sleduji) je optické zařízení sestávající ze tří hlavních částí: mechanické, optické a osvětlení.

Schéma světelného biologického mikroskopu je prezentován na OBR. jeden.

Mechanická část nebo stativ se skládá z nohou, bází, držáku trubky, podstatného stolu, monokulární trysky (trubice), revolvovacího zařízení, hrubého zaostřování (macrometr šroub) rukojeti, tenkým zaostřováním (mikrometrické šroubové) rukojeti.

Tubus - vizuální trubka mikroskopu. V horním otvoru trubice volně vložil okulár, na spodním konci trubky je otáčivým zařízením (revolver), který je přišroubován do spodního konce jeho osy. Otáčení revolveru, můžete rychle změnit čočky při práci s mikroskopem, jakýkoliv čočka pro trubku. Čočka musí být zaměřena, tj. Na optické ose mikroskopu. Za tímto účelem se revolver otočí kolem své osy až do kliknutí.

Předmětová tabulka slouží k tomu, aby vyhovovala studiu ve studii léčiva. Lék je upevněn na stole se svorkami (svorky). Ve středu předmětu je díra pro průchod světla a osvětlení léčiva. V některých konstrukcích mikroskopu se předmět předmětu může pohybovat se šrouby umístěnými podél obvodu předmětu tabulky. To umožňuje zvážit lék v různých oblastech vidění.

1 – okulár

2 – monokulární tryska

(Tubus)

3 - otočné zařízení

4 - objektiv

5 - Předmět tabulka

6 - kondenzovat

7 - čočky sběratelů

8 - patron s lampou

9 - závěs

10 - rukojeť pohybu kondenzačního držáku

11 - tenké zaostřovací manipulace (mikrometrický šroub)

12 - Hrubý zaostřovací manipulace (makrometrický šroub)

13 - Držák trubek

14 - Šroub pro připevnění trysek

Obr. jedenSchéma zařízení světelného biologického mikroskopu

Úchyty hrubého a jemného zaostření (makro- a mikrovinty) se používají k pohybu trubky nahoru a dolů, což vám umožní nastavit na požadovanou vzdálenost od léku. Při otáčení šroubů ve směru hodinových ručiček se trubka spustí a při otáčení proti směru hodinových ručiček se stoupá. Když se otáčí šroub macrometr, objektiv je přibližně instalován na zaostřování, tj. V této vzdálenosti od léku, při které se provádí viditelná. Obratování makrolint umožňuje pohybovat trubku o 20 mm. Mikrometrický šroub slouží k tomu, aby přesně instalovala zaostření. Plné zatáčky se pohybuje trubkou o 0,1 mm. S mikrokompute, měli byste kontaktovat velmi opatrně: Rotace mikrovintu není více než 180 0 Jedním, nebo druhým způsobem.

Optická část je to nejcennější část mikroskopu. Skládá se z čoček a okuláru.

Polovina (od lat.oculus. - Eye) se skládá ze dvou plochých čoček uzavřených ve společném kovovém rámu. Horní čočka - oko (rostoucí), nižší sběr. Vzdálenost mezi čočkami se rovná polovině ohniskové vzdálenosti jejich ohniskové délky. Při okulárech s velkým zvětšením je zaměření kratší, tak menší a délka okuláru. Mezi čočkami je membrána, která omezuje zorné pole a zpožďuje okrajové paprsky světla. Domácí mikroskopy jsou vybaveny třemi vyměnitelnými okuláry, zvýšení, ve kterém je uvedeno na pouzdře okuláru (X7; X10; X15).

Čočky jsou přišroubovány do zvedáků revolvingového zařízení a sestávají ze systému čoček uzavřených v kovovém rámu. Přední (frontální) objektiv čočky je nejmenší a jediná, která dává nárůst. Zbývající objektivy v objektivu opravují pouze nedostatky výsledného obrazu (jevy sférické a chromatické aberace) a jsou nazývány korekční.

V turbínových zvedákech jsou zašroubovány čtyři čočky, což je zvýšení, ve kterém je indikováno na pouzdrném čočku (X8; X20; X40; X90 nebo 100). Každá čočka je charakterizována jeho ohniskovou vzdáleností (vzdálenost mezi velikostí skla a přední čočky): Objektiv X8 má ohniskovou vzdálenost asi 9 mm, čočky X40 - 0,65 mm, čočky X90 - 0,15 mm.

Osvětlení mikroskop sestává z dvojitý kondenzátor, iris-membránu a nízkonapěťové žárovky, přiváděné přes snižovací transformátor z napěťové sítě 120 ... 220 V.

Kondenzátor slouží k lepšímu osvětlení léku. Sbírá světelné paprsky do svazku a řídí je skrze díru předmětu předmětu pro léku. Použití rukojeti pro pohyb kondenzačního držáku, může být přesunuta nahoru a dolů, protože se změní úhel konvergence paprsků, a proto se mění stupeň osvětlení objektu. Čím vyšší je poloha kondenzátoru, tím lépe svítí lék.

Iris-membrána je umístěna pod kondenzovaným a slouží k nastavení světelného toku vstupujícího do kondenzátoru. Skládá se z kovových srncových desek. Otvor membrány můžete rozšířit nebo zúžit pomocí speciální páky. Při otáčení ve směru hodinových ručiček se otvor iris-membrány zvyšuje, a proto se stupeň osvětlení objektu zvyšuje.

Při práci s ponornými čočkami musí být stupeň osvětlení léčiva maximum, a proto je opona iris-membrány otevřená a kondenzátor se zvedne do extrémní horní polohy.

Při práci se suchými čočkami, zpravidla zkoumat objektové objekty. Pro dosažení kontrastu je kondenzátor snížen dolů a otvor diafragmu duhovky se sníží.

Podmínky práce s mikroskopem

Na ploše, mikroskop dal trubku do vzdálenosti 3 ... 5 cm od okraje stolu;

Zahrnout mikroskop do sítě a nastavte správné osvětlení

Studovaný lék je umístěn na předmětu a zajistěte jej svorkami;

Potřebná čočka je umístěna pod trubkou a pomocí makro a mikrovinů nainstalují ohniskovou vzdálenost. Při práci s ponornými čočkami je tedy lék předem aplikován pokles ponorného oleje a opatrně snižte držák trubky na makrovinku kontakt se sklem. Pak opatrně při pohledu do okuláru velmi pomalu zvedněte trubku, otáčejí ho proti směru hodinových ručiček, dokud není obraz vidět. Přesné pokládání objektivu na zaostření je vyrobeno mikrometrickým šroubem. Při práci se suchými čočkami je lék poprvé zvažován s objektivem X8. Zvyšování s makrolintem Držák trubice a opatrně při pohledu do okuláru, nastavte ohniskovou vzdálenost (asi 9 mm) a dosáhněte definování obrazu pomocí mikrometrického šroubu. Dále, přesunutí předmětu tabulky nebo skla předmětu, nainstalujte oblast léčiva ve středu pole, která je lépe viditelná pro studovaný objekt. Potom otočení otáčivého zařízení kolem její osy je objektiv na X20 nebo X40 umístěna pod trubkou. Ve stejné době, pod trubkou by nemělo dostat objektiv X90. V revolvingovém zařízení jsou čočky uspořádány tak, že pokud je nalezen obraz s objektivem X8, pak při zvažování léčiva s většími čočkami zoomu je nutné mírně nastavit jasnost obrazu pomocí makro a mikrometrových šroubů ;

Během mikroskopie musíte udržet obě oči otevřené a používat je střídavě;

Po skončení práce byste měli odstranit lék z předmětu, vynechat kondenzátor, umístit objektiv X8 pod trubkou, odstraňte měkký hadřík nebo měřidla navlhčené v alkoholu, ponorný olej z přední čočky čočky X90, Chcete-li dát objektiv gázy, vynechejte trubku.

Jaké je zařízení biologického mikroskopu?

Jaké části a mechanismy jsou mechanická část mikroskopu?

Jaký je systém optického mikroskopu?

Co je součástí systému osvětlení mikroskopu?

Jak nastavit systém osvětlení při práci s ponorným objektivem?

Seznam základních pravidel pro práci s mikroskopem.

Dodržování úkolů
1. Place (čas) provedení úkolů
Biologická třída

Praktické práce číslo 2. Studium pod mikroskopem morfologie kvasinek a plísní.

Účel práce : Seznámit se s morfologickými rysy hub a kvasinek, nalezených ve výrobě potravin. Zvládnutí techniky mikroskopického výzkumu hub a kvasinek v drcených kapkách.

Zařízení, materiály: Mikroskop; Přípravkové jehly, předměty a povlakové brýle; filtrační papír; alkohol; Kultura houby narozeníMucor., Aspergillus., Plísně Penicillium., Alternaria.; Čistá kultura kvasinekSaccharomyces.cerevisiae..

1. Stručná teoretická ustanovení

1. 1. Morfologie a kultura známky mikroskopických hub

Vegetativní těleso houby se nazývámycelium . Mycelium se skládá z množství propletených pramenových trubek, zvanýchgifami. . Průměr hyphye se liší od 5 do 50 mikronů. V závislosti na budově jsou houby mycelia rozděleny do vyšší a nižší. Nejvyšší gif houby je oddělena oddíly (septs) ve středu, z nichž je velký čas. Vyrůstají a vyskytují se základní divize, ale nedochází k žádnému rozdělení buněk. Vegetativní tělo houby je tedy jedna velká multi-klec. Všechny mikroskopické houby mohou chovat vegatativně kus mycelia.

