미생물학의 실제 작업. 미생물학 워크숍
연방 교육청
주립 교육 기관
이르쿠츠크 주립대학교»
미생물학의 작은 실천
학습 가이드
이르쿠츠크 2009
UDC 579 (076.5)
이르쿠츠크 주립대학교 편집출판위원회의 결정으로 출판
미생물학에 대한 Zhilkin 워크숍: 교과서.-방법. 스터드 설명서. 더 높은. 공부하다. "미생물학", "생물학" 및 "생리학" 전문 분야의 기관.
6. 미생물 덩어리가 손, 테이블 및 주변 물체를 오염시키지 않아야 합니다. 유출된 미생물 현탁액은 소독제를 사용하여 중화됩니다.
7. 작업이 끝나면 배양물을 교사에게 전달하고 접종된 시험관과 컵을 온도 조절기에 넣습니다.
8. 미생물과 접촉한 후 세균학적 고리, 바늘, 핀셋 및 기타 금속 물체를 알코올 램프의 화염으로 태우고 특수 스탠드에 둡니다.
9. 사용한 슬라이드와 커버슬립, 피펫, 주걱 등은 3-5% 탄산수 또는 기타 소독 용액에 넣습니다.
10. 사용한 배양액은 시험관, 배양접시 등을 소독액으로 24시간 중화한 후 끓인 후 세척한다.
11. 개인위생을 철저히 준수해야 합니다. 작업을 마친 후에는 비누와 물로 손을 철저히 씻어야 합니다.
12. 전기제품 및 화학약품 취급시 안전수칙을 준수할 필요가 있습니다.
일반 미생물학
제1장 현미경과 현미경 기술
1. 광학 현미경
2. 암시야 현미경
3. 위상차 현미경
4. 발광(형광) 현미경
2장. 배양, 파종 기술 및 미생물 작업에 필요한 장비에 대한 일반적인 이해
3장. 미생물 제제의 제조 방법
4장. 미생물 세포 연구
1. 미생물 세포의 형태
2. 미생물 세포의 구조(세포화학적 연구방법)
3. 미생물 세포의 그람 염색
4. 박테리아 포자의 착색
5. 캡슐의 착색
6. 편모의 착색
7. 박테리아 핵물질의 착색
8. 미생물 세포 내포물의 착색
제5장 미생물의 영양
1. 개별 영양소의 중요성
2. 배양 배지의 준비
3. 멸균 방법
제6장. 세균의 수를 세어 순수한 배양액을 분리
1. 토양의 박테리아 수 계산
2. 박테리아의 정성적 구성 결정
3. 물 및 기타 액체의 미생물 수 계산
4. 공기 중의 박테리아 수 계산
5. 세균의 순수 배양물의 분리
7장. 박테리아 유형 결정
제8장. 미생물에 의한 무질소 유기물의 전환
발효 과정
1. 알코올 발효
2. 젖산 발효
3. 부티르산 발효
4. 펙틴 물질의 발효
5. 셀룰로오스의 발효
6. 섬유소의 산화
7. 지방의 산화
8. 탄화수소의 산화
제9장. 미생물에 의한 유기 및 무기질 질소 화합물의 전환
1. 암모니아화
2. 질산화
3. 탈질(질산염 호흡)
4. 대기 질소의 생물학적 고정
10장. 미생물에 의한 황, 철 및 인 화합물의 변환
1. 미생물에 의한 황화합물의 전환
2. 철분 전환에 미생물의 참여
3. 미생물에 의한 인 화합물의 전환
농업미생물학
제11장. 토양의 일반 미생물 분석
1. 연구방법
2. 미생물 그룹, 영양 배지의 구성 및 준비
3. 평균 토양 시료 채취 및 미생물 분석용 시료 준비
4. 토양 현탁액의 준비
5. 다양한 미생물군에 대한 고려
6. 현미경으로 직접 계수하여 토양의 총 미생물 수 측정
12장. 미생물 인구 조사
1. N.G. Kholodny에 따른 유리 오염 방법
2. Perfiliev와 Gabe의 방법에 의한 토양의 미생물 cenoses 연구
3. Aristovskaya가 수정한 Perfiliev 모세관 방법
4. Tepper의 변형에서 Vinogradsky의 방법에 따라 부식 물질의 분해에 참여하는 autochthonous 그룹의 미생물 식별
5. Tepper법에 의한 휴믹물질 분해에 관여하는 미생물의 동정
13장. 토양의 생물학적 활성 결정
1. 캔버스 분해의 강도에 의한 토양의 생물학적 활성 결정 (Mishustin, Vostrov 및 Petrova의 방법)
2. 이산화탄소 방출에 대한 토양의 일반적인 미생물 활성 측정
3. 토양의 암모니아화 활성 측정
4. 미생물의 가암모니아 활성 측정
5. 토양의 질화 활성 측정
6. 탈질 토양 활성 측정
7. 미생물의 질소 고정 활성 측정
14장. 식물의 뿌리 영역과 뿌리에 대한 박테리아 연구
1. Krasilnikov 방법을 사용하여 근권에서 박테리아 계산
2. E.에 따른 연속 뿌리 세척 방법에 의한 근권 및 뿌리 미생물총의 고려 3. Tepper
3. 결절 박테리아의 순수 배양 분리, 토양의 정량적 계산, 활성 및 독성 결정
15장. 세균 제제 분석
16장. 사료의 미생물학
1. 곡물의 착생 미생물과 사료 저장 중 변화
2. 사일로 분석
3. 효모 사료
제17장. 우유 및 유제품의 미생물군
1. 우유의 세균학적 분석
2. 순수 배양액에서 유산균을 분리하는 방법
3. 버터 미생물과의 친분
문헌 색인
성적 증명서
1 교육과학부 러시아 연방연방 교육청 모스크바 주립 환경 공학 대학교 N.A. Kustova 2005년 모스크바 미생물학 실험실습
2 미생물학의 실험실 워크샵은 "미생물학 및 생명 공학 기초"분야의 전문 분야 3207 및 3302 학생과 "환경 및 산업 미생물학"분야의 환경 및 산업 생명 공학과 학생들을 대상으로합니다. 워크숍은 세 부분으로 나뉩니다. 첫 번째 섹션은 일반 미생물학 문제에 전념합니다. 이 섹션의 작업에서는 다양한 미생물 그룹의 형태학적 구조, 현미경 검사 방법, 미생물 접종 기술, 살균 방법 및 미생물의 정량적 계산 방법을 연구합니다. 두 번째 섹션에는 유기산, 알코올, 항생제, 효소의 다양한 물질을 얻기 위해 생명 공학에서 미생물을 사용하는 작업이 포함되어 있습니다. 세 번째 섹션의 작업에서는 생태 미생물학에 대한 질문이 연구됩니다. 일부 연구는 지구 생지화학적 순환에서 미생물의 역할을 보여주고 나머지는 생명공학적 환경 보호 문제에 전념합니다. 각 주제에는 사용된 방법, 작업 수행 절차, 작업에 대한 보고서의 내용 및 제어 질문을 설명하는 이론적인 소개와 실제 부분이 포함되어 있습니다. 2
3 머리말 미생물학에 대한 실험실 워크샵은 "미생물학 및 생명 공학 기초"분야의 전문 분야 3207 및 3302의 3 학년 학생과 환경 및 산업 생명 공학과의 4 학년 학생을 대상으로합니다. " "환경 및 산업 미생물학"분야에서. 실험실 워크샵은 "실험실 작업을 위한 방법론적 지침", ed. 부서 창설 이후 "미생물 생산 공정 및 장치" 부서에서 사용된 PI Nikolaev. 미생물 산업을 위한 엔지니어를 교육하면서 미생물학을 가르치는 데 수석 연구원인 Ph.D. N.V. 포모체바. 그녀의 지도력하에 방법론적 지침이 작성되었습니다. 아카데믹부서: M.A. Boruzdina, I.E. Lomova, N.A. Kustova, T.A. Makhotkina 및 K.A. Solovieva. 변화 과정새로운 전문 환경 엔지니어에 따라 미생물학의 과정을 확장하고 환경 보호의 생명 공학 방법에 대한 작업을 보완해야 할 필요성이 생겼습니다. 실험실 워크샵은 세 부분으로 나뉩니다. 첫 번째 섹션은 일반 미생물학에 전념합니다: 미생물의 형태, 연구 방법, 미생물 작물 기술, 미생물의 정량적 회계 방법. 두 번째 섹션에서는 산업에서 미생물 사용의 몇 가지 예를 다룹니다. 세 번째 섹션에서는 미생물의 생태 문제, 지구적 요소 순환에서의 역할 및 환경 보호의 생명 공학 방법에 대한 문제를 다룹니다. N.V. Zyabreva 학과의 대학원생과 선임 연구원이 이번 워크숍 준비에 참여했습니다. E.S. 고르시나. 저자는 Assoc에 깊은 감사를 표합니다. 학과. 미생물학 MSU N.N. Kolotilova는 귀중한 의견과 조언, 선임 연구원에게 감사를 표합니다. P.P. Makeev는 텍스트 및 설명 자료의 형식 지정에 도움을 주었습니다. 삼
4 4 미생물 실험실에서의 작업에 대한 일반 규칙 실험실에서의 작업 및 행동 규칙 작업 및 행동 규칙 미생물 실험실화학 실험실의 작업 규칙과 공통점이 많지만 고유 한 특성이 있습니다. 대부분의 경우, 미생물학자는 미생물의 순수한 배양, 즉 미생물 배양으로 작업합니다. 한 속, 종 및 계통의 미생물. 모든 주변 물체와 공기에는 외래 미생물이 있기 때문에 미생물의 연구 배양 또는 사람 자신의 오염을 피하기 위해 특별한 작업 방법이 사용됩니다. 이를 위해 배양 배지, 접시, 기구를 살균하고 실험실과 작업장을 깨끗하게 유지하며 미생물 작업 시 특정 규칙을 준수합니다. 실험실에는 불필요한 물품이 없어야 합니다. 습식 청소는 정기적으로 수행해야 합니다. 실험실의 다양한 표면은 주기적으로 소독됩니다. 소독은 소독입니다. 현장에서 전염병의 병원체 파괴 외부 환경... 이렇게 하려면 0.5~3% 클로라민 용액 또는 35% 페놀(탄산) 용액을 사용하십시오. 작업대는 70% 에틸 또는 이소프로필 알코올 용액으로 소독해야 합니다. 공기 소독은 간단한 환기(최소 최소)로 이루어집니다. 공기를 소독하는 더 효과적인 방법은 살균 램프를 사용하여 방에 자외선을 조사하는 것입니다. 자외선 조사는 특히 상자를 살균하는 데 사용됩니다. 복싱은 순수한 배양액의 접종, 페트리 접시에 미생물의 정량적 등록 및 특히 깨끗한 조건이 필요한 기타 작업을 위한 특별한 작은 방입니다. 작업하기 전에 상자에 분 동안 조사됩니다. 테이블은 알코올로 닦고 벽과 바닥은 주기적으로 씻습니다. 상자 대신에 실험실에는 살균 램프로 살균되는 층류 캐비닛(그림 1)을 장착할 수 있습니다. ~에
작동 중에 팬이 켜져 살균 필터를 통과하는 살균 공기의 층류를 생성합니다. 미생물 실험실의 주요 장비는 다음을 포함합니다: 현미경, 미생물 성장을 위한 온도 조절기, 살균 장비(오토클레이브 및 건조 캐비닛), 원심분리기, 증류기, 미생물의 박물관 배양물을 저장하기 위한 냉장고, 유리 제품 및 시약을 배치하기 위한 캐비닛, 필요한 기구(광전 비색계, pH 측정기 등). 각 학생은 덮개로 덮인 현미경, 세균 루프, 슬라이드 및 덮개 유리, 멸균 피펫, 알코올 버너, 여과지 스트립, 유리 위의 마커, 소독액이 담긴 용기를 배치할 작업장을 할당받습니다. . 작업의 수행과 직접적인 관련이 없는 것은 테이블 위에 없어야 합니다. 미생물학의 실험실 수업에서는 안전 규칙을 따라야 합니다. 5
6 6 실험실에서의 안전에 대한 간략한 정보 미생물학적 실습에서는 화학 유리로 만든 유리 제품이 널리 사용됩니다. 작업할 때 주의해야 합니다. 깨진 접시 조각을 조심스럽게 제거하십시오. 분석에서 알칼리와 산의 강한 용액이 종종 사용됩니다. 이러한 물질은 손과 옷의 피부에 해롭기 때문에 세심한주의를 기울여 작업해야합니다. 실수로 산을 엎지른 경우 다량의 소다로 덮고 물로 여러 번 헹굽니다. 흘린 알칼리는 철저히 닦아내고 그것이 묻은 물체는 약한 아세트산 용액으로 처리해야합니다. 산이나 알칼리가 사람의 피부에 닿으면 즉시 다량의 물로 씻어내야 합니다. 미생물 연구실은 살아있는 미생물을 다룬다. 주요 작업은 무균으로 수행됩니다. 외래 미생물로 오염되어서는 안되는 미생물의 한 배양으로 작업하십시오. 작물의 오염을 방지하기 위해 특수 살균 방법이 사용됩니다. 실험실을 깨끗하게 유지하는 것도 중요합니다. 미생물 배양물이 들어 있는 그릇을 열어 두어서는 안 됩니다. 미생물의 바이오매스는 분석에 필요하지 않은 경우 오토클레이브에서 멸균한 후에만 버립니다. 미생물의 작물은 가스나 알코올 버너의 화염 근처에서 생성되므로 화상에 주의해야 하며 무엇보다 긴 머리를 조심스럽게 들어올려야 합니다. 버너는 필요할 때만 타야 합니다. 파종 중 면마개, 알코올 램프 또는 종이에 실수로 불이 붙으면 수건으로 불을 끄십시오. 더 큰 화재의 경우 소화기가 사용됩니다. 중고 피펫, 슬라이드, 커버슬립, 주걱 등 소독액이 담긴 용기에 담았습니다. 학생들은 특히 환경 물체에서 미생물을 분리하는 작업에서 항상 안전하지 않을 수 있는 미생물을 다루고 있음을 지속적으로 기억해야 합니다. 따라서 수업이 끝나면 학생들은 작업장을 정리하고 비누와 물로 손을 씻어야 합니다.