V nohách reprodukce jsou tvořeny ficomyzetysporangiennostsie. a AskoDoomycetes -konidiyosians. .

Kulturní známky mikroskopických hub

Kolonie mikroskopických hub ve velikosti je mnohonásobně lepší než kolonie jedno buněčných organismů (bakterie, houby) a často vyrůstají po celém povrchu živinového média v Petriho miskách. Konzistence houbových kolonií je odlišná. Jsou tvořeny furo-tvarované a kožovité kolonie, méně často nýtované. Povrch kolonií může být načechraný, jako bavlna, sametová, prášková, tvarovaná, závitová, kožená nebo hladká. Při pěstování na husté a kapalné prostředí, část GIF sklizených v živném médiu, tvořící sepodklad mycelium a druhá část gifů foremvzduch mycelium ve formě načechraného plaku zřejmě s pouhým okem. Mycelium může být také bezbarvý (bílý, šedavý) nebo lakovaný (černá, hnědá, zelená, žlutá atd.). Pigmentovaný pouze plodný mycelium.

Charakteristika mikroskopických hub různých tříd

Morfologické rysy houby různých tříd jsou prezentovány na Obr. Pět.

HodnostMucor. . Mohou být vynásobeny nehmotným a sexuálně formováním sporangiens (obr. 5). Venku jsou sporangie pokryty tenkými hroty z krystalů vápníku. Při zrání se sporangie rozbití, sporanová ramena jsou uvolněna a otevřena proudem vzduchu. Na sporangiena po uvolnění sporangium z sporu zůstává sloupec a ve své spodní části - límec. Barva mycelia mukorových hub je první bílá, pak šedavě olivový, pohled - cítil se.

ale

b.

v

g.

Obr. PětMorfologické rysy houby různých tříd:

ale - Mucor; b. - Plísně Penicillium; v - Aspergillus; g. - Alternaria.

Mukorovaya houby rostou na povrchu mokrého zrna, sladu, rooteploods, na potravinářských výrobcích, na stěnách surových místností ve formě šedého načechraného podlahy.Mucor.nigricans. Jedná se o příčinné činidlo kagatanu cukrové řepy. Mnoho hub MUKOROVAYA se používá v průmyslu pro výrobu různých organických kyselin a alkoholů (druhové houbyMucor.javanicus., Mucor.racemosus.), Enzymové přípravky, karotenoidy, steroidy.

Zástupci poroduAspergillus. a Plísně Penicillium. Odkaz na třídu Ascomettes, která kombinuje nejvyšší mikroskopické dokonalé houby. S velkou reprodukcí s pomocí sporu se tyto houby tvoří konidionosu (obr. 5). Aspergillas a penicillas patří k ovocným houbám. To znamená, že při sexuální reprodukci jsou tvořeny ve speciálních ovocných orgánech (tašky), ve kterých je 8 ascosporů.

Na lanoPlísně Penicillium. aplikuje přibližně polovinu všech plísní formy. Jsou rozšířené v půdě ve vzduchu špatně větraných prostor a způsobují poškození různých produktů a materiálů. Tato houba má větvený septický mycelium (průměr GIF - 2 ... 3 μm) a septické konidiony (podobné kartáče), které jsou v úzkém rozvětveném ve formě procesů - sterigy. Conididas, skládající se z sporných řetězů odjíždějí od nich. V závislosti na typu Conidia může být různá barva (Bílá, zelená atd.). Mnoho penicilas se používá v průmyslu k získání různých cenných výrobků. Mezi přidělenými kmeny tohoto druhu má 25% antibiotickou aktivitu a takové druhy jakoPlísně Penicillium.notatum., Plísně Penicillium.chrysogenum. Jako výrobci penicilinu. Některé typy penicillos se používají jako výrobce enzymů a lipidů. Při výrobě měkkých sýrů Roquefort a Camembert používá vznešenou formuPlísně Penicillium.roqueforti. aPlísně Penicillium.camamberti..

Houby rodaAspergillus. existuje více než 200 druhů. Tyto houby mají dobře vyvinuté větvení mycelia s mnoha Septa. Conidientosians jsou nezázdáváni, horní konce hrušky a ostře se expandují ve formě malé hlavy. Na hlavě jsou kumulativní sterigy s řetězci konidu, které se podobají vodnímu hřebenům, nalil z konev. Odtud došlo k názvu "I formy" (aspergere. V latině - vodě, sprej). Conidia Aspergillov, při zrání, získává jinou barvu, která spolu s jinými známkami určuje jejich druhovou příslušnost.

Stejně jako penicillas, zástupci druhuAspergillus. Široce distribuován v přírodě a hrát důležitou roli v mineralizaci organických látek. Způsobují tvarování mnoha potravinářských výrobků. Tyto houby jsou produkovány mnoha hodnotnými látkami a jsou široce používány v průmyslu. Tak,Aspergillus.niger.v průmyslu pro produkci kyseliny citrónové;Aspergillus.terreus. - kyselina itakonováAspergillus.flavus. aAspergillus.terikola. tvoří nejaktivnější komplex proteolytických enzymů;Aspergillus.oryzae. aAspergillus.awori. jsou nejlepšími výrobci amylolytických enzymů.

Houby rodaAlternaria. Odkazují na třídu nedokonalých hub - deuteromycetes. To jsou nejvyšší houby. Mají septický mycelium a krátké non-adhezivní konidla, které obsahují mnohobuněné kondes hruškové nebo lymonické formy (obr. 5). Houba je příčinná činidlo černé hniloby - onemocnění kořenů a ovoce, jakož i kauzativní činidlo poškození potravinářských výrobků.

Morfologie kvasinek a jejich charakteristiky

Droždí - Jedná se o nejjednodušší houby. Většina kvasinek se vztahuje na dvě třídy hub - ascomycets a deuteromycetam.

Kvasinky ve vztahu k kyslíku se rozdělí do volitelných anaeros (v aerobních podmínkách, dýchání se provádí a aktivně nahromaděná biomasa a v anaerobních podmínkách způsobují fermentaci alkoholu) a aerobí.

Morfologicky kvasinky je rozmanité. Oni se liší od sebe s rozměry a formou buněk. Velikosti kvasinkových buněk závisí v následujících mezích; Od 2,5 do 10 mikronů v průměru a od 4 do 20 mikronů v délce. Morfologická řada kvasinkových forem je znázorněno na Obr. 6.

ale

b.

v

g.

d.

e.

j.

z.

Obr. 6.Formy kvasinkových buněk: A - oválný ovčivo;

b - válcové; v apiculant; lymonický; G - Sweatshop;

d - trojúhelníkový; e - srp; Dobře - flaskoidní; s, a - micepical

Tvar a rozměry kvasinkových buněk závisí na druhu, věku, živin, médiu, způsobu pěstování.

V závislosti na typu kvasinek může pěstovat vegetativně pro násobení tím, že zabíjením (kvasinky oválného tvaru), binární divize (charakteristika kvasinkového válcového nebo válcování) nebo divize klíště. Kromě vegetativní reprodukce mohou být droždí - ascomycetes rozděleny podle pohlaví s tvorbou Askospor.

Od kvasinek souvisejících s třídou ascomettes, kvasinky-sugaromycetes rodu má velký významSaccharomyces. že v potravinářském průmyslu. Hlavním biochemickým znakem těchto kvasin je, že fermentují cukry za vzniku ethylalkoholu a oxidu uhličitého. Kvasinky používané v průmyslu se nazývajíkulturní kvasnice. Tak, v pekárně a při výrobě alkoholu, kůň je používán při výroběSaccharomyces.cerevisiae.. Druhy kvasinekSaccharomyces.méně důležitý Zjistili jsme použití ve výrobě žitného chleba a kvass. Pivovar používá nižší kvasinkySaccharomyces.carlsbergensis.. Kvasinkové-Sugaromycetes mají oválný tvar, vegetrativně násobitelný za zabití, v nepříznivých podmínkách násobit sexuální Asspoda.

Některé spory droždí jsoudivoký droždí . Tyto kvasnice jsou stejně jako pěstované, schopné fermentace alkoholu, ale kromě alkoholu tvoří mnoho vedlejších produktů (jako jsou aldehydy, vyšší alkoholy, ethery atd.), A proto zhoršují výkon organoleptického produktu. Tyto kvasnice jsou škůdci produkované různými nápoji (pivo, víno, nealkoholické nápoje), stejně jako patogeny některých potravin.

Kvasinky - Deuteromycetes lze znásobovat vegetativním způsobem. Některé z těchto kvasinek (například kvasinekCandida.) Používá se v průmyslu pro získání krmných proteinů, organických kyselin, vitamínů a jiných mikrobiálních výrobků syntézy. Druhy kvasinekTorulopsis.kefír. Součástí symbiotické start-up - Kefir houba. Ostatní představitelé nedokonalého (hydrodického) kvasinek jsou divokí kvasinky a způsobují poškození mnoha potravin. Odvodňovací škůdci zahrnují člověka kvasinkyPichia., Hansenula., Candida., Rhodotorula,Torula., Torulopsis., Mycoderma., Trichosporon. a další. Mezi kopolivacích droždí jsou nalezenyfalešné kvasnice které tvoří pseudomyely a rostou na tekutých substrátech ve formě filmů.