7 정전이 발생하면 전기 제품과 중앙 전원 공급 장치를 끕니다. 섹션 1. 일반 미생물학 주제 1. 미생물의 형태 및 연구 방법 미생물학은 미시적 차원을 갖는 유기체를 연구합니다. 즉. 마이크로미터 또는 마이크로미터의 분수 단위로 측정됩니다. 1마이크로미터는 10-6미터와 같으며 미크론으로 축약됩니다. 미생물은 집중적인 신진대사를 특징으로 하며 다양한 화학적 변형을 수행할 수 있습니다. 다른 미생물은 구조와 수행하는 생화학 적 과정이 다릅니다. 그것들을 하나의 그룹으로 묶는 것은 크기가 작을뿐만 아니라 재배 및 연구 방법의 공통성 때문입니다. 미생물의 구조, 모양, 모양, 크기, 즉 미생물의 구조를 연구합니다. 미생물의 형태를 연구하려면 현미경을 사용하십시오. 현대 광학현미경에서 볼 수 있는 가장 작은 입자는 빛의 파장의 1/3 이상입니다. 0.4미크론에서 0.7미크론 사이의 파장을 갖는 가시광선 부분의 사용과 관련된 0.2미크론 이상. 현미경 장치 Fig. 도 2는 연구 및 교육현장에서 널리 사용되고 있는 현미경 MBI-3의 모습이다. 피검체인 프렙을 무대 위에 올려놓고 조명기에서 나오는 광선에 의해 아래에서 조명을 받아 거울에 떨어지면서 콘덴서를 통과하여 프렙에 초점을 맞춥니다. 현미경의 주요 부품: 접안렌즈, 튜브, 대물렌즈가 있는 회전식 부착물, 준비용 클램프가 있는 스테이지, 집광기, 초점을 맞추기 위한 매크로 및 미세 나사, 그리고 마지막으로 이 모든 것이 장착되는 삼각대. 7
8 현미경을 사용하기 전에 조명 설치의 정확성을 확인합니다(Kohler에 따름). 이를 위해 전구로 램프 홀더를 움직이면 실의 선명한 이미지를 얻습니다 8
9 이 이미지가 콘덴서의 구멍을 완전히 채우도록 콘덴서의 완전히 닫힌 다이어프램에 있는 램프의 백열. 조명기의 다이어프램을 닫은 후 콘덴서의 다이어프램을 열고 콘덴서를 움직여 현미경의 시야에서 조명기의 다이어프램의 선명한 이미지를 얻습니다. 밝은 빛이 눈을 가리지 않도록 먼저 램프의 필라멘트를 줄입니다. 그리고 마지막으로 조리개 구멍의 이미지가 시야의 중앙에 설정되고 조명기의 조리개가 열려 시야 전체가 조명됩니다. 현미경은 두 단계의 배율이 있는 광학 시스템입니다. 첫 번째 배율은 대물렌즈에 의해 수행되고 두 번째 배율은 접안렌즈에 의해 수행됩니다. 렌즈는 접안렌즈를 통해 보이는 물체의 확대된 역상을 제공합니다. 결과적으로 관찰자의 눈은 물체의 매우 확대된 역상을 봅니다. 따라서 물체가 왼쪽으로 움직이는 것은 눈으로 오른쪽으로 움직이는 것으로 인식됩니다. 현미경의 전체 배율, 즉 현미경으로 물체를 볼 때의 배율은 대물렌즈와 접안렌즈의 배율의 곱으로 정의됩니다. 대물렌즈는 10, 40, 60, 90배, 때때로 접안렌즈를 제공합니다. 쌍안 부착물을 사용하면 추가 배율을 제공합니다. 그림에서. 도 3은 현미경의 광학 시스템의 개략도를 도시한다. 대물렌즈 O는 평면 Z에서 물체 A의 실제 반전된 이미지 A를 형성합니다. 렌즈에 의해 제공된 이미지는 접안렌즈 E의 도움으로 더욱 확대됩니다. Z가 접안렌즈 E의 초점에 있기 때문에 관찰자는 확대된 허상 A를 다음에서 봅니다. 일반적으로 눈에서 25cm 떨어진 평면 X, 즉 근거리 시력에 가장 편리한 거리에서. 이미지 형성 메커니즘에 대한 그러한 아이디어는 가장 높은 학위회절 및 기타 여러 요인의 영향을 무시하기 때문에 단순화됩니다. 현미경으로 작업하면서 학생들은 배율로 미생물 제제를 연구합니다. 광학현미경의 최고배율은 3000배입니다. 그러한 현미경으로 볼 수 있는 가장 작은 입자 크기, 9
10은 스펙트럼의 가시 부분의 파장으로 인한 0.2μm와 같습니다. 미생물의 형태 미생물의 세계는 하나의 체계적인 그룹을 구성하지 않는 매우 다양한 형태를 포함합니다. 미생물학의 주요 대상은 박테리아이지만 그 외에도 미생물 학자들은 효모, 곰팡이, 미세한 조류 및 일부 원생 동물도 연구합니다. 그림에서. 4는 미생물의 주요 그룹을 보여줍니다(원생동물 제외). 크기의 비율이 유지됩니다. 바이러스를 제외한 모든 생명체는 세포 구조... 세포 조직에 따라 원핵 생물과 진핵 생물로 나뉩니다. 십
11 진핵생물과 원핵생물의 주요 차이점은 핵과 기타 세포 구조를 세포질에서 분리하는 2차 공동의 존재입니다. 진핵 세포막의 내부 표면의 증가로 인해 전체 생명체의 진화에 비약을 가능하게 한 것은 2차 공동의 출현이었습니다. 이것은 확산 속도의 증가에 따라 막에서 발생하는 더 많은 수의 생화학 반응을 동시에 수행하는 것을 가능하게했습니다. 원핵생물은 방선균과 남조류를 포함한 박테리아입니다. 진핵생물은 모든 식물, 동물, 효모, 곰팡이, 원생동물입니다. 원핵 생물 중에서 고세균 그룹이 현재 구별되는데, 여기에는 메탄 생성 물질, 극도의 호염성 물질, 분자 유황을 산화 및 환원시키는 극도의 호열성 박테리아, 세포벽이 없는 써모플라즈마(thermoplasma)가 포함됩니다. 새로운 분할은 리보솜 RNA의 작은 스트레치에서 뉴클레오티드 서열의 비교를 기반으로 이루어졌습니다. 열하나
12 고세균은 세포벽, 지질 및 기타 생리학적 및 생화학적 특징의 구성이 다릅니다(예: CO 2 고정 메커니즘이 다릅니다). 따라서 세포 조직의 구조에서 고세균 (고세균의 새로운 명명법에 따라 고세균), 진균 (박테리아의 새로운 명명법에 따라) 및 진핵 생물 (새로운 명명법에 따라)의 3 그룹이 현재 구별됩니다. 유카리아). 작업 1. 박테리아의 현미경 연구 박테리아의 형태 이론 소개 이 미생물군은 자연계에서 가장 많고 널리 퍼져 있으며 산업적으로 매우 중요합니다. 미생물의 명명에는 동물학 및 식물학에서와 같이 이진 명명법이 사용됩니다. 이 명명법에 따라 각 종에는 두 개의 라틴어 단어로 구성된 이름이 있습니다. 첫 번째 단어는 속을 의미하고 두 번째 단어는 종류를 의미합니다. 속명은 항상 대문자로, 특정명은 소문자로 쓴다. 대부분의 박테리아 단세포 생물구형, 막대 모양 또는 나선형. 박테리아 중에는 소수의 사상체 형태가 있습니다. 박테리아는 매우 작으며 구형 박테리아의 세포 직경은 1 2 μm입니다. 박테리아는 분열에 의해 증식합니다(좋은 조건에서 분열은 몇 분 안에 일어납니다). 일부 박테리아는 이동합니다. 움직일 수있는 능력은 편모의 특별한 세포 소기관의 존재와 관련이 있습니다. 가장 단순한 모양은 구형 박테리아(구균)입니다. 그들은 단일 볼 또는 상호 연결된 볼 형태로 만납니다. 구형균은 분열 후 세포의 위치에 따라 단구균(단구균), 사구균(4개 결합), 사르신(8개 결합), 포도상구균(클러스터), 연쇄상구균(연쇄구균)으로 나뉩니다. 12
13 막대 모양의 박테리아는 박테리아의 가장 큰 그룹입니다. 그들은 끝이 둥글거나 뾰족한 원통형 셀 모양을 가지며 길이 대 너비 비율이 크게 다릅니다. 그것들은 단독으로 위치하거나 짧거나 긴 사슬을 형성할 수 있습니다. 막대는 일반적으로 수 미크론의 다양한 길이와 약 1 미크론의 너비를 가질 수 있습니다. 일부 막대 모양의 박테리아는 세포 내부에 특별한 포자를 형성합니다. 각 세포는 불리한 조건을 견디는 역할을하는 하나의 포자를 형성합니다. 포자는 적절한 조건(온도, 습도, 영양분)에서 발아하여 막대 모양으로 변합니다. 박테리아 포자의 저항성은 어떤 살아있는 유기체의 저항성보다 우수합니다. 예를 들어, 건초 간균 Bacillus subtilis의 포자는 100 ° C의 온도에서 3 시간 동안 견딜 수 있으며 이러한 포자 저항은 감염과 싸우기 어렵습니다. 꼬인 미생물은 세포의 곡률 정도와 회전 수가 다릅니다. 그들은 vibrios, spirillae 및 spirochetes로 나뉩니다. 박테리아에 하나의 불완전한 나선이 있는 경우 이를 비브리오(vibrio)라고 합니다. 박테리아에 여러 개의 나선형 컬이 있으면 스피릴라라고하며 많은 수의 작은 컬이있는 말린 모양의 미생물을 스피로헤타라고합니다. 사상세균은 원통형 또는 원반 모양의 세포로 구성된 사상균입니다. 일부 유형의 실은 수산화철 또는 망간염을 함침시킬 수 있는 점막으로 둘러싸여 있습니다. 용액에서 중금속이 축적되는 것은 일부 철 박테리아의 세포에서 발생합니다. 큰 사상세균 p. Beggiatoa는 세포에 유황을 축적합니다. 사상균은 일반적으로 바다와 민물에 서식하며 동물의 내장에서 부패하는 유기 잔류물에서도 발견됩니다. 시아노박테리아는 세포의 원핵 구조와 광합성을 수행하는 능력을 결합한 유기체의 큰 그룹을 포함합니다. 엽록소 a(녹색) 외에 시아노박테리아 세포 색소에는 피코시아닌 색소 13이 포함되어 있습니다.
14 파란색. 이러한 이유로 이전에는 청록색 조류라고 불렸습니다. 그들 대부분은 다세포 유기체로 길고 가장 자주 분지되지 않은 필라멘트(트리홈)입니다. 필라멘트의 세포는 공통 외벽에 의해 결합됩니다. 때때로 "매트"의 점액 축적이 형성됩니다. 복제는 실을 별도의 섹션으로 나누어 수행됩니다. 일부 종은 슬라이딩하여 움직입니다(p. Spirulina). 방선균(분지 박테리아, 복사 진균)은 길이가 수 mm이고 직경이 0.5-1.5 µm인 얇은 분지 필라멘트를 형성하는 원핵 미생물의 큰 그룹입니다. 그들은 형태학적으로 곰팡이와 유사한 독특한 미생물 그룹입니다(그림 5). 이 그룹의 대표자 중 상당 부분의 세포는 분기가 가능하며 이는 곰팡이의 특징입니다. 그러나 방선균의 분지 필라멘트의 길이는 수 밀리미터에 이르는 반면 곰팡이 균사체의 길이는 수 센티미터에 이릅니다. 곰팡이의 균사는 일반적으로 방선균의 필라멘트보다 몇 배 더 두껍습니다. 형태와 발달에 따라 방선균은 더 높은 형태와 낮은 형태로 나뉩니다. 가장 높은 것은 좋은 14를 가진 유기체입니다.
15개의 발전된 패혈증 또는 비 패혈증 균사체 및 특수 포자 형성 기관. 포자는 기중 균사체의 특수한 포자 함유 균사에 사슬 형태로 형성됩니다. 포자 형성 기관의 구조는 종에 따라 길거나 짧거나 직선 또는 나선형으로 다릅니다 (그림 6). 균사체의 존재와 포자 형성 기관의 구조로 인해 고등 방선균은 사상균과 유사합니다. 일부 방선균류는 어린 배양물에서만 균사체를 가지고 있으며, 이는 나이가 들면서 분해되어 막대 모양의 구균 세포를 형성합니다. 방선균류의 낮은 형태는 진정한 균사체가 없습니다. 균사체를 형성하는 능력은 세포가 분지하는 경향에서만 표현됩니다. 낮은 방선균류에는 예를 들어 Mycobacterium 속의 종들이 포함되며, 이들은 배양 연령에 따라 세포의 모양을 변화시키는 능력을 가지고 있습니다(그림 7). 이 속성을 다형성이라고 합니다. 고등 방선균류 중에서 Streptomyces 속의 종은 자연 환경에서 풍부하다는 면에서 선두를 차지합니다. 방선균은 과정에서 중요한 역할을 합니다 15
16 토양 형성 및 토양 비옥도 생성. 방선균은 다른 많은 미생물이 접근할 수 없는 복잡한 유기 화합물(셀룰로오스, 부식질, 키틴, 리그닌 등)을 파괴합니다. Streptomyces 속의 거의 모든 종은 항생제 특성을 가진 특정 폐기물을 형성합니다. 일부 종은 식물, 동물 및 인간의 질병의 원인 물질입니다. 박테리아의 주요 형태 외에도 보철물이라고 하는 파생물을 운반하는 줄기 및 신진 박테리아가 있습니다. (그림 8) 16
17 스티치의 기능이 다릅니다. 일부 박테리아에서는 번식을 위해, 다른 박테리아에서는 세포를 기질에 부착하는 역할을 합니다. 17
18 18 실제 부분 작업의 목적은 박테리아 대표자의 형태를 연구하는 것입니다 작업 수행 절차 첫 번째 작업을 수행하고 학생들은 현미경 사용법을 배우고 박테리아 대표자의 완성 된 준비물을 살펴본 다음 독립적으로 준비합니다 살아있는 박테리아를 관찰하고 현미경으로 관찰합니다. 첫째, 학생들은 박테리아의 완성된 고정 준비를 현미경으로 관찰합니다. 고정 제제는 수성 매질에 현탁되고 유리 슬라이드에서 건조되고 아닐린 염료로 염색되는 미생물입니다. 학생들은 스스로 몇 가지 살아있는 미생물을 준비합니다. 이를 위해 작은 수돗물 한 방울을 깨끗한 유리 슬라이드에 적용하고 소량의 연구 된 미생물을 하소 및 냉각 된 세균 루프로 도입하고 철저히 저어주고 덮개 유리로 덮습니다. 과도한 물은 여과지로 제거됩니다. 표본을 스테이지에 놓고 클램프로 고정합니다. 첫째, 접안렌즈를 통해 보고 매크로스크류를 회전시키면 10배 대물렌즈로 낮은 배율에서 물체의 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다. 그런 다음 현미경은 40x 대물렌즈로 고배율로 전송됩니다. 나사의 회전은 하강이 너무 날카로우면 렌즈가 대물렌즈에 의해 찌그러질 수 있으므로 주의해서 수행해야 합니다. 현미경 검사를 할 때 특히 고배율에서 현미경은 물체의 전체 깊이를 포착하지 못하므로 마이크로 나사를 사용하여 튜브를 점차 낮추면 물체가 먼저 위에서 보인다는 점을 염두에 두어야 합니다. , 광학 섹션에서. 1. 미생물의 고정 제제 보기. 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 젖산 발효제; 세포의 모양은 구형 구균입니다. 세포는 사슬로 연결되어 있습니다. 젖산 제품을 얻는 데 사용됩니다.
19 Lactobacillus acidophilum 막대 모양 박테리아; 젖산 발효의 원인 물질. 젖산 제품을 얻는 데 사용됩니다. 아세토박터 아세티는 에탄올을 아세트산으로 산화시키는 막대 모양의 박테리아입니다. 식용 식초를 만드는 데 사용됩니다. Streptomyces griseus actinomycete, 얇은 분지 필라멘트 형태의 세포 모양; 항생제 스트렙토마이신의 생산자. Saccacharopolyspora erythrae 방선균류, 얇은 분지 필라멘트 형태의 세포 모양; 항생제 에리스로마이신의 생산자. 2. 얇은 이동 막대 형태의 Bacillus subtillis 세포의 살아있는 제제 보기; 포자를 형성한다. 효소 제제의 생산자. 스피루리나 플라텐시스 시아노박테리아; 서로 밀접하게 인접한 원통형 셀로 구성된 단일 실 형태의 셀 모양; 슬라이딩 모션이 있습니다. 식품 첨가물로 사용됩니다. 보고서 내용 1. 미생물의 라틴어 이름. 2. 세포 형태(현미경의 배율과 세포 크기의 비율을 보여주는 그림 제공). 3. 산업계에서 연구된 박테리아의 사용. 통제 질문 1. 현미경 디자인을 설명하십시오. 2. 현미경의 배율을 결정하는 방법은 무엇입니까? 3. 박테리아 세포의 모양은 무엇입니까? 4. 방선균 형태의 특징을 말하십시오. 5. 당신은 박테리아의 어떤 대표자를 알고 있으며 그 대표자는 무엇입니까? 실용적인 의미? 작업 2. 진핵 미생물의 형태 이론 소개 19
20 미생물학자들이 연구하는 진핵 미생물에는 진균, 효모, 미세조류 및 일부 원생동물이 포함됩니다. 균류의 형태 균류는 사상 세포를 가진 엽록소가 없는 미생물입니다. 그들이 형성하는 길고 가지가 있는 필라멘트를 균사라고 합니다. 균사는 함께 균사체를 형성합니다. 크기면에서 곰팡이 균사는 방선균보다 훨씬 큽니다. 많은 곰팡이의 균사체는 격막(격벽 균사체)으로 나뉘지만 다른 유형의 격막은 없습니다. 생명 공학에서 곰팡이는 주로 생산자로 사용됩니다. phycomycetes, 유대류 및 불완전한 버섯의 일부 대표자는 "곰팡이 곰팡이"라고합니다. 조밀한 기질에서 곰팡이는 녹색, 황색, 검정색 또는 흰색의 둥글고 푹신한 거미줄 모양의 면화 모양 또는 가루 집락을 형성합니다. 곰팡이 식민지는 많은 수의 균사로 구성됩니다. 대부분의 균사는 공기 중에서 발생하며 일부는 기질의 두께로 발생합니다. 분생포자낭은 종종 균사 상에 형성되며, 포자는 포자낭 내부 또는 사슬로 배열된 외포자의 형태로 형성된다. 분생포자 또는 분생포자는 다음과 같은 역할을 합니다. 무성 생식(그림 10). 유리한 조건에 들어가는 분생자는 균사체로 발아합니다. 곰팡이는 본질적으로 매우 널리 퍼져 있으며 강력한 효소 장치를 가지고 있습니다. 따라서 그들은 자연에서 유기 화합물의 주요 파괴자입니다. 곰팡이는 또한 유기산, 항생제 및 효소 생산을 위해 산업계에서 널리 사용됩니다. 스물
21 효모 형태 효모는 실용적으로 매우 중요한 단세포 현미경 진균의 별도 그룹입니다. 효모 세포는 큰 원형 또는 타원형 세포이다(그림 11). 일부 효모는 슈도균사체라고 하는 기본 균사체를 형성할 수 있습니다. 세포 크기는 길이가 3~10µm, 너비가 2~8µm입니다. 대부분의 효모는 출아로 번식합니다. 게다가 21시에
세포 표면에 신장의 작은 돌출부가 나타나며(때로는 하나가 아니라 여러 개), 점차 크기가 증가하고 마침내 신장을 생성하는 세포에서 분리됩니다. 모세포에서 분리된 신장은 새로운 효모 세포가 됩니다. 일부 효모는 분열에 의해 번식합니다. 큰 액포는 살아있는 효모(원형질)의 미세 입자 함량에서 명확하게 볼 수 있습니다. 액포는 세포 수액으로 채워진 원형질 내부의 공동입니다. 그것은 전해질, 단백질, 탄수화물 및 물에 용해된 효소로 구성됩니다. 젊은 효모 세포에서 원형질은 균질하며 발달 후기 단계에서 대사 산물로 세포 수액으로 채워진 원형질에 액포가 나타납니다. 영양 배지가 고갈되면 많은 효모에서 포자가 발생합니다. 일부 효모 종에서 포자는 둥글고 매끄러운 껍질로 덮여 있습니다. 유리한 조건에서 포자가 발아합니다. 효모는 자연에 널리 퍼져 있습니다. 그들은 포도, 다른 열매와 과일, 우유, 물과 흙, 인간의 피부에서 발견됩니다. 많은 효모가 알코올 발효를 수행하고 빵집, 포도주 양조 및 양조에서 알코올 생산에 사용됩니다. 22 원생동물의 형태 원생동물은 동물계의 단세포 유기체입니다. 미생물 중 가장 복잡하게 배열되어 있으며 다세포 동물의 원시 기관을 가지고 있습니다. 그들 중 일부는 입과 항문, 수축성 및 소화 액포를 가지고 있습니다. 원생동물은 무성생식(세포 분열에 의해)과 유성생식을 한다. 원생동물의 분류는 이동 방식을 기반으로 합니다. 1. Sarcodes. 그들은 pseudopodia 또는 false 다리를 사용하여 음식을 움직이고 잡습니다. 아메바가 대표적이다. 아메바의 크기는 미크론을 초과하지 않습니다.