1. Postup pro provádění práce

Na předmětném skle s trubkou nebo pipetou se aplikuje velká kapka vody;

Vyberte malé množství mycelia ze zkumavky nebo petriho misek, pozorování pravidel Asepta

Mycelium je úhledně umístěno v poklesu aplikovaném na sklíčko a pomocí dvou jehel leží do vody;

Lék je pokryta krytým sklem a lehce přitlačuje. Přebytečná voda se odstraní filtračním papírem.

Mikroskopy lék "drcený pokles" nejprve s objektivem X8, a pak X40 v tmavém zorném poli (kondenzátor je vynechán, je zakryta opona iris-membrány).

Při výběru a mikroskopii drog hub, zohlednit následující doporučení:

a) hub rod Mucor. . Vyberte si Mycelium načechraného vzduchu BlackName-Grey. Během mikroskopie upozorňují na GIF s spóry spór a sloupy, které jsou vytvořeny, když se uvolňují sporangium;

b) Druh rodu Aspergillus. . Vyberte si trochu načechraného mycelia s malovanými konidias, mírně prohloubení jehlu do živného média. Věnujte pozornost nedokončeným konidenům;

c) rod rod Plísně Penicillium. . Když se výběr snaží vzít mladý mycelium (na okraji malovaného a bílého mycelia), prohloubení jehlu ve středu. Věnujte pozornost septickým gifům střapce.

d) hub rod Alternaria. . Vezměte houby v černých místech, prohloubení v jehlicích. Věnujte pozornost septickým myceliem, slabě vyvinutým konidiosám a velkým přesvědčivým faktorem, které mají typ kulatého nebo špičatého mnohobuněných formací připomínajících "citronové granáty".

Při studiu kvasinek Suspenze kvasinek se aplikuje na skleněné sklo, pokryté potahovým sklem, přebytečnou vodou odstranit s filtračním papírem. Mikroskopický lék a čočky X8 a X40.

Registrace a analýza výsledků výzkumu

Stručně abstraktní teoretický materiál. Nakreslí mikroskopické vzorce studovaných kultur hub a kvasinek, s přihlédnutím k morfologickým charakteristikám každého mikroorganismu. Pod každým kresbou znamení latinské jméno a zvýšení léčiva. Popište kulturní vlastnosti studovaných hub.

Reagovat na testovací otázky

Jak jsou mikroskopické houby a kvasnice připravují připravit?

Popište morfologické a kulturní vlastnosti mikroskopických hub.

Jaké houby se používají v průmyslu pro výrobu organických kyselin, enzymů, antibh0iotics a dalších cenných výrobků?

Popište morfologické vlastnosti kvasinek.

Co jsou kulturní kvasnice? Ve které potravinářský průmysl používají?

Dodržování úkolů

Biologická třída

2. Maximální doba provedení úkolů: 90 min

Praktické práce Číslo 3: Systémy struktury buněk bakterií, kvasinek, houby.

Účel práce: Prozkoumejte strukturu buňkybakterie, kvasnice, houby

Materiálová podpora: instrukční karty pro praktickou práci, učebnici, tužky

Cvičení 1

Studuje učebnici. Podle výsledků studie:

Nakreslete do notebooku Struktura buněk bakterií, kvasinek a houby a určují výrazné vlastnosti

Odpovězte na otázky:

1. Jaká forma mají bakterie buňky?

2. Jaké jsou velikosti bakterií?

3. Jaká je reprodukce bakterií, rychlost reprodukce?

4. Jakou cestou a v jakých podmínkách je tvorba sporu s bakteriemi?

5. Jsou bakterie k nezávislému pohybu?

Výsledky.

Dodržování úkolů

1. Place (čas) provedení úkolů

Biologická třída

2. Maximální doba provedení úkolů: 90 min

Praktická práce na téma №4 Práce s regulační a technickou dokumentací: Sanpine 2.3.6. 1079-01.

Účel práce: Prozkoumejte hygienické požadavky na zařízení a údržbu stravování

Materiálová podpora: pokyny pro praktickou práci, SANPINE 2.3.6. 1079-01.

Cvičení 1

Studuje učebnici. SANPINE 2.3.6. 1079-01. Podle výsledků studie:

1. Extrahovat fráze: pozemek, kde byla postavena cateringová společnost, by měla být

Výrobní prostory zahrnují:

Skladové prostory jsou navrženy v části ____________________ částí budovy.

Kvalitní pitná voda musí odpovídat

Ventilace se používá pro purifikaci vzduchu

Typ.

Všechny výrobní zařízení by měly být pokryty

Světlo.

Měsíční čištění prostor se nazývá

2. Uveďte definici následujících pojmů:

Dezinfekce je -

Deratizace je -

Disinsekce je -

3. Použití vzdělávací materiál, Vyplňte tabulku:

Obchod se zeleninou

Masný obchod

Rybí obchod

Horký obchod

Studený obchod

Cukrářský obchod

Rozdělení

Dodržování úkolů

1. Place (čas) provedení úkolů

Biologická třída

2. Maximální doba provedení úkolů: 90 min

Praktické práce číslo 5 Práce s regulační technickou dokumentací: SANPINE 2.3.6. 1079-01.

Účel práce : Prozkoumejte hygienické požadavky na zařízení, inventář, nádobí, kontejnery. Doprava a skladování potravinářských výrobků.

Materiálová podpora : Instruktivní karty pro praktickou práci, Sanpine 2.3.6. 1079-01.

Cvičení 1

Prozkoumejte materiální učebnici, Sanpine 2.3.6. 1079-01. Podle výsledků studie:

1. Odpovězte písemně na otázky:

Co patří do kuchyňského nádobí?

Co je označeno nádobí?

Co patří k jídelnou jídelnou?

Jaké materiály jsou povoleny pro výrobu zařízení a inventáře

pro stravovací podniky?

Jaký je principní rozdíl při mytí jídelních místností a příbory?

2. Seznam pravidel a požadavků:

2.1. Sanitární pravidla pro přepravu polotovarů:

2.2. Sanitární pravidla pro skladování potravin:

3. Extrahujte fráze:

Před distribucí by měla kvalita hotových pokrmů

Při podání první nádobí a teplé nápoje by měly mít teplotu

_______ ° С, druhé nádobí a přílohy ______ ° С, misky

teplota ______ ° C, studená nádobí a nápoje ______ ° C.

V terapeutických a preventivních a dětských institucích v zimním jarním období kvůli nedostatku zeleninové pokrmy ___________________ Je nutné obohatit tyto pokrmy.

Pro kvalitu hotových výrobků a dodržování pravidel jeho svátků v cateringových podnicích jsou odpovědné ________________

Dodržování úkolů

1. Place (čas) provedení úkolů

Biologická třída

2. Maximální doba provedení úkolů: 90 min

Praktické práce číslo 6 Příprava dezinfekčních řešení a jejich skladování

Účel: Prozkoumejte název dezinfekčních prostředků, způsoby přípravy dezinfekčních řešení v závislosti na cíli. Připravte si roztok dané koncentrace.

Materiálová podpora : Instruktivní karty pro praktickou práci, Sanpine 2.3.6. 1079-01, učebnice

Cvičení 1

Zkoumat materiál literatura, Sanpine 2.3.6. 1079-01. Podle výsledků studie:

1. Odpovězte na otázky:

Jaká řešení se týkají dezinfekčního prostředku?

Jaký je účel dezinfekčních řešení?

Jaké léky se používají jako dezinfekce?

Jak rozpoznat, jaké nádobí byly léčeny dezinfekcí?

2. Prozkoumejte přípravu a účel dezinfekčních prostředků. Vyplňte tabulku.

3. Připravte 1 litry 0,2% roztok chloru B.

4. Závěr na základě výsledků práce.

Dodržování úkolů

1. Place (čas) provedení úkolů

Biologická třída

2. Maximální doba provedení úkolů: 90 min

Kritéria pro hodnocení praktické práce:
Hodnocení "5" je nastaveno, pokud :
1. Správné nezávisle určuje účel těchto prací; Provádí práci v plném souladu s nezbytným posloupností jednání.
2. Racionálně vybírá a připravuje potřebný vybavení pro provádění práce; Provádí data k práci z hlediska získání nejpřesnějších výsledků.
3. Kompetně, logicky popisuje průběh práce, správně formuluje závěry; Přesně a jemně provádí všechny záznamy, tabulky, kresby, kresby, grafiku, výpočty.
4. vystavuje organizační a pracovní dovednosti: podporuje čistotu pracoviště, pořadí na stole, ekonomicky vynakládá materiály; Dodržování bezpečnostních předpisů při provádění práce.
Vyhodnocení "4" je nastaveno, pokud :
1. Provádí operaci laboratoře zcela v souladu s požadavky na vyhodnocení výsledků na "5", ale umožňuje výpočty, měření dvou je tři nedostatek jedné nebo jedné ne-bug a jedno vady.
2. Při provádění práce umožňuje nepřesnosti v popisu postupu; Provádí neúplné závěry při zobecňování.
Hodnocení "3" je nastaveno, pokud :
1.1 Správně provádí práci nejméně 50%, ale objem dokončené části je takový, který nám umožňuje získat skutečné výsledky a vyvodit závěry hlavními, základními důležitými úkoly práce.
2. Vybere vybavení, materiál, začíná pracovat s pomocí učitele; Nebo během měření, výpočty, pozorování, chyba, nepřesně upravuje závěry, zobecnění.
3. provádí práci v oblasti iracionálních podmínek, což vede k výsledkům s velkými chybami; Nebo ve zprávě připouští celkem ne více než dvě chyby (v záznamech čísel, výsledky měření, výpočty, vypracování grafů, tabulek, schémat atd.), Které nemají pro tuto práci žádnou zásadní hodnotu, ale to ovlivnilo výsledek.
4. Umožňuje hrubou chybu během práce: ve vysvětlení, v návrhu, v souladu s bezpečnostními předpisy, které student stanoví na žádost učitele.
Hodnocení "2" je nastaveno, pokud :
1. neznamená účely samotného práce, nemůže připravit příslušné vybavení bez pomoci učitele; Není plně fungovat a objem provedené části neumožňuje provést správné závěry.
2. umožňuje dvě a hrubší chyby během práce, které nelze na žádost učitele opravit; Nebo produkuje měření, výpočty, pozorované nesprávně.

PŘÍLOHA.

Příloha 1.

Memo student.

Při provádění práce musí student:

Podrobně je to předběžné s teoretickým materiálem a porozumět mikrobiologickým vzorům a procesům, které mají být naučeny v praxi.

Provádění experimentu, dodržovat všechna bezpečnostní opatření, posloupnost operací, provádění nezbytných pozorování.

Zaznamenejte výsledky zkušeností v poznámkovém bloku podle schématu navrženého v práci:

Po skončení práce, dát do pořádku pracoviště a předat ji laboratoří a učitelem.

Předmluva

V skutečná učebnice prezentovala laboratorní práce na mikrobiologii pro studenty pedagogické univerzity Specialitami 1-02 04 01 Biologie s dalšími specialitami a 1-02 04 05-01 Geografie. Biologie.

Účelem laboratorního workshopu je prohloubení teoretických ustanovení mikrobiologie přednášky a vývoj metody mikrobiologického experimentu. Příručka obsahuje laboratorní práce na sekcích předmětu: "Morfologie a strukturální funkční organizace prokaryotické", "fyziologie a metabolismus prokaryotických", "růst a pěstování prokaryotů", "Systematika a klasifikace prokaryot", "Ekologie prokaryotický ". Na konci každé práce jsou k zajištění teoretického a experimentálního materiálu. Tyto práce se počítají po dobu 4 hodin.

V každý z navrhovaných prací poskytuje seznam materiálů.

a zařízení, krátká teoretická vysvětlení, popis práce, doporučení pro návrh výsledků. Laboratorní práce obsahují referenční materiál, který umožňuje studentovi lépe porozumět obsahu laboratorních prací.

Práce jsou prováděny sdílení (2 osoby). Výkonnost práce předchází seznámení s teoretickými ustanoveními a prací, což je formulace účelu a cílů studie. Pomocí přínosu studenti vyvodí výsledky experimentu v souladu se studovním kartou tříd. Práce zajišťují nezávislou formulaci závěrů s odůvodněním získaných výsledků. Analýza záznamů a asimilace studovaných materiálů je řízena učitelem na každé okupaci.

Požadavky na obsah a návrh laboratorních prací

1. Laboratorní práce je vypracována v poznámkovém bloku každým studentem individuálně. Laboratorní notebook je podepsán studentem před provedením první laboratorní práce.

2. Každá laboratorní práce musí obsahovat následující strukturní prvky:

1. Jméno laboratorní práce.

2. Účel třídy.

3. Seznam základních materiálů a vybavení.

4. Výsledky a diskuse: a) Název úkolu.

b) Experimentální materiální třídy, uvedené v sekci, získané osobně studentem v průběhu laboratorní práce.

5. Závěry.

Laboratorní práce, zdobené v souladu s těmito požadavky, je předložena na konci každých tříd na podpis učitele.

Bezpečnost v mikrobiologické laboratoři

1. Osoby mohou pracovat v mikrobiologické laboratoři trénink po absolvování bezpečnostních instrukcí.

2. Je zakázáno vstoupit do mikrobiologické laboratoře v horním oblečení.

3. Studenti mohou zabírat pouze v přítomnosti lékařského županu.

4. Mikrobiologická laboratoř je zakázána připravit jídlo, pitnou vodu, outsiders. V laboratoři je zakázáno kouřit

a jíst jídlo.

5. Pro každého studenta je stálé pracoviště pevné (číslo pracoviště je zaznamenáno studentem na titulní stránce laboratorního notebooku).

6. Na pracovišti jsou umístěny pouze zařízení a materiály nezbytné pro provádění specifických laboratorních prací.

7. Dostaňte se do práce a pohybujte se podél laboratoře během třídy pouze se svolením učitele.

8. Při práci s mikroorganismy opatrnosti opatrně a dodržovat techniky, které vylučují možnost infekce.

9. Je zakázáno kontaktovat mikrobiální kultury s rukama.

10. Pokud mikroorganismy náhodně zasáhl stůl, mělo by být okamžitě odstraněno tamponem, navlhčeným dezinfekčním roztokem. Při práci s tekutou kulturou použijte speciální potřeby plotu mikroorganismů.

10. Nesvítejte jeden alkohol z jiného. Zavřete alkohol knotu s víčkem mezi použitím.

11. Při manipulaci s elektrickými spotřebiči dodržujte bezpečnostní opatření. Před zahájením prací zkontrolujte zdraví elektrických zařízení. Bez povolení učitele nezahrnujte elektrické spotřebiče v síti.

12. Na konci práce na zakázku na pracovišti. Důkladně umyjte ruce a zacházejte s bavlněným tamponem s dezinfekčním roztokem. Župan složený do plastového sáčku.

13. Provádění bezpečnostních předpisů Sledujte studenty, kteří také kontrolují na konci pořadí pracoviště.

Laboratorní práce číslo 1 Metody výzkumných prokaryotů. MORFOLOGIE

Prokryot

Účelu lekce. Přečtěte si vybavení pracoviště v mikrobiologické laboratoři, bezpečnostní techniku \u200b\u200bpři práci s mikroorganismy. Zaslat způsoby přípravy základních mikrobiologických přípravků. Studovat morfologické formy bakterií s použitím příkladu čistých kultur mikroorganismů a mikroflóry ústní dutiny.

Materiály a vybavení:bezpečnostní pokyny při práci s kulturami mikroorganismů; Bezpečnostní časopis; Plodiny mikroorganismů na Petriho miskách, ve zkumavkách s zkoseným agarem; Zápasy, skleněná tužka; petrolát; ponorný olej; mikroskop; mikrobiologická smyčka s držákem odlupování; alkohol; Sklenice kůže; sklenice; Drigalskyho špachtle; Pipetovací pastener; Sklo pipety; Zařízení pro barvení a mytí mytí; Filtrační papírové pásy.

1. Při práci s mikroorganismy si přečtěte vybavení pracoviště a bezpečnostních spotřebičů.

2. Prozkoumejte metody výzkumu mikroorganismů.

3. Pošlete metody vaření mikrobiologických přípravků.

4. Prozkoumejte morfologické formy mikroorganismů.

5. Zajistěte znalosti získané v oblasti mikroflóry úst.

Úkol 1. Seznámit se s bezpečnostní technikou při práci s mikroorganismy a vybavením pracoviště v mikrobiologické laboratoři.

Práce v mikrobiologické laboratoři vyžaduje přísné dodržování bezpečnosti.

V Běloruské republice a Rusku do míry nebezpečí pro člověka a okolní přidělený 4 Skupiny kauzálních činidel infekčních onemocnění, \\ tdolní číslo skupiny znamená při provádění laboratorních studií rostoucí riziko.

I Skupina - patogeny obzvláště nebezpečných infekcí: mor, přírodní neštovice, hemoragická horečka (lasa, ebola atd.).

Skupina II - Patogeny vysoce příkotkových bakteriálních, plísňových a virových infekcí: sibiřské vředy, brucelóza, tularemia, cholera, syrový typhus, blastomikóza, vzteklina, pomůcky, hepatitida b a c, atd., Botulinum nebo tetanus toxin.

III Skupina - patogeny jiných infekcí: kašel, tetanus, botulismus, tuberkulóza, trichomoniáza, malárie, leishmanióza, chřipka, pórok, herpesvirusy atd.

IV skupinu - podmíněné a patogenní (patogeny plynu gangrene, klebsiella, stafylokoky, streptokoky, shangna, některé upřímní a aspergillas, adenovirů, rotavirů, enterovirů atd.) A nepatogenní mikroorganismy.

V laboratorních třídách pracují studenti s ne-patogenní mikroorganismy. Je však třeba si uvědomit, že při setí saprofilních mikroorganismů z prostředí může patogenní mikroflóra náhodně.

Příprava mikrobiologické laboratoře k práci. S cílem snížit počet mikroorganismů ve vzduchu a na různých površích se v laboratorních prostorách používají různé způsoby.dezinfekce.