23 2. 편모. 그들은 밀도가 높은 원형질막을 가지고 있으며 편모의 도움으로 움직입니다. 편모의 토양 형태는 매우 작고(2 5 µm), 물 형태는 큽니다(최대 20 µm). 대표적인 대표자는 유글레나입니다. 3. 모양체. 가장 고도로 조직화된 원생동물. 셀 크기는 20~80마이크론입니다. 전형적인 대표자는 생선 치어 먹이를 위해 재배되는 infusoria-shoe Paramecium입니다. 4. 포자동물. 고정된 형태. Plasmodium malaria와 같은 많은 병원체. 원생동물은 자연에 널리 퍼져 있습니다. 그들은 수역, 미사 및 토양에서 발견됩니다. 자연에서 원생동물의 의미는 매우 다양합니다. 그들은 다양한 동물의 위장관에 살고 식물성 식품의 소화에 참여하고 토양의 유기 잔류 물의 광물화에 참여하며 처리 시설의 생물 군집의 중요한 부분이기도합니다. 박테리아와 부유 물질을 먹고 물을 정화하는 데 도움이 됩니다. 가장 간단한 것은 지표의 기능을 수행합니다. 특정 형태의 개발로 폐수 처리의 품질을 판단 할 수 있습니다. 따라서 활성 슬러지에서 아메바가 우세하고 섬모가 없다는 것은 처리 시설의 성능이 좋지 않음을 나타냅니다. 섬모 Tetrahymena는 널리 사용됩니다 초기 평가독성. 다양한 유형의 원생동물이 그림 1에 나와 있습니다. 12. 조류의 형태 조류는 식물 유기체의 큰 그룹입니다. 그들 모두에게 공통적 인 엽록소의 존재와 그에 따른 광독립 영양, 에너지를 사용하여 유기물을 합성하는 능력 햇빛및 이산화탄소. 많은 조류에서 엽록소의 녹색은 다른 색소에 의해 가려집니다. 그 중 미생물에 기인하는 매우 작은 단세포 및 다세포 형태가 있으며 23가지가 있다.
24 바다와 바다에 서식하며 때로는 거대한 크기에 도달하는 다세포 생물 미생물학의 연구 대상은 미세한 크기의 조류입니다. 그들은 다양한 형태를 가지고 있으며 육지와 수중 환경 모두에서 산다(그림 13). 24
25 실용적인 부분 이 작업의 목적은 다양한 진핵생물 그룹의 대표자의 형태를 연구하는 것입니다. 작업 수행 절차 학생들은 곰팡이, 효모, 조류 및 원생 동물의 대표자의 살아있는 준비를 독립적으로 준비합니다. 그것들은 x40 대물렌즈로 현미경화되고 현미경의 배율 표시로 스케치됩니다. Aspergillus niger 곰팡이는 격막이 있는 균사체 형태로 세포를 형성합니다. 일부 균사는 포자가 있는 분지되지 않은 분생포자를 갖는다. 분생포자는 단세포이고 구형으로 부풀어 오르고 부풀어 오른 표면에는 짧은 파인트 모양의 세포(교미판)가 있으며 각각은 검은색 분생포자의 사슬을 따라 끈으로 묶여 있다. 그것은 유기산과 효소를 얻는 데 사용됩니다. Penicillium chrysogenum 균사는 격막이 있습니다. 일부 균사에는 포자가 있는 분지된 분생포자가 있다. 분생포자는 전체 분지된 분생포자경의 끝에 형성된다. 항생제 페니실린을 얻는 데 사용됩니다. 25
26 효모 Saccharomyces cerevisiae 단일 효모, 타원형 및 원형 세포; 발아로 번식합니다. 그들은 양조, 제빵, 알코올 생산에 사용됩니다. 자연에서 그들은 열매 및 기타 과일의 표면에서 발견됩니다. Saccharomyces vini 세포는 타원형이며 원형입니다. 신진에 의해 번식; 싹이 트고 나면 얼마 동안 분리되지 않아 작은 "잔가지"를 형성합니다. 그들은 포도주 양조에 사용됩니다. Rhodotorula glutinis 세포는 타원형입니다. 세포는 단일입니다. 발아로 번식합니다. 그들은 세포의 카로티노이드 함량으로 인해 주황색으로 착색됩니다. 석유 탄화수소를 탄소원으로 사용하는 환경에서 자랄 수 있습니다. 사료 효모로 사용. 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis) 효모는 타원형과 매우 긴 세포를 가지고 있으며 "가성 균사체"를 형성합니다. 탄화수소를 탄소원으로 하는 광물 환경에서 자랄 수 있습니다. 사료 효모로 사용. 산업적 규모에서 그들은 알코올과 종이 생산에서 나오는 폐기물로 재배됩니다. 조류 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)는 둥근 세포(직경 5-10 미크론)를 가진 미세한 녹조류입니다. 모세포 내부에서 4에서 32의 양으로 형성되고 막이 파열 된 후 방출되는자가 포자에 의해 번식합니다. 그들은 사료 단백질을 얻기 위한 대량 재배와 폐쇄 시스템(잠수함, 우주 정거장등.). 세네데스무스 sp. 녹조류 그룹에 속한다. 타원형 세포 모양을 가지고 있습니다. 외부 세포는 종종 지적됩니다. 세포는 4개로 연결되어 있습니다. 그것은 식품 단백질을 얻는 데 사용됩니다. 26
27 원생동물은 폭기조의 활성 슬러지에서 준비합니다. 발견된 원생동물의 형태를 연구하고 스케치합니다. 보고서 내용 4. 미생물의 라틴어 이름. 5. 세포 형태(현미경의 배율과 세포 크기의 비율을 보여주는 그림 제공). 6. 산업에서 연구된 미생물의 사용. 대조 질문 1. 대표 균류의 세포 모양과 그 실제 사용을 설명하십시오. 2. 효모 세포의 모양을 설명하십시오. 대표자의 이름을 지정하고 실제 사용에 대해 이야기하십시오. 3. 미세조류의 형태와 활용에 대해 알려주세요. 4. 가장 단순한 대표자의 이름을 지정하고 생명 공학에서의 응용에 대해 이야기하십시오. 작업 3. 미생물의 형태를 연구하는 방법 박테리아의 형태를 연구하는 가장 일반적인 방법은 미생물의 순수한 배양 또는 시험 샘플에서 준비된 고정 제제의 현미경 검사입니다. 살아있는 상태의 미생물 연구는 더 큰 형태의 연구와 세포 운동성의 관찰에 사용됩니다. 미생물 고정 제제의 제조 미생물 고정 제제를 제조하기 위해서는 먼저 도말을 제조하고 건조하고 고정한 다음 염색합니다. 얼룩은 완벽하게 깨끗한 유리 슬라이드에 준비됩니다. 에틸 알코올, 같은 부피의 알코올과 에테르의 혼합물 및 기타 27로 유리를 탈지할 수 있습니다.
28 액체. 안경의 기름기를 제거하는 가장 쉽고 편리한 방법은 세제로 유리의 양쪽을 닦는 것입니다. 비누는 마른 면봉이나 냅킨으로 유리에서 제거됩니다. 한천 배지에서 자란 박테리아 콜로니에서 도말을 만들 때 먼저 물이나 식염수 한 방울을 탈지 유리에 적용합니다. 그런 다음 세균 루프가 버너 화염에서 점화됩니다. 그 후, 튜브 내벽의 루프를 냉각시킨 후, 한천이 없는 콜로니의 일부를 루프로 포획한다. 배양 루프를 유리 위의 한 방울의 물 또는 식염수에 넣고 2 3 원을 그리며 움직입니다. 일부 박테리아는 액체에 부유합니다. 루프에 남아있는 과도한 박테리아는 버너 화염에서 연소되어 루프를 붉게 가열합니다. 그런 다음 냉각 루프로 유리에 현탁액을 한 방울 바르십시오. 도말 영역은 직경이 1.5-2cm 여야하며 도말은 재료가 고르게 분포되어 얇아 야합니다. 액체 영양 배지에서 자란 배양물에서 도말이 준비된 경우 동일한 무균 규칙을 준수하면서 루프 또는 피펫으로 배양물을 한 방울 떨어뜨려 탈지 유리의 중앙에 적용합니다. 배양액이 남아 있는 피펫을 소독액이 담긴 용기에 담급니다. 물방울은 세균 루프가 있는 유리 위에 고르게 분포됩니다. 루프를 버너 화염에 태우고 삼각대 또는 유리에 놓습니다. 도말은 공기 또는 따뜻한 공기 흐름에서 건조되어 버너 화염 위의 높은 세로 늑골에 의해 유지됩니다. 도말의 경계는 유리 뒷면에 왁스 연필로 윤곽을 그어 놓았고, 도말의 측면에는 유리의 끝 중 하나에 준비 번호를 넣습니다. 이 표시를 통해 유리의 얼룩 위치를 쉽게 탐색할 수 있습니다. 건조 얼룩이 고정됩니다. 고정은 다음과 같은 목표를 가지고 있습니다: 1) 약물을 안전하게 만드는 세균을 죽이는 것 추가 작업; 2) 페인팅 및 물로 헹굴 때 씻겨 나가지 않도록 유리에 미생물을 부착하십시오. 3) 페인트 수용성을 향상시킵니다. 28
29 거의 모든 미생물에 적합한 가장 간단한 방법이자 실제로 가장 널리 사용되는 방법은 버너 화염에 고정하는 것입니다. 이를 위해 슬라이드는 버너 화염의 가장 뜨거운 상부 부분을 통해 3-4회 통과되어 제제의 과도한 과열을 방지하여 단백질 변성 및 박테리아의 구조 및 형태 파괴를 일으키지 않습니다. 단순 미분 도장 방법과 복잡한 미분 도장 방법을 구별하십시오. 단순 염색은 시험 물질에서 미생물을 검출하고 그 수, 모양 및 위치를 결정하는 데 사용됩니다. 단순 염색은 단일 아닐린 염료를 제제에 적용하는 것으로 구성됩니다. 대부분의 경우 레드 푹신은 이러한 목적으로 사용되며 메틸렌 블루(Leffler's blue) 블루의 알칼리성 용액도 사용됩니다. 염색 기술: 잘 고정된 표본을 욕조 위의 유리 다리에 위쪽으로 번지게 배치합니다. 이 페인트 중 하나는 피펫이나 스포이드로 얼룩 표면에 적용됩니다. Fuchsin은 1~3분 동안 얼룩에 유지되고 파란색은 3~5분 동안 유지됩니다. 페인트는 번짐에서 배출되고 준비는 물로 씻고 공기 중에서 말리거나 여과지로 조심스럽게 닦아냅니다. 침지 오일 한 방울을 건조된 도말에 바르고 준비물을 현미경 스테이지에 놓고 투과광에서 침지 대물렌즈(90)로 현미경으로 관찰합니다. 박테리아를 염색하는 차등 방법. 정교한 염색 기술은 다양한 유형의 미생물을 식별하고 구별하는 데 필수적입니다. 그것들은 미생물 세포의 물리화학적 구조의 특성을 기반으로 하며 세포 구조에 대한 상세한 연구 및 일부 염료와 관련된 독특한 특징의 식별에 사용됩니다. 이러한 방법은 얼룩을 여러 페인트로 염색하고 알코올, 산 등을 사용하여 매염제 또는 탈색제로 추가 처리합니다. 이러한 방법에는 박테리아를 구별하는 가장 중요한 염색 방법인 그람 염색이 포함됩니다. 이 방법은 29
박테리아가 알코올에서 염료 또는 변색을 유지하는 능력은 세포벽의 화학 구조와 관련이 있습니다. 세포벽의 구조에 따라 모든 박테리아는 1) 그람에 따라 염색되는 그람 양성균과 2) 그람에 따라 염색되지 않는 그람 음성균의 두 그룹으로 나뉩니다. 그람염색에 대한 태도는 세균의 매우 중요한 감별특성으로서 특성화할 때 반드시 언급해야 하며 분류학적 특징으로 작용한다. 30 그람 염색 기법 젠티안 바이올렛이 미리 함침된 여과지 스트립을 고정된 도말 위에 놓습니다. 스트립에 수돗물을 3~5방울 떨어뜨립니다. 1-2분 후 핀셋으로 종이를 제거하고 Lugol 용액을 제제에 붓습니다. 30초 1분 후, Lugol 용액을 부었다. 96O 알코올 몇 방울을 적용합니다. 회자색 줄무늬가 사라질 때까지 1분간 변색시켰다. 준비물은 물로 씻습니다. Fuchsin을 도말에 붓고 12분간 유지합니다. 페인트를 배수하고 준비물을 물로 씻고 여과지로 건조시킵니다. 침지 시스템이 있는 현미경. 그람 양성균은 보라색-청색(예: 부티르산 발효봉인 Clostridium pasteurianum)으로, 그람 음성균은 분홍색-적색으로 변합니다(E. coli Escherichia coli). 이러한 전통적인 그람 염색 기술 외에도 염색 없이 그람 분화를 위한 빠르고 쉬운 방법이 있습니다. 박테리아 세포(바람직하게는 1-2일)를 유리 슬라이드의 3% KOH 방울에 루프에 넣고 원을 그리며 교반한 다음 58초 후에 루프를 급격히 올립니다. 그람 음성 박테리아의 현탁액은 점성이 되어 루프 뒤에서 늘어나 점액을 형성합니다. 그람 양성 박테리아는 알칼리 방울에 고르게 분포되어 있습니다(물에서와 같이). 점액의 형성이 60초 이내에 관찰되지 않으면 반응은 음성으로 간주됩니다. 점도의 증가는 용액에서 그람 음성균의 세포벽이 용해되어 발생합니다.
31 알칼리 및 DNA 방출. 염색을 하지 않은 그람에 따른 세균 감별법은 예비 진단이나 그람 양성균과 그람 음성균의 집락 비율을 대략적으로 계산할 때만 사용해야 합니다. methylene blue 염색에 의한 살아있는 세포와 죽은 세포의 검출 methylene blue 용액으로 염색하여 살아있는 세포와 죽은 세포의 수를 확인할 수 있습니다. 이 방법은 미생물의 살아있는 세포와 죽은 세포의 다른 투과성을 기반으로 합니다. 죽은 세포의 세포 투과성이 손상되어 염료가 세포질 막을 자유롭게 통과하여 원형질에 흡착됩니다. 현미경으로 보면 죽은 세포는 파란색으로, 살아있는 세포는 무색 또는 옅은 파란색입니다. 착색은 다음과 같이 수행됩니다. 2 % 메틸렌 블루 용액 한 방울을 유리 슬라이드에 바르고 덮개 유리로 덮고 여분의 페인트를 여과지로 제거합니다. 약물을 현미경으로 관찰하면 10개의 시야에서 살아있는 세포와 죽은 세포의 수가 계산됩니다. 죽은 세포의 수는 %로 표시됩니다. 예: 한 시야의 평균 살아있는 세포 수는 10개, 한 시야의 평균 죽은 세포 수는 5개, 총 수세포의 한 시야에 있는 세포 100% 5 세포 X X 33.3% 15 따라서 연구된 미생물 현탁액에서 죽은 세포의 수는 33.3%였습니다. 세포 크기 결정 미생물의 세포 크기를 결정하려면 눈금(접안렌즈 마이크로미터)과 마이크로미터 물체가 있는 특수 접안렌즈가 필요합니다. 안구 마이크로미터, at 31
가장 단순한 경우 32는 접안렌즈에 삽입되는 선형 눈금이 인쇄된 유리 디스크입니다(그림 14a). 마이크로미터 물체는 현미경 슬라이드로 중앙에 길이 1mm, 눈금 10μm의 선형 눈금이 새겨져 있습니다. 측정하기 전에 현미경의 각 배율에 대한 접안 마이크로미터의 분할 값을 결정할 필요가 있습니다. 이를 위해 마이크로미터 물체를 현미경 스테이지에 놓고 준비물로 간주합니다. 이 경우 물체 마이크로미터의 가시적인 분할 중 하나가 접안 마이크로미터 눈금의 0 표시와 정렬되고 두 눈금의 분할이 일치하는 것이 표시됩니다(그림 15). 이 세그먼트에서 안구 및 대물렌즈의 수를 세고 안구 마이크로미터의 구분 가격을 계산합니다. 그 후 마이크로미터 물체 대신 미생물 제제를 무대 위에 올려놓고 검사하면 32
도 33과 같은 배율로 접안 마이크로미터의 눈금을 자로 하여 균체의 크기를 측정할 수 있다. 정확한 측정을 위해 측정 드럼과 관련된 슬라이딩 제로 마크가 있는 특수 접안렌즈 마이크로미터가 사용됩니다(그림 14b). 미크론의 10분의 1의 정확도로 미생물의 크기를 결정할 수 있습니다. 제로 마크는 이중 수직선이며 그 중간은 십자 형태의 두 가는 선의 교차점에 해당합니다. 측정하기 전에 측정 드럼의 눈금 구분을 알아야 합니다. 마이크로미터 개체는 참조 역할을 합니다. 측정 드럼을 회전시키면서 물체-마이크로미터 눈금의 여러 부분이 0 표시로 원을 그리며 표시됩니다. 이중 수직선은 측정 드럼의 완전한 회전 수를 나타냅니다. 미생물 측정을 수행할 때 대상을 따라 영점을 이동하고 측정 드럼의 판독값을 읽습니다. 실용적인 부분 작업의 목적은 미생물의 형태를 연구하는 기본 방법을 마스터하는 것입니다. 33
34 작업순서 1. 비오케피어와 유산균의 유산균 고정제를 준비한다. 2. Bacillus subtilis(gram +) 및 Escherichia coli(gram-) 세포의 Gram 염색을 수행합니다. 3. Saccharomyces cerevisiae의 효모 세포의 크기를 결정합니다. 4. 효모 현탁액에서 살아있는 Saccharomyces cerevisiae 세포와 죽은 세포의 수를 측정합니다. 34 보고서 내용 1. 유산균 세포의 형태(현미경 배율로 표시된 유산균 고정제 사진). 2. 그람 음성 및 그람 양성 박테리아의 고정 제제 도면. 3. 접안렌즈 마이크로미터의 측정 드럼의 스케일 결정. 4. Saccharomyces cerevisiae의 효모 세포 크기. 5. 효모 현탁액에서 살아있는 세포와 죽은 세포의 수. 테스트 질문 1. 박테리아의 고정 제제를 준비하는 방법은 무엇입니까? 2. 그람염색에서 세균의 차이가 나는 이유는 무엇입니까? 3. 그람 염색법이란? 4. 미생물의 크기를 결정하는 방법은 무엇입니까? 5. methylene blue로 염색하여 미생물의 살아있는 세포와 죽은 세포의 수를 결정하는 방법은 무엇입니까? 주제 2. 미생물 배양 : 영양 배지 컴파일 원칙; 살균 방법; 미생물의 접종 및 재파종 방법. 배지의 분류 및 준비 미생물을 배양한다는 것은 성장을 위한 조건을 인위적으로 만드는 것을 의미합니다. 재배용
35 실험실 또는 산업에서 미생물, 미생물의 생명 활동에 필요한 모든 물질을 포함하는 영양 배지를 사용합니다. 환경에서 영양소는 미생물의 세포로 들어가고 대사 산물은 세포에서 환경으로 제거됩니다. 미생물의 생명을 위해서는 물, 탄소, 산소, 질소, 황, 인, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 철 및 미량 원소가 필요합니다. 이러한 모든 물질은 영양 배지에 포함되어야 합니다. 그들 중 하나가 없어도 성장이 전혀 없거나 미미할 것입니다. 탄소, 수소, 질소, 인 및 황은 세포 건조 질량의 약 90-95%를 차지하기 때문에 생체 요소라고 합니다. 칼륨, 마그네슘, 칼슘 및 나트륨은 다량 영양소 또는 회분 요소라고 합니다. 그들은 세포의 건조 질량의 최대 5-10%를 차지합니다. 철, 망간, 몰리브덴, 코발트, 구리, 바나듐, 아연, 니켈 및 기타 중금속 양이온은 미량 원소라고 하며 세포 건조 질량의 일부를 구성합니다. 최고 가치모든 살아있는 유기체에 대한 탄소를 가지고 있습니다. 그것은 세포에 있는 모든 유기 분자의 일부이며 건조 바이오매스의 약 50%를 차지합니다. 탄소와 관련하여 모든 유기체는 독립 영양 생물과 종속 영양 생물로 나뉩니다. Autotrophs는 이산화탄소를 탄소원으로 사용합니다. Heterotrophs는 기성품 유기 화합물이 필요합니다. 다양한 유기 물질은 대부분의 미생물에 대한 탄소 공급원으로 작용할 수 있습니다. 단백질 및 그 부패 생성물, 탄수화물, 지방, 탄화수소. 질소 영양은 그 가치 측면에서 탄소 영양에 이어 두 번째입니다. 질소는 유기체의 활력을 보장하는 아미노산 및 기타 세포 구성 요소의 구성 요소입니다. 질소는 세포 건조물의 14%를 구성합니다. 질소 공급원은 질소 함유 유기 또는 무기 화합물입니다. 무기질 질소의 공급원은 대부분 암모늄염과 질산염입니다. 단백질, 아미노산, 뉴클레오티드는 질소의 유기 공급원으로 사용됩니다. 일부 원핵생물은 대기 질소를 사용할 수 있습니다. 35
36 인과 황은 중요한 세포 생체 고분자입니다. 인(건조 세포 물질의 3%)은 뉴클레오티드 및 ATP의 일부이고 황(1% 미만)은 일부 아미노산의 일부입니다. 인산염은 일반적으로 인의 공급원으로 사용되며 황산염은 황으로 사용됩니다. 인과 황도 유기 화합물로 사용할 수 있습니다. 미생물의 성장을 위해서는 소량의 거대 원소가 필요합니다. 이온 알칼리 금속미생물의 생명에 중요한 역할을 하는 (Na +, K +) 및 알칼리 토금속 (Mg 2+, Ca 2+). 미생물 세포의 다량 영양소는 투과성, 삼투압, pH 값을 조절하는 데 필요합니다. 이러한 금속 외에도 미생물의 성장에는 많은 미량 원소(미량 원소)가 필요합니다. 영양 배지의 미네랄 성분은 세포 표면에 전하 분포를 형성합니다. 세포의 전위를 변경하면 생리학적 활동이 변경될 수 있습니다. 미량 원소의 주요 기능 중 하나는 효소 촉매 작용에 참여하는 것입니다. 현재 세포에 있는 모든 효소의 4분의 1이 금속과 관련되어 있습니다. 일부 미생물의 정상적인 발달을 위한 영양 배지의 주요 구성 요소 외에도 "성장 인자"라고 하는 추가 물질도 필요합니다. 성장인자는 다양한 화학적 성질사이. 이들은 주로 유기 물질이며 극소량의 첨가는 미생물의 성장과 번식을 자극합니다. 비타민이 고등 유기체에 대한 것과 마찬가지로 미생물에 대해서도 동일한 의미를 갖습니다. 성장 인자는 주로 비타민 B로 미생물 또는 아미노산의 대사 조절제 및 자극제 역할을 합니다. 효모 자가 분해물, 효모 추출물, 천연 단백질(혈액, 혈청) 등이 성장 인자로 사용되며 미생물의 영양 요구 사항은 매우 다양합니다. 이러한 이유로 보편적 인 36은 없습니다.