Vzduch v laboratoři je nejjednodušší pro dezinfekci větráním. Dlouhé větrání místnosti oknem (nejméně 30-60 minut) vede k prudkému poklesu počtu mikroorganismů ve vzduchu, zejména s významným rozdílem v teplotě mezi vnějším vzduchem a vzduchem místnosti. Čím účinnější a nejčastěji používaným způsobem dezinfekce vzduchu je ozařování s ultrafialovými paprsky s vlnovou délkou 200 až 400 nm.

Pracoviště, kde se přímo provádí práce s kulturami mikroorganismů, vyžaduje obzvláště důkladnou léčbu. Desktop by měla být dezinfikována nejen před začátkem práce, ale po jeho konci. Chcete-li využít povrch stolu, můžete použít lizola a chlorové roztoky, stejně jako 70% (podle objemu) roztoky isopropylových nebo ethylalkoholů.

Pro práci ve vzdělávací mikrobiologické laboratoři se používá následující vybavení:

1. Mikroskop. Biologický mikroskop (obr. 1) je optické zařízení, které zvyšuje předměty 40-1500 krát; sestávající z mechanických, optických a osvětlovacích systémů. Mechanický systém mikroskopu zahrnuje podkovovou nohu, držák trubky, trubku, hmotný stůl, šrouby. Optický systém zahrnuje čočky a okulár. Systém osvětlení se skládá z kondenzátoru s membránou a zrcadel.

mikroskop. Okulár se vloží do horní části trubky a revolver otáčí kolem jeho osy, ve kterém jsou čočky přišroubovány. Trubka se pohybuje nahoru a dolů s makrometickými a mikrometrickými šrouby. Jeden tah mikrometrického šroubu se pohybuje 0,1 mm trubice. Proto se mikrokompute používá pro přesnější armatury a pro předběžné makro. Tabulka předmětu je navržena tak, aby vyhovovala studijním materiálu.

Obrázek 1 - Mikroskop

1 - makrolint; 2 - trubky-kontejnery; 3 - skleněná sloučenina; 4

- předmět předmětu; Pět- Tubus; 6 - okulár; 7 - revolver; 8 - čočky; 9 - kondenzátor; 10 - zrcadlo; 11 - mikrovint; 12 -

kondenzátor základny podkovy se skládá z čoček sběru odráží od zrcadla

paprsky ve světlém paprsku a vede jej otevřením předmětu tabulky pro léčivo. Při určování mobility nenatřených drog musí být kondenzátor poněkud vynechán.

Membrána se nachází mezi zrcadlem a kondenzátorem a slouží k regulaci množství světla vstupujícího do kondenzátoru.

Čočka se skládá ze systému čoček uzavřených v kovovém rámu. Přední čočka se používá ke zvýšení položky, zbytek - k opravě obrazu. Moderní biologické mikroskopy mají alespoň tři čočky. Suché čočky se zvyšují za 8 a 40 krát (mezi čočkami a lékem je vzduchová vrstva), ponoření - 90 krát. Na rámu každé čočky je číslice označující zvýšení.

Okulár se skládá z top - oko a nižší - kolektivní čočky. Na horní části okuláru je číslice označující zvýšení (7, 10, 15). Okular zvyšuje pouze obrázek. Celkový nárůst mikroskopu se vyvíjí z produktu zvýšení čočky na zvýšení okuláru.

Desktop pro mikroskopické léky je vhodné umístit u okna nebo vybavit zdroj světla. Mikroskop je instalován na ploše na plochu s držáku trubky asi 7-10 cm od okraje. Zpočátku se rozsvítí osvětlení, pro které je zrcadlo nasměrováno paprskem světla ze světelného zdroje do čočky se zvýšením 8krát. S řádným nastavením osvětlení by mělo být zorné pole mikroskopu ve formě rovnoměrně osvětleného kruhu. Poté je studovaný lék umístěn na předmětu, který je upevněn svorkami a jsou považovány za mikroskopu za použití čoček se zvýšením 8, 40 nebo 90 krát.

Při práci s čočkami 8 a 40 je mikroskopová trubka jemně spuštěna s macrometrovým šroubem, přiveďte objektiv téměř blízko léku, ale nedotýkejte se ho. Sledování okuláru, mírně zvyšování trubice se stejným šroubem, dokud se obraz nezíská. Pomocí mikrometrického šroubu se provádí přesná objektivní instalace, dokud není dosaženo jasného obrazu položky.

Název: Mikrobiologie, virologie a imunologie ústní dutiny
Tsarev v.n.
Rok publikování: 2013
Velikost: 81,64 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ruština
Popis: Praktické vedení "Mikrobiologie, virologie a imunologie ústní dutiny" Ed., Tsareva v.n., domnívá se otázky obecných otázek mikrobiologie a mikroflóry lidské ústní dutiny. Prede ... stáhnout knihu zdarma

Název: Lékařská mikrobiologie, virologie a imunologie. 2. vydání
Vorobev A.a.
Rok publikování: 2012
Velikost: 32,73 MB.
Formát: Pdf.
Jazyk: ruština
Popis: Praktická příručka "Lékařská mikrobiologie, virologie a imunologie" Ed., Vorobyeva A.a., et al., Domnívá se základní sekce obecné mikrobiologie, stejně jako imunologie a virologie. West ... stáhnout knihu zdarma

Název: Základy mikrobiologie, virologie a imunologie
Szorkina n.v., Rubashina L.A.
Rok publikování: 2012
Velikost: 5.72 MB.
Formát: Pdf.
Jazyk: ruština
Popis: Vzdělávací poradenství "Základy mikrobiologie, virologie a imunologie" Ed., Prokorkin n.v., et al., Domnívá se, že hlavní materiál obecné mikrobiologie, virologie a imunologie. Nastavit historii ... Stáhněte si knihu zdarma

Název: Mikrobiologie Praktická příručka
Egorov N.S.
Rok publikování: 1995
Velikost: 2.04 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ruština
Popis: V knize "Průvodce praktickým výcvikem v mikrobiologii" Ed., Egorov N.S., zvýrazněný moderní laboratorní diagnostické metody v oblasti viru a mikrobiologie, a Ideant je považován za ... Stáhněte si knihu zdarma

Název: Mikrobiologie se základy virologie
Klekeo O.I., Zaranova t.v.
Rok publikování: 1999
Velikost: 8,71 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ruština
Popis: Ve vzdělávacím průvodci "mikrobiologie se základy viru" ed., Klekefko o.i., et al., Společná mikrobiologie s ohledem na bakterie morfosiologie, genetika bakterií, mikroflora b ... Stáhněte si knihu zdarma

Název: Lékařská mikrobiologie a imunologie
Vorobev A.a.
Rok publikování: 1999
Velikost: 14.3 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ruština
Popis: Výuka "Lékařská mikrobiologie a imunologie" Ed., Vorobyeva A.a., považuje hlavní části obecné mikrobiologie i imunologie. Historické milníky Ministerstva rozvoje jsou prezentovány ... Stáhněte si knihu zdarma

Název: Lékařská mikrobiologie, virologie a imunologie
Vorobev A.a.
Rok publikování: 2004
Velikost: 12.81 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ruština
Popis: Výuka "Medical Microbiologie, virologie a imunologie" Ed., Vorobiev A.a., zvažuje hlavní části obecné mikrobiologie, stejně jako virologie a imunologie. Prezentováno celému ... Stáhnout knihu zdarma

Název: M_Krob_olog má d_agnostik bakter_alnya іnfektsiy
Zhdanivsky M.v., Schukіn і.m., Syusarev O.A., N6KOLENKO YU.
Rok publikování: 2007
Velikost: 6.72 MB.
Formát: djvu.
Jazyk: ukrajinština
Popis: TUTORIAL "M_KROBLOGREATGECHNA Dіagnostik Bakterіalny Infektsiyi" Ed., Zhantivsky M.V., et al., Zvažuje mikrobiologickou diagnózu skupiny bakteriálních infekcí. Technika je popsána ...

Federální agentura pro vzdělávání

Karachay-Circassian State Technological Academy

Katedra hospodářských živočišných výrobků Výrobní technologie

MIKROBIOLOGIE

Metodické pokyny

laboratorní a praktické třídy studentů

agrární institut

Cherkessk - 2010.

Sestaven na základě přibližných a pracovní program Na kurzu "Mikrobiologie" v souladu se státem vzdělávací norma Vyšší odborné vzdělávání ve specializaci 110305 "Technologie výroby a zpracování zemědělských produktů" a 110201 "Agronomie" (2000).

Diskutován na zasedání židlí oddělení (protokol ze dne 2.07.2009)

Schváleno metodickou komisí agrární institutu (Protokol č. 6 z 01.01.2001). Zveřejněno rozhodnutím vzdělávací a metodologické rady Karachay-Cherkess State Technological Academy (Protokol Dated 01.01.2001)

Kompilátory:kandidát biologických věd, docent , kandidát zemědělských věd, docent , asistent

Recenzenti: – kandidát biologických věd

docent katedry "agronomie"

docent katedry oddělení "tppzh"

Editor: K. S.-H. Vědci, docent
Obsah

Úvod ................................................. .............................................. .. 6. 6.