37 배지, 모든 미생물의 배양에 동등하게 적합합니다. 배양 목표와 주어진 미생물의 필요에 따라 영양 배지는 구성, 신체 조건 및 목적의 세 가지 방식으로 다릅니다. 구성에 따라 영양 배지는 두 그룹으로 나뉩니다. 1) 천연 (천연); 2) 인공 (합성). 자연 환경은 유기 화합물을 포함하는 식물 또는 동물 기원의 제품, 다양한 산업 폐기물을 포함하기 때문에 정의되지 않은 화학 조성을 갖는 환경입니다. 천연 영양 배지는 다양한 미생물의 집중적인 성장을 제공합니다. 그들은 풍부한 배열의 유기농 및 무기화합물, 필요한 모든 요소와 추가 물질을 포함합니다. 예를 들어, 다음 배양 배지는 실험실 설정에서 가장 일반적으로 사용됩니다. 1. 고기에서 추출한 고기 펩톤 브로스(MPB) 추출물은 단백질 펩톤이 불완전하게 분해된 산물을 함유하고 있습니다. 여기에는 유기 탄소, 유기 질소, 인 함유, 황 함유 유기 물질이 포함되어 있습니다. BCH에는 미생물에 필요한 모든 미네랄도 포함되어 있습니다. BCH는 여러 유형의 박테리아 배양에 사용됩니다. 2. 발아 보리 곡물에서 추출한 맥주 맥아즙은 설탕(주로 맥아당), 질소 물질, 회분, 다양한 성장 인자 및 비타민 B를 탄소원으로 함유하고 있습니다.맥주 맥아즙은 많은 미생물, 특히 효모의 발달에 좋은 환경입니다. 곰팡이 균. 좋은 천연 매체는 우유, 감자, 과일 및 야채 즙입니다. 산업계에서는 일반적으로 반합성 또는 천연 매체가 사용됩니다. 매우 자주 미생물 또는 미생물 폐기물이 탄소원으로 사용됩니다. 음식 산업: 당밀(설탕 생산 폐기물), 37
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1. 설명 이 프로그램은 전문 분야에서 FSBEI HPE BSU의 대학원 연구에 진입하는 사람들을 위한 것입니다. 03.02.03 - 미생물학
연방 교육 기관
카라차이-체르키스 주립 기술 아카데미
축산물 생산기술과
미생물학
지침
학생들을 위한 실험실 및 실습 수업
농업 연구소
체르케스크 - 2010
대략적인 기준으로 작성하고 작업 프로그램전문 110305 "농산물 생산 및 가공 기술" 및 110201 "농업"(2000)에서 고등 전문 교육의 국가 교육 표준에 따른 "미생물학" 과정.
TPPZ 부서 회의에서 논의됨(2009년 7월 2일 회의록)
방법론위원회 승인 농업 연구소(2001년 1월 1일자 6번 회의록). Karachay-Cherkess State Technological Academy의 교육 및 방법론 위원회의 결정에 의해 발행됨(2001년 1월 1일 회의록)
작성자:생물학 후보, 부교수 , 농업 과학 후보, 부교수 , 어시스턴트
검토자: – 생물학 후보
농학과 부교수
"TPPZH"학과 부교수
편집자: 박사 과학, 부교수
콘텐츠
서론 ........................................................................................................................... 6
1. 현미경 ........................................................................................................................... 7
1.1 라이트 필드 현미경 ........................................................................................... .7
1.1.1. 현미경 장치 ........................................................................................... 7
2. 미생물 작업 ........................................................................................... 여덟
2.1 제제 준비 방법 ........................................................................................................................................... 8
2.1.1 준비를 위한 배양 기술 ........................................................... 8
2.1.2. 방법에 의한 미생물의 살아있는 세포 연구
압력 강하 ........................................................................................................... 8
2.1.3. 미생물의 고정 제제 ........................................................... 9
조명 시스템은 무대 아래에 있습니다. 거울은 입사광을 콘덴서로 반사합니다. 거울의 한면은 평평하고 다른면은 오목합니다. 콘덴서로 작업할 때는 평면 거울을 사용해야 합니다. 오목 거울은 저배율 렌즈로 집광 없이 작업할 때 사용됩니다. 집광기는 2-3개의 단초점 렌즈로 구성되어 있으며 거울에서 나오는 광선을 모아 물체로 향하게 합니다. 침수 시스템으로 작업할 때는 콘덴서가 필요합니다. 콘덴서에는 강철 초승달 모양의 판으로 만들어진 조리개(꽃잎) 다이어프램이 있습니다.
유색 제제는 거의 완전히 열린 다이어프램, 얼룩이없는 다이어프램 - 다이어프램의 조리개가 감소한 것으로 간주됩니다.
렌즈- 물체의 이미지가 좌우하는 품질에 따른 다중 렌즈 시스템. 외부 렌즈는 전면 렌즈라고 하며 배율을 제공합니다. 나머지 렌즈는 광학적 결함을 수정하는 기능을 수행합니다.
렌즈가 건조하고 물에 잠겨 있습니다(침지). 건식 대물렌즈로 작업할 때 대물렌즈의 전면 렌즈와 연구 대상 사이에 공기가 있습니다. 침지 대물렌즈 V = 90x로 작업할 때 커버 유리와 대물 렌즈 사이에 삼나무 기름이 있으며 굴절률은 유리의 굴절률 1.515 및 1.52에 각각 가깝습니다. 렌즈에는 8x, 40x 및 90x 배율이 있습니다.
접안 렌즈인간 눈의 "렌즈"(렌즈)의 직접적인 연속 역할을합니다.
접안 렌즈는 금속 프레임으로 둘러싸인 위쪽 렌즈와 아래쪽 렌즈의 두 개의 렌즈로 구성됩니다. 접안렌즈의 목적은 렌즈가 주는 상을 확대하는 것입니다. 접안렌즈 배율이 프레임에 새겨져 있습니다. 접안렌즈의 작동 배율 범위는 4x에서 15x입니다.
접안렌즈는 다른 유형, 선택은 렌즈에 따라 다릅니다. 현미경으로 장시간 작업할 때 쌍안 부착물을 사용하는데, 이는 물체의 시인성을 향상시키고 이미지의 밝기를 감소시켜 시력을 보존하기 때문입니다.
미생물 작업2.1. 준비 방법
2.1.1. 준비를 위해 문화를 취하는 기술
화염에 구운 세균 바늘로 시험관에서 소량의 미생물 덩어리를 채취합니다. 문화가 액체라면 루프를 사용하는 것이 좋습니다. 다른 경우에는 바늘입니다.
2.1.2. 파쇄 적하법에 의한 미생물의 살아있는 세포 연구
미생물의 살아있는 세포를 분쇄 드롭 방식으로 검사하고 개체를 필수 염료로 사전 염색합니다. 중요한 착색(염료: 0.001 ~ 0.0001% 농도의 메틸렌 블루, 중성 레드).
준비물을 현미경으로 관찰하여 시야를 약간 어둡게합니다. 콘덴서가 약간 낮아지고 빛의 흐름이 오목 거울에 의해 조절됩니다. 처음에는 낮은 배율인 8x 대물렌즈를 사용하고, 방울의 가장자리가 감지된 후 40x 또는 immersion(90x) 대물렌즈가 설치됩니다.
분쇄 드롭 방식의 경우 깨끗한 유리 슬라이드에 수돗물을 한 방울 떨어뜨립니다. 문화가 그것에 도입되고 물과 혼합됩니다. 과도한 물은 여과지로 제거됩니다. 침지 대물렌즈를 사용할 때 삼나무 기름 한 방울을 유리 슬라이드에 바르고 현미경으로 관찰합니다.
2.1.3. 미생물의 고정 제제
고정 된 준비는 살아있는 세포의 이러한 처리를 전제로하여 물체의 생명 과정을 신속하게 중단하고 미세한 구조를 보존 할 수 있습니다. 고정의 결과 세포가 유리에 단단히 부착되어 더 잘 염색됩니다. 병원성 미생물로 작업할 때는 고정이 필요합니다(안전상의 이유로).
얼룩의 준비.깨끗하고 무지방 슬라이드에 수돗물 한 방울을 떨어뜨립니다. 유리를 탈지하기 위해 에틸 알코올과 황산 에테르를 1:1 비율로 혼합하여 사용합니다. 하소된 세균 바늘을 사용하여 배양 튜브에서 소량의 미생물 덩어리를 채취하여 한 방울의 물에 첨가합니다. 방울은 약 4cm2의 면적에 걸쳐 유리의 루프로 조심스럽게 번집니다.
현탁액이 두꺼운 경우 먼저 물로 희석합니다. 이를 위해 소성 루프로 약간의 현탁액을 취하고 다른 유리 슬라이드의 물 한 방울로 옮깁니다. 정상 밀도의 현탁액을 유리 위에 얇은 층으로 도포한 다음, 도말을 실온 또는 낮은 열에서 공기 중에서 건조시켜 약물을 버너 화염보다 높게 유지합니다. 건조 중 제제의 강한 가열은 세포의 구조와 모양을 왜곡시키는 단백질의 응고를 피하기 위해 권장되지 않습니다. 건조 준비가 고정됩니다.
얼룩의 고정.실시된다 버너 불꽃 위에또는 케미컬을 사용하여노조.첫 번째 경우에는 버너 화염 위에 아래쪽을 놓고 3~4회 천천히 준비하고 두 번째 경우에는 포르말린, 오스믹산, 아세톤과 같은 크롬 화합물을 사용합니다. 일반적인 고정 기술 중 하나는 96% 알코올 또는 동일한 부피의 에틸 알코올과 에테르(Nikiforov의 액체)의 혼합물로 약물을 처리하는 것입니다. 이를 위해 제제를 10-30 분 동안 고정액에 담그십시오.
준비의 채색.몇 방울의 염료가 얼룩에 적용됩니다. 염색의 종류와 연구의 목적에 따라 염색 시간은 1분에서 5분까지 다양하며 경우에 따라 30분까지 소요되기도 합니다. 염색이 끝나면 준비물을 물로 세척하고 여과지로 물을 제거하고 공기 중에서 건조시키고 현미경으로 관찰합니다.
간단하고 차별화된 페인팅 방법이 있습니다.
~에 단순한착색(메틸렌 블루, 푹신, 젠티안 바이올렛)에 하나의 염료를 사용하면 전체 세포가 염색됩니다.
~에 차별화된염색을 통해 개별 세포 구조를 다른 염료(그람 염색, 포자 염색)로 염색합니다.
미생물의 형태 연구3.1. 세포 모양
3.1.1. 박테리아
모양에서 모든 박테리아는 구형 (구균), 막대 모양 및 주름진으로 나뉩니다.
구형 박테리아 - 구균.
1. 미세 구균 -단일 구형 셀( 미세구균 민첩).
2. 디플로코치 -쌍으로 연결된 구형 구균. ( 아조토박터 크로코컴).
3. 테트라코치- 4개로 연결된 구형 구균.
4.연쇄상구균- 사슬로 연결된 구상세균(주로 병원균과 유산균 락토코커스 락티스).
5. 사르시나스- 8개의 세포로 구성된 구형 박테리아는 세 개의 서로 수직인 평면에서 세포 분열의 결과로 발생합니다. 일부 유형의 사르신은 각 면에 4개의 사르신이 있는 큰 입방체 모양의 패킷을 형성합니다. 대표 대표 사르시나 플라바(sarcinum yellow) - 공기 중 미생물총의 가장 흔한 대표자.