1. Mikroskopie ............................................... ......................... .. 7. 7.

1.1. Snížení mikroskopie .............................................. ...... .7.

1.1.1. Mikroskopové zařízení ................................................ ...... 7.

2. Práce s mikroorganismy ............................................. ........... osm

2.1. Způsoby přípravy léčiv ....................................... .... . 8.

2.1.1. Sukniková užívající kulturu pro drogy ................................. 8

2.1.2. Studium živých buněk mikroorganismů metodou

lisované kapky ................................................ .............................. 8.

2.1.3. Pevné přípravky mikroorganismů ........................... 9

Systém osvětlení se nachází pod předmětem tabulky. Zrcadlo odráží světlo padající na něj do kondenzátoru. Jedna strana zrcadla je plochá, druhá je konkávní. Při práci s kondenzátorem je nutné použít ploché zrcadlo. Konkávní zrcadlo se používá při práci bez kondenzátu s malými čočkami zoomu. Kondenzátor se skládá z 2-3 krátkodobé čočky, shromažďuje paprsky přicházející ze zrcadla a směřují je k objektu. Kondenzátor je vyžadován při práci s imerzními systémy. V kondenzoru je membrána iris (okvětní lístek), sestávající z ocelových destiček.

Malované přípravky jsou považovány za téměř zcela otevřené otvory, nenatřené - se sníženým otvorem membrány.

Objektiv - Multiplay System, na kvalitě, z nichž závisí obraz objektu. Vnější čočka se nazývá přední, poskytuje zvýšení. Zbývající čočky provádějí funkce korekce optických nedostatků.

Čočka jsou suché a ponořené (ponoření). Při práci se suchými čočkami je vzduch umístěn mezi frontální objektivem čočky a předmětem studie. Při práci s ponorným objektivem v \u003d 90s mezi krycí sklo a čočky objektivu jsou cedrový olej, jehož index lomu se v blízkosti indexu lomu 1,515 a 1,52, resp. 1,52. Čočky mají zvýšení 8x, 40x a 90x.

Okulár Slouží jako přímé pokračování "čoček" (objektivu) lidského oka.

Okořováček se skládá ze dvou čoček - top - oko a nižší - kolektivní, uzavřené v kovovém rámu. Účel okuláru - zvýšení obrazu, který dává čočku. Zvýšení okuláru je vyryt na jeho ráfku. Práce zvýšení okulárů v rozmezí od 4 do 15x.

Okaws jsou tam odlišné typyA volba závisí na čočce. S dlouhodobým provozem s mikroskopem použijte binokulární trysku, protože zlepšuje viditelnost objektu, snižuje jas obrazu a tím si zachovává vidění.

Práce s mikroorganismy

2.1. Metody přípravy drog

2.1.1. Kultura s technikou pro přípravy

Bakteriologická jehla z trubky je spálena v plameni, malé množství mikrobiální hmotnosti trvá. Pokud je kultura kapalná, pak je lepší použít smyčku, v jiných případech jehlu.

2.1.2. Studium živých buněk mikroorganismů metodou drceného poklesu

Prozkoumejte živé buňky mikroorganismů metodou drcených kapek, předvídání předmětu s instalatérskými barvivy - vitální barvení(Barviva: methylenová modrá, neutrální červená v koncentracích od 0,001 do 0,0001%).

Mikroskopické léky, mírně stmívací zorné pole; Kondenzátor je mírně snížen, tok světla je regulován konkávním zrcadlem. Zpočátku používají malý nárůst - čočka 8x, po detekci referenčního okraje je instalována objektiv 40x nebo ponoření (90x).

V případě použití metody drcené poklesu na čistém skleněném snímku se aplikuje kapka voda z vodovodu. To dělá kulturu a směs s vodou. Přebytečná voda se odstraní filtračním papírem. Při použití ponorné čočky na posuvném sklo cedrového oleje a mikroskopie.

2.1.3. Pevné přípravky mikroorganismů

Pevné přípravky zahrnují takovou léčbu živých buněk, což umožňuje rychle přerušit tok životních procesů v objektu, udržet svou jemnou strukturu. V důsledku upevnění jsou buňky pevně připojeny ke skleněnému a lepšímu skóre. Fixace je nezbytná v případě práce s patogenními mikroorganismy (pro bezpečnostní účely).

Příprava smyku. Kapek vody z vodovodu se aplikuje na čisté skimmingové sklo. Pro odmašťování brýle používají směs ethylalkoholu a síru síry v poměru 1: 1. Kalcined bakteriologická jehla ze zkumavky s kulturou má malé množství mikrobiální hmoty a vytváří kapku vody. Pokles trny smyčka na sklo na čtverci asi 4 cm2.

Pokud je suspenze tlustá, je nejprve chován vodou. Pro to, kalcinovaná smyčka vezme malou suspenzi a přeneste do kapky vody do jiného snímku. Suspenze normální tloušťky se rozmazává tenkou vrstvou na sklo, potom se smear suší ve vzduchu při teplotě místnosti nebo se slabým ohřevem, drží lék vysoko nad hořákem plamene. Silný ohřev léčiva během sušení se nedoporučuje zabránit koagulaci proteinů, zkreslení struktury a tvaru buněk. Sušená příprava pevná.

Upevnění stěr. Je to provedeno přes hořák plamenenebo s pomocí chemikáliesvaz. V prvním případě se lék třikrát nebo čtyřikrát pomalu provádí spodní stranou přes plamen hořáku, v druhém případě se používají chromové sloučeniny: formalin, kyselina osmium, aceton. Jedním ze společných technik fixace je zpracování léčiva s 96% alkoholem nebo směsí stejných objemů ethylalkoholu a etheru (tekutina Nikiforov). Pro to jsou léky ponořeny do 10-30 minut do upevňovací kapaliny.

Zbarvení léku. Na stěrkách se aplikuje několik kapek barviv. V závislosti na typu barviva a účelu studie se délka barvení liší od 1 do 5 minut, v některých případech zabírají až 30 minut. Na konci barvení se lék promyje vodou, voda se odstraní filtračním papírem, suší se ve vzduchu a mikroskopii.

Existují jednoduché a diferencované metody barvení.

Pro prostý Barvení se používá jakýmkoliv jedním barvivem (methylenová modrá, fuchsin, gentologická fialová), celá buňka je hodnocena.

Pro diferencovaný Barevné samostatné buněčné struktury jsou natřeny různými barvivy (malba gramem, lakování spórů).

Výzkum mikroorganismů morfologie

3.1. Forma buněk

3.1.1. Bakterie

Ve formě musí být všechny bakterie rozděleny na sférické (COCCI), řadový tvar a spletitý.

Sférické bakterie - Cockki.

1. MicroCCI -jednotlivé sférické buňky ( Mikrokus. agilis.).

2. Diplococci -charakter kuchařů připojených ke dvěma. ( Azotobacter. chrookoccum).

3. Tetracokki.- Znak Cocci, připojené čtyři.

4.Streptococci.- sférické bakterie spojené v řetězech (hlavně palogenní, stejně jako bakterie kyseliny mléčné Lactococcus. lactis.).

5. Sarkines - Znakové bakterie, které se seskupují v 8 buňkách, vznikají v důsledku buněčného dělení ve třech vzájemně kolmých letadlech. Některé typy sarcin tvoří velké štěpené balíčky, ve kterých se na každé straně umístěny 4 sarkony. Typický zástupce Sarcina. flava. (Yellow Sarcin) je nejčastějším reprezentantem vzduchové mikroflóry.

Všechny sférické formy bakterií, s výjimkou StreptoCtococcus. lactis., procházení pevným a malovaným fuchickým přípravkům.

Bakterie ve tvaru válce. Jedná se o formy, které nejsou tvořeny spory (porod Pseudomonas., Achromobacter., Lactobacillus. et al.) a tváření sporů (porod Bacil., Clostridium. atd.).

Nešťastný hůlka Pseudomonas. stutzeri. – cytoplazma je rovnoměrně blokován.

Tyčinky tvořící spór Bacillus mycoides.a Bacillus Mesenttericus.Pod mikroskopem vypadají nerovnoměrně malované. Spory nejsou obarveny jako hustější struktury. Buňky Bacil. mycoides. Nachází se s řetězy, je Streptobacillia.

Oholené bakterie jsou zobrazeny na pevných a malovaných přípravcích.

Křížový formulář

1. Vibions. – mírně zakřivené buňky.

2. Spirillas může mít jeden curl ve formě ruského dopisu C, dva kadeře v podobě latinského písmene nebo několika - ve formě spirály.

3. Spirochetes - dlouhé a tenké buňky se spoustou kudrlinek; Délka buněk přesahuje jejich tloušťku 5-200 krát.

Vibrační a spirály jsou vhodně zobrazeny na pevném a malovaném přípravě z Dung Aive, dříve inkubované během několika dnů v termostatu. Z různých mikroorganismů na tomto přípravě se často setkávají s konvoly.

S Spirochtami, můžete se seznámit na pevném lakovaném léku zubního plaku, přípravy náplasti z nejranějšího zubu jsou obzvláště úspěšné. Zubní spirochy jsou velmi tenké, tvarované vlasy, krátké (pouze 2-3 kudrlinky).

3.1.2. Aktinomycets.

Actinomycetes jsou zářivé houby. Mycelium Actinomycetes na diferencovaných živinách: jedna část je ponořena do substrátu (substrát mycelia), druhý je nad substrátem (AIR mycelium).