다음을 제외한 모든 구형 형태의 박테리아 연쇄상 구균 락티스, 고정 및 푹신 염색 준비에서 볼 수 있습니다.
막대 모양의 박테리아. 여기에는 논쟁을 형성하지 않는 형식이 포함됩니다(출산 슈도모나스, 아크로모박터, 유산균및 기타) 및 분쟁 형성 (출산 새균, 클로스트리디움등).
포자 형성 스틱 슈도모나스 슈투체리 – 그것의 세포질은 고르게 염색됩니다.
포자 형성 막대 바실러스 마이코이데스그리고 바실러스 메센테리쿠스.현미경으로 보면 색이 고르지 않게 보입니다. 포자는 밀도가 높은 구조로 착색되지 않습니다. 세포 새균 진균사슬로 배열되어 있는 이들은 연쇄상균입니다.
막대 모양의 박테리아는 고정 및 염색된 슬라이드에서 볼 수 있습니다.
매력적인 모양
1. 비브리오 – 약간 구부러진 세포.
2. Spirillae는 러시아 문자 C 형태의 컬 하나, 라틴 문자 S 형태의 컬 2개 또는 나선형 형태의 여러 컬을 가질 수 있습니다.
3. 스피로헤타(Spirochetes) - 컬이 많은 길고 얇은 세포; 세포의 길이는 두께를 5-200배 초과합니다.
Vibrios와 spirillae는 미리 온도 조절 장치에서 며칠 동안 배양된 슬러리에서 준비된 고정되고 착색된 제제에서 편리하게 볼 수 있습니다. 그러한 제제의 많은 미생물 중에서 복잡한 형태가 종종 발견됩니다.
치아 플라크의 고정 스테인드 준비에서 스피로헤타에 대해 알 수 있습니다. 덴탈 스피로헤타는 매우 가늘고 머리카락처럼 짧고 짧습니다(2-3개의 컬).
3.1.2. 방선균
방선균은 빛나는 균류입니다. 영양 배지에서 방선균의 균사체는 구별됩니다. 그 중 한 부분은 기질 (기질 균사체)에 잠겨 있고 다른 부분은 기질 (공중 균사체) 위에 있습니다.
방선균류의 많은 대표자는 색소를 생산하므로 기중 균사체와 특히 군체는 파란색, 파란색, 보라색, 분홍색, 갈색, 갈색 또는 검은색으로 착색됩니다. 방선균은 적절한 색상으로 배양 배지를 염색합니다.
방선균 집락 조각을 배지와 함께 유리 슬라이드에 적용합니다. 두 번째 유리 슬라이드로 이 조각을 유리에 단단히 누르고 부수고 유리에 바르십시오. 약물을 건조, 고정, 염색하고 균사체 단세포 필라멘트가 부분적으로 보이는 현미경으로 관찰합니다.
3.1.3. 누룩
효모 - 다양한 모양의 단세포 현미경 곰팡이 : 타원형, 배 모양, 원형, 원통형. 식물과 성적으로 번식합니다.
실험실 연구의 경우 빵 효모가 사용됩니다. 수업 몇 시간 전에 작은 효모 덩어리를 따뜻한 설탕 물에 넣고 따뜻한 곳에 둡니다. 희고 탁한 액체가 형성됩니다. 이 액체 한 방울을 유리 슬라이드에 바르고 커버 유리로 덮고 삼나무 오일 한 방울을 그 위에 바르고 준비를 침지 시스템으로 봅니다. 싹이 트고 분열하는 세포가 보입니다.
3.2. 화학 연구 방법
3.2.1. 미생물 세포의 그람 염색
미생물 세포의 이 분화 방법은 화학적 구성 요소세포막. 일부 유형의 미생물 세포에서는 주요 염료와 함께 알코올 불용성 요오드 화합물이 형성되는 반면, 다른 종에서는 이 화합물이 일시적으로 나타나 알코올 처리 후 용해됩니다. 첫 번째 그룹의 미생물은 그람 양성 두번째 - 그람 음성.
그람 염색 기술.서로 다른 미생물 배양액의 세 가지 얇은 도말을 탈지 유리 슬라이드에 적용합니다(그 중 2개는 대조군이며 그람 염색과 관련이 있음). 도말을 공기 중에서 건조시키고 버너 화염에 고정하고 유리를 약간 기울어진 위치에 유지하면서 젠티안 바이올렛(또는 크리스탈 바이올렛)의 페놀 용액으로 1분 동안 염색합니다. 그런 다음 염료를 붓고 제제를 물로 헹구지 않고 Lugol 용액을 1분 동안 적용합니다(도말이 완전히 검게 될 때까지). 유리는 기울어진 위치에 고정됩니다. 물로 헹구지 않고 약물을 15-20 초 동안 96 % 알코올로 계속 흔들어서 처리합니다. 지정된 기간을 초과하면 그람 양성 세포도 변색되기 때문에 변색 시간을 준수하는 것이 중요합니다.
물로 헹군 후 조제물을 Pfeifer's fuchsin으로 1분 동안 염색합니다. 그람양성균은 짙은 보라색을 띠고, 그람음성균은 가색(fuchsin)으로 착색한다.
그람 염색의 결과는 배양 연령에 따라 다릅니다. 오래된 배양에서 죽은 세포는 항상 그람 음성으로 염색됩니다. 따라서 어린 원일 작물을 사용하는 것이 좋습니다.
누룩, 바실러스 메센테리쿠스또는 고초균(그람 양성) 및 대장균 (그람 음성).
그람 염색용 염료 및 시약.
1. 용담 보라색 페놀 용액:용담 바이올렛 - 1g, 알코올 96% - 10ml, 결정질 페놀 - 2g, 증류수 - 100ml.
경우에 따라 적용 용담 알코올 용액보라색:용담 바이올렛(또는 크리스탈 바이올렛) - 1g, 96% 알코올(정류) - 100ml, 글리세린 - 5ml. 혼합물을 24시간 동안 항온조에 넣은 다음 여과합니다.
2. 루골의 솔루션(요오드화 칼륨 - 2g, 결정질 요오드 - 1g, 증류수 - 300ml). 먼저 요오드화칼륨을 물 5ml에 농축한 용액을 만들어 요오드를 녹인 다음 물을 300ml에 가한다.
3. 술 96%.
4. 푹신 파이퍼(Tsil carbolic fuchsin 수용액): Tsil carbolic fuchsin 1ml와 증류수 9ml. 푹신 1g, 결정성 페놀 5g, 96% 알코올 - 10ml, 글리세린 몇 방울, 증류수 100ml, 푹신을 에탄올에 녹이고 물에 녹인 페놀을 첨가하여 제조합니다. 용액을 교반하고 며칠 동안 방치합니다. 사용하기 전에 필터링됩니다.
3.2.2. 박테리아의 포자 착색
세균의 포자는 식물 세포와 비교하여 불리한 환경 조건에 매우 강합니다. 그들은 원형, 타원형 또는 타원형입니다. 포자의 직경이 포자가 형성되는 세포의 직경을 초과하지 않으면 세포를 세포라 한다. 세균, 초과하는 경우 중앙 또는 세포의 끝에 있는 포자의 위치에 따라 이 세포는 그에 따라 호출됩니다 클로스트리디움 또는 플렉트리디얼 . 세균 세포에서 포자는 세포의 중앙에 위치할 수 있습니다. 본부위치, 끝에 - 단말기그리고 한쪽 끝에 더 가까이 - 서브터미널위치.
살아있는 포자를 형성하는 박테리아를 관찰할 때, 그들의 포자는 광선의 더 강한 굴절에 의해 구별될 수 있습니다. 포자는 내산성이므로 염료로 염색하기 어렵습니다. 이것은 막의 높은 밀도, 그 안에 있는 낮은 농도의 자유수 및 포자의 높은 지질 함량으로 설명됩니다. 착색 준비 중 간단한 방법으로또는 Gram에 따르면 포자는 무색으로 남아 있습니다. (네거티브 착색).
모든 포자 착색 방법은 다음을 기반으로 합니다. 공통 원칙: 먼저 크롬, 염산, 황산, 초산, 암모니아, 가성소다, 과산화수소 등 다양한 물질로 포자를 에칭한 후 가열하면 포자가 있는 세포가 염색되고 마지막으로 세포질이 변색되어 추가로 염색된다. 대조 염료.
Müller가 수정한 Ziehl-Nielsen 방법.화염에 박테리아 얼룩을 고정하기 전에 일반적인 방법으로 준비합니다. 다음으로, 5% 크롬산 용액을 화염에 고정된 제제에 적용하고 냉각시킨다. 5~10분 후 물로 씻어냅니다. 준비는 여과지의 스트립으로 덮여 있고 종이는 Tsil의 카볼릭 푹신으로 충분히 적셔 있습니다. 증기가 나타날 때까지 준비물을 화염에 가열한 다음(끓지 않도록) 따로 보관하고 염료의 새 부분을 추가합니다. 이 절차는 7분 동안 수행됩니다. 염료는 증발하지만 종이는 마르지 않는 것이 중요합니다. 냉각 후 제거하고 준비물을 물로 씻고 여과지로 완전히 닦아냅니다. 이 처리의 결과, 포자가 있는 세포가 균일하게 염색됩니다.
다음으로, 세포의 세포질(포자는 제외)은 15-30초 동안 염산 또는 황산의 1% 용액으로 처리하여 변색됩니다. 제제를 준비할 때 포자 새균 진균또는 새균 장간막 16-18초 동안 세포질을 변색시키는 것이 좋습니다(21에서 37-40까지 큰 소리로 측정). 이 시간을 초과하면 포자도 변색될 수 있습니다. 그런 다음 제제를 물로 세척하고 2분 동안 메틸렌 블루로 염색합니다.
색상은 대조적이며 밝은 빨간색 포자는 세포질의 파란색 배경에 대해 명확하게 두드러집니다.
Peshkov의 방법. Leffler의 메틸렌 블루를 화염에 고정된 제제에 붓고 끓여서 유리를 화염 위에 놓은 상태에서 15-20초 동안 끓입니다. 도말은 물로 세척하고 0.5% 중성 적색 수용액으로 30초 동안 염색합니다. 다시 헹구고 건조시킨 다음 대물렌즈를 기름에 담가 준비물을 검사합니다. 포자는 파란색 또는 파란색으로, 세포질은 분홍색입니다.
분쟁 연구를 위해 편리한 물건이 될 수 있습니다. 새균 장간막또는 새균 진균 4일의 나이에.
박테리아 포자를 염색하기 위한 시약. 1. 탄수화물 푹신트실리아(3.2.1 참조).
2. 레플러의 메틸렌 블루(3 참조. 2. .1).
3. 메틸렌 블루의 포화 수용액.염료 2g과 증류수 100ml.
4. 크롬산, 5% 솔루션.
5. 소금(또는 황산, 1% 솔루션.
4. 미생물의 배양
4.1. 문화 매체
4.1.1. 배양 배지의 준비
고기-펩톤 국물(BCH).고기-펩톤 배지용 준비 고기 국물,잘게 썬 신선한 고기 500g을 50 ° C로 가열 된 수돗물 1 리터와 함께 법랑 팬에 붓고 실온에서 12 시간 또는 50-55 ° C에서 1 시간 동안 주입합니다. . 고기를 짜내고 추출물을 면직물로 여과하고 30 분 동안 끓여 콜로이드 단백질을 응고시키고 두 번 여과합니다 (첫 번째는 면직물로, 두 번째는 종이 필터를 통해). 여액에 물을 1L까지 넣고 플라스크에 붓고 면 마개로 막고 120℃에서 20분 동안 멸균한다(플라스크 마개는 종이 뚜껑으로 덮음).
고기 육수는 언제든지 배지를 준비하는 데 사용할 수 있습니다. 즉시 준비되면 고기 국물의 사전 살균이 필요하지 않습니다.
BCH를 준비하려면 고기 육수 1리터에 5-10g을 추가합니다. 펩톤(단백질 가수분해의 첫 번째 생성물) 배지의 열량을 증가시키고 5g 식탁용 소금삼투 활동을 생성합니다. 펩톤이 용해될 때까지 배지를 가열하면서 지속적으로 저어줍니다.
젖은 붉은 리트머스 종이가 파란색으로 변할 때까지 20% Na2CO3 용액을 추가하여 배지의 중성 또는 약알칼리성 반응을 설정합니다. 배지의 pH를 확인하기 위해 지시약을 사용하는 것이 편리합니다. 브로모티멜로우: 1-2 방울을 한 방울의 국물과 함께 도자기 컵에 섞습니다. 중성 매체에서 bromothymolblau는 병 녹색, 산성 매체에서 노란색, 알칼리성 매체에서 파란색입니다.
pH를 설정한 후 배지를 다시 5~10분간 끓이고 배지의 반응이 변할 때 응고되는 단백질은 육즙을 맑게 하거나 단백질로 맑게 하지 않고 종이여과기로 여과한다. 이를 위해 신선한 달걀 흰자위에 두 배의 물을 붓고 50 ° C로 냉각 된 국물과 섞습니다. 혼합물을 끓이고 저열로 10분 동안 교반한 다음 여과한다. 투명한 고기-펩톤 국물을 시험관에 붓고 면마개로 막고 120°C에서 20분간 멸균합니다.
고기 펩톤 한천(MPA). MPB 1L에 한천 15-20g을 추가합니다. 배지는 한천이 용해될 때까지 가열되고(융점은 100°C, 응고는 40°C임), 배지의 약알칼리성 반응은 20% Na2CO3 용액으로 설정되고 깔때기를 통해 시험관(약 이후에 페트리 접시에 붓기 위해 컬럼에 10ml의 한천을 넣고 경사 한천을 얻기 위해 각각 5ml - 스톡).
한천을 쏟을 때 튜브의 가장자리는 건조한 상태를 유지해야 합니다. 그렇지 않으면 코르크가 유리에 달라붙을 것입니다. 배지가 있는 튜브를 오토클레이브에서 120°C에서 20분 동안 멸균합니다.
4.2. 살균 방법
살균 - 영양배지, 접시 등에 있는 미생물의 세포를 완전히 파괴하는 것입니다.
여러 살균 방법이 알려져 있습니다. 가열 살균이 더 일반적으로 사용됩니다.
4.2.1. 화염 또는 소성
백금 고리, 바늘, 주걱, 작은 금속 물체(가위, 란셋, 족집게)는 물론 유리 막대, 현미경 슬라이드, 커버 슬립 등은 사용 직전에 점화할 수 있습니다.
4.2.2. 건열 살균
그것은 전분, 분필과 같은 접시 및 건조 재료를 처리하는 데 사용됩니다. 이 경우 멸균된 대상물은 전기 건조 캐비닛에서 170°C에서 2시간 동안(필요한 온도가 설정되는 순간부터) 보관됩니다. 온도를 170 ° C 이상으로 높이는 것은 권장하지 않습니다. 면 플러그와 종이가 열화되기 시작합니다.
살균하기 전에 유리 제품을 면 마개로 닫고 종이로 싸십시오. 컵, 시험관, 피펫, 면모, 거즈는 종이로 싸거나 멸균 후 멸균 접시를 보관할 수있는 특수 케이스 및 케이스에 넣습니다.
살균이 끝나면 온도가 실온으로 떨어진 후에야 캐비닛이 열립니다. 그렇지 않으면 유리가 깨질 수 있습니다.
4.2.3. 흐르는 증기로 살균
흐르는 증기(100°C)는 건열로 인해 열화되는 물체 및 더 높은 온도를 견딜 수 없는 일부 영양 배지(탄수화물, MPF, 우유가 포함된 배지)를 처리하는 데 사용됩니다. 살균은 매일 3일 동안 Koch 보일러에서 30분 동안 수행됩니다. 이 살균을 분수.
100 ° C의 온도에서 30 분 동안 한 번 가열하면 영양 세포가 죽고 많은 미생물의 포자가 생존 할 수 있습니다. 이러한 가열 후, 매체는 24시간 동안 28-30°C의 자동 온도 조절 장치에 놓입니다. 첫 번째 가열 동안 보존된 포자는 식물 형태로 발아할 시간을 가지며, 이는 후속 가열 중에 죽습니다. 그런 다음 이 작업을 2번 더 반복합니다.
4.2.4. 압력 하에서 포화 증기로 살균
이것은 가장 빠르고 안정적인 멸균 방법이며 가장 오래 지속되는 포자를 죽입니다. 그것의 도움으로 대부분의 영양 배지와 접시가 살균됩니다.
포화 증기 처리는 밀폐 된 두꺼운 벽 보일러에서 수행됩니다. 압력솥.뚜껑이나 오토클레이브 측면에는 증기 배출 밸브, 압력 게이지 및 안전 밸브가 있습니다. 압력 게이지는 보일러 내부의 증기 압력이 정상보다 얼마나 높은지를 보여줍니다. 압력 한계를 초과할 때 폭발을 방지하기 위해 안전 밸브가 작동하여 증기를 방출합니다.
물리적 대기의 압력계 표시기는 특정 온도에 해당합니다.
120°C, 1기압의 압력으로 20분간 가열하여 안정적인 살균이 이루어집니다.
멸균은 다음과 같이 수행됩니다. 오토클레이브에 물을 붓고 멸균된 물품을 넣고 오토클레이브 뚜껑을 잠그고 가열을 시작합니다. 밸브는 오토클레이브의 모든 공기가 수증기로 대체될 때까지 열려 있습니다. 증기가 연속 스트림으로 탭을 떠나기 시작하면 탭이 닫히고 오토클레이브의 증기 압력이 1기압이 되고 20-30분 동안 이 수준에서 유지됩니다. 그런 다음 가열이 중지되고 압력 게이지 바늘이 0이 될 때까지 기다렸다가 조심스럽게(조금씩) 꼭지를 열고 증기를 내보냅니다. 그런 다음 오토클레이브 뚜껑의 나사를 푸십시오. 압력이 떨어지기 전에 꼭지를 열면 멸균된 용기의 액체가 끓고 플러그가 밖으로 밀려 나옵니다.
오토클레이브는 증기가 흐르는 부분 멸균에도 사용됩니다. 이 경우 증기가 자유롭게 빠져나갈 수 있도록 뚜껑을 조이지 않습니다.
4.2.5. 저온살균
저온살균은 불완전 또는 부분 살균으로 65-80°C에서 각각 30-10분 동안 가열한 다음 10-11°C로 급속 냉각하는 것을 의미합니다. 우유, 맥주, 와인 및 기타 제품은 저온 살균됩니다.
재료 및 장비
MPB, 한천, 레드 리트머스, 브로모티몰블로우, 웰 또는 컵이 있는 도자기 접시, 유리 막대, 20% Na2CO3 용액, 랙에 있는 시험관(한천 붓기용), 깔때기, 면모, 페트리 접시, 1ml Mohr 피펫, 컵용 종이 및 피펫 랩, 250ml 플라스크, 거친 실.
5. 미생물의 순수 배양물의 계수 및 분리
5.1. 미생물 수를 계산하는 방법
5.1.1. 연속희석법과 함께 영양판법으로 토양내 미생물(CFU)의 수를 세는 방법
토양은 미생물의 발달에 가장 유리한 환경입니다. 구성의 높은 이질성으로 인해 미생물의 수를 고려하여 평균토양 샘플.
먼저, 1ml의 물에 다양한 농도의 토양을 포함하는 현탁액을 (희석 방법으로) 준비합니다. 이를 위해 항아리 또는 가방에서 1g의 토양 샘플을 멸균 된 도자기 주걱 또는 알루미늄 티스푼으로 멸균 된 시계 유리에 가져 와서 시계 유리, 주걱, 숟가락을 버너의 화염에 타거나 적십니다. 알코올과 화상. 토양의 무게를 측정할 때 시계 유리는 다른 멸균 시계 유리로 덮여 있습니다.
무균 상태를 관찰하는 토양 샘플을 99ml의 멸균수와 함께 250ml 플라스크에 옮깁니다. 혼합물을 코르크를 적시지 않고 5분 동안 흔듭니다. 멸균 피펫을 사용하여 10-2g의 토양을 포함하는 현탁액 1ml를 취하여 멸균 수돗물 9ml가 든 시험관에 옮깁니다. 피펫은 가능한 한 많이 벽에서 세포를 헹구기 위해 테스트 튜브에서 물로 반복적으로 세척됩니다. 다른 멸균 피펫으로 플라스크에서 현탁액 1ml를 더 취하여 멸균 수돗물 99ml가 들어 있는 두 번째 플라스크에 넣습니다. 이 피펫은 첫 번째 경우와 동일한 방식으로 세척됩니다. 튜브와 두 번째 플라스크를 1분 동안 흔든다. 시험관의 토양 농도는 10-3g, 두 번째 플라스크는 -10-4g이 될 것이며, 같은 방식으로 두 번째 플라스크의 현탁액 1ml를 새로운 멸균 피펫으로 두 번째 시험관에 옮겨 담습니다. 9ml 및 99ml의 멸균 수돗물이 담긴 세 번째 플라스크에 넣고 각각 1ml, 10-5 및 10-6g의 토양을 포함하는 새로운 현탁액을 준비합니다.
실제 작업
2학년 학생들의 경우
미생물학에 대하여
1. 미생물 실험실.
2. 현미경 연구 방법. 현미경과의 친분.
3. 제제를 염색하는 방법. 준비 방법
현미경 검사용.
4. 자료 수집 방법. 문화미디어.
5. 포도상구균의 예에 대한 세균학적 연구 방법.
6. 바이러스의 배양 및 표시.
9. 미생물에 대한 환경 요인의 영향.
10. 혈청학적 반응. 응집 반응.
11. 혈구응집반응.
12. 보체의 결합 반응.
13. 침전 반응. 고리 침전 반응.
14. 면역형광 반응. 면역 반응(피부 테스트).
Opsonophagocytic 반응.
15. 백신.
16. 혈청 제제.
소개
툴킷모스크바 의과대학 철도 운송 MIIT 학생들이 준비할 수 있도록 돕기 위해 개발되었습니다. 실무"미생물학, 바이러스학 및 면역학의 기초" 분야 내에서.
학습 모듈
수업 주제: 목차 참조
수업 유형: 실용
수업 장소: 미생물학 연구실
시간: 16 * 2시간
학생은 다음을 알아야 합니다.
섹션 1
의료의 기초
세균학과 미생물학
실용 작업 No. 1
주제:"미생물 연구실"
미생물 실험실은 병원과 위생 역학 스테이션에 조직되어 있습니다. 특히 위험한 감염의 병원체와 함께 일하는 특수 실험실도 있습니다.
바이러스 연구소 등
미생물 실험실의 임무는 다음과 같습니다.
1) 전염병의 세균학적 진단;
2) 물, 공기 및 물체에 대한 위생 및 세균 연구
환경;
실험실에는 다음이 포함됩니다.
1) 전도를 위한 유약 상자가 있는 연구실
미생물 연구 (상자에 설치해야 함
살균 램프);
2) 세척;
3) 준비(요리 및 기타 준비를 위한 공간)
보조 작업);
4) 오토클레이브;
5) 분석을 접수하고 연구결과를 발표하는 방
6) 사육장;
미생물 실험실은 다음을 갖추고 있어야 합니다.
- 온도 조절기,
- 냉장고,
- 건조실,
- 원심 분리기,
- 실험실 유리 제품;
뿐만 아니라 장비:
- 알코올 또는 가스 버너
- 세균 루프
- 데. 해결책