Mnoho zástupců aktinomycetes produkují pigmenty, takže jejich vzduchový mycelium a zejména kolonie jsou malovány v modré, modré, fialové, růžové, hnědé, hnědé nebo černé barvě. Actinomycetes jsou natřeny živným médiem ve vhodných barvách.

Šoupek kolonie Actinomycet se aplikuje na snímek s médiem. Druhé nad sklo je pevně přitlačeno na sklo, rozdrcený a rozmazaný na sklo. Léčivo se suší, pevně, barva, prochází pod mikroskopem, kde jsou částečně viditelná vlákna mycelických jednovlodných buněk.

3.1.3. Droždí

Droždíně - jednobuněčné mikroskopické houby jsou různorodé ve tvaru: elipsed, hruška, zaoblená, válcová. Vynásobíme vegetativní a sexuálně.

Pro laboratorní třídy používají pekařské kvasnice. Malý kus kvasinkové hmoty několik hodin předtím, než třídí jsou umístěny v teplé krémové vodě a vložte teplé místo. Je tvořena střední kapalina. Kapka této tekutiny se aplikuje na skleněné sklo, pokryté povlakovým sklem, naneste kapku cedrového oleje a podívejte se přes léčivo s ponorným systémem. Svíčka a dělící buňky jsou viditelné.

3.2. Chemické výzkumné metody

3.2.1. Omalovánky buněk mikroorganismů gramem

Tento způsob diferenciace mikrobiálních buněk je založen na rozdílu v chemickém složení buněčných skořápek. V buňkách některých typů mikroorganismů je nerozpustný v alkoholu sloučenina jodu s hlavním barvivem a u jiných druhů, tato sloučenina se objeví dočasně a po zpracování s alkoholem rozpouští se. Mikroorganismy první skupiny gram-pozitivní druhý - gram-negativní.

Technika zbarvení v gramu. Tři tenké nátěry různých kultur mikroorganismů se aplikují na defatované sklo mikroorganismů (dva z nich jsou kontrolní, s dobře známým postojem k gramové barvě). Šmouhy se suší ve vzduchu, upevněné přes plamen hořáku a obarveny po dobu 1 minuty s fenolovým roztokem genitonu (nebo krystalické fialové), drží sklo v mírně nakloněné poloze. Pak je barvivo vypuštěno a bez promytí léku s vodou se na něj aplikuje 1 minutu s roztokem Lugola (až do stěrného nátěru). Sklo je uchováváno v nakloněné poloze. Léčivo bez promytí vodou je ošetřena, kontinuálně kymácí, 96% alkohol po dobu 15-20 s. Je důležité dodržovat dobu zabarvení, protože gram-pozitivní buňky jsou zbarveny při překročení stanovené lhůty.

Mytí vodou, lék je obarven s Fuchsinem PFFEF po dobu 1 minuty. Gram-pozitivní mikroorganismy získávají tmavě fialovou barvu a gram-negativní barva je natřena v barvě dodatečného zbarvení (fuchsin).

Výsledky malby v gramu závisí na věku kultury: Ve starých kulturách jsou mrtvé buňky vždy namalované grammery. Proto je lepší použít mladé jednořetězené kultury.

Dobré předměty pro barvení buněk mikroorganismů gramem jsou kvasinky, Bacillus Mesenttericus. nebo Bacillus subtilis. (gram-pozitivní) a intestinální hůlka Escherichia Coli (gram-negativní).

Barviva a reagencie pro barvení v gramu.

1. Fenolový roztok gentian fialové:graycian fialová - 1 g, alkohol 96% - 10 ml, fenolová krystalická - 2 g, destilovaná voda - 100 ml.

V některých případech platí Řešení alkoholu Heciananachový:genzian fialová (nebo krystalická fialová) - 1 g, alkohol 96% (remifitis) - 100 ml, glycerin - 5 ml. Směs se vloží do termostatu po dobu 24 hodin, pak filtruje.

2. Řešení Lugola(způsobující draslík - 2 g, krystalický jod - 1 g, destilovaná voda - 300 ml). Zpočátku se připraví koncentrovaný roztok jodů draselného v 5 ml vody, jod se v něm rozpustí, pak se voda přidá do 300 ml.

3. Alkohol96%.

4. FUCHENE Pfefefefe.(vodní roztok Carbolovaya Fuchsina Ciel): 1 ml karbolové fuchsina a 9 ml destilované vody. Připravuje se následujícím způsobem: 1 g fuchen, 5 g fenolové krystalické, 96% alkoholu - 10 ml, několik kapek glycerolu, 100 ml destilované vody, fuchsin se rozpustí v ethanolu, přidá se rozpuštěný fenol ve vodě . Roztok se míchá a nechá několik dní. Před použitím se filtruje.

3.2.2. Barevný spor pro bakterie

Spory bakterií ve srovnání s vegetativními buňkami mají vysokou odolnost vůči nepříznivým podmínkám vnější prostředí. Jsou to zaoblené, oválné nebo elipsy formace. Pokud průměr sporu nepřekročí průměr buňky, ve kterém je spor tvořen, buňka se nazývá bacillina, Pokud překračuje v závislosti na uspořádání sporu ve středu nebo na konci buňky, tato buňka se nazývá clostridial. nebo plexdolie . V Bacillina buňce může být spor umístěn ve středu buňky - centrálnípozice na konci - terminála blíže k jednomu z konců - santerminálnípozice.

Při pozorování živých bakterií tvořících spór, jejich spory mohou být vypouštěny silnějším refrakci světelných paprsků. Odolná vůči kyselině spores, tak sotva obarvené barvami. To je velká hustota skořepiny, nízká koncentrace v něm volné vody a vysoké lipidy ve sporech. V přípravcích namalovaných jednoduché způsoby nebo v gramu zůstávají spory bezbarvé (Negativní barva).

Všechny metody malířského sporu jsou založeny na sjednocený princip: Za prvé, spory se zpracují s různými látkami: chrom, chlorovodíková, síra, octové kyseliny, amoniaku, žíraviny nebo peroxidu vodíku, pak barvou buňku s sporem při zahřátí a nakonec odstraňte cytoplazmu a dodatečně ji barvou kontrastním barvivem .

Metoda Cily-Nielsenu v modifikaci Muller.Před upevněním nátěru bakterií na přípravu plamene připravte obvyklým způsobem. Dále, 5% roztok kyseliny chromové se aplikuje na pevnou v plameni a chlazeném léčivu. Po 5-10 minutách se promyje vodou. Lék je pokryt proužkem filtračního papíru a je hojný smáčedlo papíru Carbolovy fuchsinského kostí. Předehřejte lék nad plamenem před vzhledem páry (ne až vařící), pak jej vyjměte na stranu a přidejte novou část barviva. Tento postup se provádí do 7 minut. Je důležité, aby se barvivo vypařilo, ale papír se nekrmil. Po ochlazení se odstraní, lék se promyje vodou a důkladně zaklínuje filtrační papír. V důsledku takové léčby jsou buňky s spory rovnoměrně spáleny.

Dále odstraňte cytoplazmu buněk (ale ne spory), ošetření 1% roztoku kyseliny chlorovodíkové nebo sírové po dobu 15-30 s. Při přípravě drogového sporu Bacil. mycoides. nebo Bacil. mesentericus. Doporučuje se odstraňovat cytoplazmu 16-18 ° C (měřeno hlasitě od 21 do 37-40). Po překročení tentokrát mohou být spory odradeny. Potom se lék promyje vodou a obarveným methylenem modrým 2 minutami.

Omalování ukazuje kontrast a jasně červené spory jasně vyčnívat na pozadí modré cytoplazmy.

Metoda Peshkova. Lék je upevněn v plamenech, který se vylévá methylenová modrá lefflera, přiveďte jej do varu a vaříme 15-20 s, drží sklenici přes plamen. Šmoule se promyje vodou a obarví se na 30 s 0,5% vodným roztokem neutrální červené. Opět se promyje, vysuší a dále prozkoumejte léčivo ponorem oleje čočky. Spory jsou namalovány v modré nebo modré, cytoplazmě - v růžové.

Pro studium sporu mohou sloužit pohodlné objekty Bacil. mesentericus. nebo Bacil. mycoides. Ve věku 4 dnů.

Reagencie pro barvení spór bakterií.1. Carbolic Fuksin.Výtažný(Viz 3.2.1).

2. Methylenová modrá lefflera.(Viz 3. 2. .1).

3. Nasycený vodný roztok methylenové modře.2 g barviva a 100 ml destilované vody.

4. Kyselina chromová,5% řešení.

5. Salo.(nebo kyselina sírová,1% řešení.

4. Kultivace mikroorganismů

4.1. Živná média

4.1.1. Vaření živná media

Maso-Pepon Broth (MPB).Pro vaření maso-pepton média masový vývarkterý se získá následujícím způsobem: 500 g jemně nasekaného čerstvého masa se vlije do smaltované pánve 1 l vody z vodovodu, zahřívá se na 50 ° C a nechá se 12 hodin při teplotě místnosti nebo 1 h při teplotě 50-55 ° C. Maso je lisováno, extrakt je naplněn gázou s vrstvou vatové vlny, vaří 30 minut na koagulátní koloidní proteiny a dvakrát filtruje (poprvé po gázu s bavlnou, druhou - přes papírový filtr). Filtrát se doplní vodou do 1 l, nalit do baňek, uzavřené bavlněnými zátky a sterilizujte při teplotě 120 ° C 20 minut (zástrčky baňky jsou uzavřeny na horní části čepic z papíru).

Masový vývar může být použit kdykoliv pro přípravu médií. Pokud jsou připraveny najednou, není nutná předběžná sterilizace masového vývaru.

Pro přípravu MPB do 1 litru masového vývaru přidejte 5-10 g pepton(První produkt proteinové hydrolýzy) pro zvýšení kalorického obsahu média a 5 g havárievytvořit osmotickou aktivitu. Médium se zahřívá na rozpouštění PEPTON, stálého míchání.

Nastavte neutrální nebo slabě alkalické médium reakce, uvízl 20% roztok Na2C03 na tvorbu vlhkého červeného laktiového papíru. Chcete-li zkontrolovat pH prostředí, je vhodné použít indikátor bromimolblau:1-2 kapky je smíchán v porcelánovém šálku s vývarem. V neutrálním médiu je Brommat Blama láhev zelená, v kyselém žlutém, v alkalickém modři.

Po stanovení pH se médium opět vaří 5-10 minut a proteiny, které se stočené, když se mění reakce média, se filtruje přes papírový filtr, aniž by ho zesvětlil nebo zesvětlen proteinem. Pro toto jsou čerstvé vaječné bílé šlehačky s dvojnásobkem přes množství vody a smíchány s chlazeným až 50 ° s vývarem. Směs se vaří, míchá se na slabé teplo 10 minut a poté filtruje. Transparentní maso-Pepon Broth se vlije do trubek, zakryjte bavlněným zátky a sterilizovat při teplotě 120 ° C 20 min.

Maso-Pepton Agar (MPA).15-20 g agaru se přidá do 1 litru MPB. Médium se zahřeje na rozpuštění agaru (teplota jeho tání - 100 ° C, tuhnutí - 40 ° C), nastavte slabě alkalickou reakci média 20% roztokem Na2C03 a vylkutujte nálevkou ve zkumavkách (přibližně 10 ml agaru Petriho šálky a 5 ml získat zkosené agar - Jambs).

Při rozlití agarových okrajů by trubky měly zůstat suché, jinak se zástrčky drží sklo. Zkumavky s médiem se sterilizují v autoklávu při 120 ° C 20 min.

4.2. Metody sterilizace

Sterilizace - Jedná se o úplné zničení mikroorganismů v živinách média, nádobí atd.

Existuje několik metod sterilizace. Často často aplikujte sterilizaci s ohřevem.

4.2.1. Flamming nebo kalcinace

Je možné se naučit přímo před použitím platinových smyček, jehel, špachtulas, malé kovové předměty (nůžky, lancety, pinzety), stejně jako skleněné tyčinky, předmět, nátěrové brýle atd.

4.2.2. Sterilizační suché teplo

Používá se pro zpracování jídel a suchých materiálů, jako je škrob, křída. V tomto případě je sterilizovatelný předmět udržován na 170 ° C po dobu 2 hodin (od okamžiku, zřízení požadované teploty) v elektrických sušičkách. Zvyšování teploty nad 170 ° C se nedoporučuje: bavlněné zátky a papír se začnou kolapsovat.

Před sterilizací jsou skleněná nádobí uzavřena s bavlněnými zátky a balení s papírem. Šálky, trubky, pipety, vata vata, zabalené v papíru nebo umístěné ve zvláštních případech a tužkách, ve kterých mohou být sterilní jídla skladována po sterilizaci.

Na konci sterilizace je skříň objevena až po snížení teploty do podlahy místnosti, jinak může sklo prasknout.

4.2.3. Sterilizace s tekutinovým trajektem

Tekutiny (100 ° C) se zpracují suchým teplem a některými živnými médiemi, které nemohou odolávat vyššími teplotami (médium s sacharidy, mph, mléko). Proveďte sterilizaci v Koch varu útesu po dobu 30 minut po dobu 3 dnů denně. Taková sterilizace se nazývá zlomkové.

S jednorázovými oteplováním při teplotě 100 ° C po dobu 30 minut, vegetativní buňky umírají, spory mnoha mikroorganismů zůstávají životaschopné. Po takovém zahřátí je médium umístěno do 24 hodin na termostat při 28-30 ° C. Spory, uchované při prvním vytápění, mají čas na klíčení vegetativních formami, které umírají s následným ohřevem. Poté se tato operace opakuje další 2krát.

4.2.4. Sterilizace s nasyceným trajektem pod tlakem

To je nejrychlejší a nejspolehlivější způsob, jak sterilizovat, ve kterém nejdrsnější spory umírají. S tím je většina výživných prostředích sterilizována.

Léčba nasyceným trajektem se provádí v hermeticky uzavřeném kotle tloušťce - autokláv.Na víku nebo na straně autoklávu je jeřáb pro výstupní páry, tlakoměr a pojistný ventil. Měřidlo ukazuje, kolik tlaku páry uvnitř kotle je vyšší než normální. Aby nedošlo k výbuchu, když je mezní tlak překročen, spustí se pojistný ventil, což rozdává pár.

Sada tlakoměrem v fyzikálních atmosférách odpovídá určité teplotě.

Spolehlivá sterilizace se dosahuje zahříváním při teplotě 120 ° C a tlaku 1 atm po dobu 20 minut.

Sterilizace se provádí následujícím způsobem. Nalijte vodu do autoklávu, sterilizované předměty jsou umístěny v něm, zašroubujte víko autoklávu a začněte ohřívat. Jeřáb je ponechán otevřený, dokud se veškerý vzduch, který je v autoklávu, nebudou doplněny vodní páry. Když se páry začnou opustit jeřáb s nepřetržitým proudem, jeřáb je uzavřen, tlak páry v autoklávu se upraví na 1 atm a udržuje se na této úrovni 20-30 minut. Potom se zastaví ohřev, čeká, až se tlakoměrová šipka klesne na 0, opatrně (málo) otevřít jeřáb a jít dolů páru. Teprve pak odšroubujte víko autoklávu. Pokud je jeřáb otevírají dříve než tlakové poklesy tlaku, kapalina v sterilizovaných nádobách bude vařit a sáčky z nich.

Autokláv se používá pro frakční sterilizaci s tekutou páru. V tomto případě se víko nepřišroubují, aby poskytovaly ven z páru.

4.2.5. Pasterizace

Pasterizace je neúplná nebo částečná, sterilizace, což znamená zahřívání při teplotě 65-80 ° C po dobu 30-10 minut, v tomto pořadí, po němž následuje rychlé ochlazení na 10-11 ° C. Pasterizujte mléko, pivo, víno a jiné produkty.

Materiály a vybavení

MPB, Agar, Lacmus Red, Brommat Blau, porcelánové desky s jamkami nebo šálky, skleněné tyčinky, 20% Na2C03 roztok roztok, zkumavky (pro odlévání agar), nálevky, bavlna, Petriho misky, pipety Mora Mora na 1 ml, papír U zábalů šálků a pipetů, baňky s kapacitou 250 ml, drsných nití.

5. Účetnictví pro číslo a přidělení čisté kultury mikroorganismů

5.1. Metody účetnictví Počet mikroorganismů

5.1.1. Účetnictví pro počet mikroorganismů (CFU) v půdě metodou živných desek v kombinaci se způsobem po sobě jdoucích ředění

Půda je nejpříznivějším prostředím pro vývoj mikroorganismů. Vzhledem k velké heterogenitě své kompozice vzít v úvahu počet mikroorganismů v něm z studované oblasti střednívzorek půdy.

Nejprve připravte suspenze (metoda ředění) obsahující různé koncentrace půdy v 1 ml vody. K tomu, na sterilní hodinky skla, sterilní porcelánová špachtle nebo hliníkové lžičky vezme ze sklenice nebo pytel půdního závěsu v 1 g. Tam je špachtle, lžíce plamene poháněné v plameni hořáku nebo kotvení v alkoholu, hořet. Při vážení půdy je hodina skla pokryta jinými sterilními hodinky.

Broušení půdy, pozorování podmínek aseptiky, přenos do baňky při 250 ml s 99 ml sterilní vody. Směs se třese 5 minut, aniž by došlo k zamilování zástrčky. Sterilní pipeta se odebere 1 ml suspenze obsahující 10-2 g půdy a přenese se do zkumavky s 9 ml sterilní vodovodní vody. Pipeta se opakovaně promyje vodou v trubce, aby se buňky zplnily z jeho stěn co nejvíce. Další sterilní pipetu je odebrána z baňky o dalších 1 ml suspenze a umístěna do druhé baňky, také obsahující 99 ml sterilní vodovodní vody. Tato pipeta se promyje stejným způsobem jako v prvním případě. Zkumavka a druhá baňka se třepají 1 min. Koncentrace půdy v trubce bude 10 až 3 g, ve druhém sloupci -10-4. Stejným způsobem, 1 ml suspenze od druhých baňek v druhé trubce s 9 ml a 99 ml sterilního kohoutku V druhé sterilní pipetě se přenese voda a 99 ml sterilní voda z vodovodu. Nové suspenze se připravují obsahující v 1 ml, 10 až 5 a 10-6 g půdy.