미생물학 및 위생 분야의 실험실 작업. 주제에 대한 체계적인 개발 : 미생물학의 기초에 대한 실험실 작업에 대한 체계적인 지침
수업 번호 1
영양 배지의 제조 및 살균 방법
미생물 배양의 특징
목적: 작업 규칙을 배우십시오. 미생물 실험실, 미생물 배양의 특징, 영양 배지 준비 방법 및 살균 방법.
작업
미생물 워크샵을 수행 할 때 행동 규칙을 숙지하십시오.
미생물 배양의 특징을 연구한다.
배양 배지의 준비 및 병입 방법을 연구합니다.
접시 및 배양 배지의 살균 방법을 연구합니다.
MPA 배양 배지를 준비하고 붓습니다.
건초와 감자 스틱의 축적 문화를 얻으십시오.
문학
Anikeev V.V., Lukomskaya K.A. 미생물학의 실제 연습에 대한 안내서. M.: 교육, - 1983.
구세프 M.V. 미생물학: 대학 교과서 / M.V. 구세프, LA 미네바. - 2004년 모스크바
엠체프 V.T. 미생물학: 대학 교과서 / V.T. Emtsev, E.N. 미슈스틴. - M .: Bustard, 2005.
Lukomskaya K.A. 바이러스학의 기초가 있는 미생물학. M.: 교육, - 1983.
미생물학, 바이러스학 및 면역학의 기초. / 아래에. A.A. Vorobyov 편집 및 Krivosheina Yu.S. - M.: 마스터리, 2001.
피메노바 M.N. 미생물학의 실제 연습에 대한 안내서. 1971년 모스크바.
미생물학에 대한 워크샵. 에드. AI 네트루소바 - 남 : 아카데미, - 2005.
테퍼 E.Z. 미생물학에 대한 워크샵. - M .: Bustard, 2004.
재료 및 장비.멸균 페트리 접시,teril 원뿔 플라스크, 100-150 ml,영양 한천, 펩톤, 건초, 감자 괴경, 분필, 타일, 스피릿 램프, 플라스크, 면모, 거즈, 피펫, 저울, 추, 온도 조절기.
기본 개념.재배, 배양, 표면재배, 침지재배, 간헐배양, 연속배양, 순수배양, 농축배양, 파종, 배양, 계대배양, 선택배지, 저장배지, 최적배지, 천연배지, 합성배지, 반합성배지, 한천, 살균, 화염, tyndalization, 저온 살균, 고압 증기 멸균, MPA.
진행
작업 번호 1. 미생물 워크샵을 수행 할 때 작업 규칙을 연구합니다.
작업 번호 2. 배양 배지의 분류, 준비 및 병입의 특성, 배양 배지 및 기구의 살균 방법을 연구합니다.
작업 번호 3. MPA 배양 배지를 준비하고 멸균 페트리 접시에 붓습니다.
작업 번호 4. 건초균 축적 배양(바실러스 서브틸리스).
건초를 잘게 썰어 500ml 플라스크에 넣고 부피의 1/4까지 채우고 분필을 넣고 배지가 강한 차 주입 색을 얻을 때까지 15-20분 동안 끓입니다. 건초 국물을 1.0-1.5cm의 층으로 100-150ml의 멸균 원추형 플라스크에 붓고 면봉으로 닫고 22-25 ° C의 온도 조절기에 놓습니다.
이틀 후 배지 표면에 희끄무레한 필름이 발생합니다.당신. 서브틸리스, 노화와 함께 3-4일째에 회녹색을 띤다. 다른 미생물은 드물게 소량으로 자랍니다.
작업 번호 5. 감자 막대기의 누적 배양물 획득(Bac. Subtilis var. Mesentericus).
껍질을 벗기지 않고 씻은 감자 괴경을 원으로 자릅니다. 배지를 중화하기 위해 표면을 분필로 문지르고 증류수에 적신 여과지의 이중 층에 멸균 페트리 접시에 놓습니다. 감자 배지가 든 컵은 0.5 atm의 오토클레이브에 10분 동안 보관하고 3-4일 동안 27-30°C 온도의 자동 온도 조절기에 둡니다.
감자 조각의 표면에 감자 간균 배양액의 조밀한 주름진 필름이 형성됩니다. 필름의 색상은 희끄무레 한 회색, 분홍빛, 황갈색, 검정색으로 다를 수 있으며 이는 우대 개발을받은 문화의 다양성에 따라 다릅니다.
통제 질문
문화 매체의 분류.
실험실 유리 제품 및 배양 배지의 멸균 방법.
개별 영양 배지의 제조 방법(MPB, MPA, MPG, CA, CA 등) 영양 배지 충전.
미생물 배양의 특징 (표면 및 심층, 주기적 및 연속). 축적되고 순수한 문화.
미생물의 천연 및 고정 제제의 제조 방법.
미생물학 과학 발전의 주요 단계, 러시아 및 외국 과학자의 발전에 대한 기여를 연구합니다. 표 1을 채우십시오.
표 1. 미생물학 발전의 역사
수업 번호 2
살아있는 미생물 및 고정 미생물의 준비 및 형태에 대한 지식
목적: 미생물 연구에서 미세 제제를 준비하는 방법과 기술을 연구하고 그 형태를 알게 됩니다.
작업:
세균 세포의 형태학적 특징을 연구한다.
미생물의 생체 내 및 고정 미세 제제를 준비합니다.
재료 및 장비.슬라이드, 세균 루프, 스피릿 램프, 여과지, 준비용 다리가있는 결정화기, 물로 병 세척, 염료 수용액 - 푹신, 메틸렌 블루, 용담 바이올렛 (이하 - 미세 제제 준비 장비); 침지 오일, 현미경; 고기 물, 효모, 건초 및 감자 스틱 배양.
진행
작업 번호 1. 다음과 같은 방법으로 박테리아 세포의 생체 내 연구를 수행하고 도면을 작성하십시오.
분쇄 드롭 방식.액체 중 한 방울을 미생물 루프로 슬라이드에 적용합니다. 커버 유리는 드롭 가장자리의 가장자리에 놓고 점차적으로 낮아집니다.
행잉 드롭 방식.테스트 액체의 작은 방울은 세균 루프가 있는 덮개 유리의 중앙에 적용되고 특수 유리 슬라이드의 오목한 부분 위로 뒤집힙니다.
마약 "각인".연속적인 잔디밭에서 또는 별도의 콜로니 형태로 미생물이 자라는 한천 배지에서 작은 입방체를 잘라내어 유리 슬라이드로 옮겨 미생물이 있는 표면이 위쪽을 향하도록 합니다. 그런 다음 깨끗한 덮개 유리를 잔디 또는 식민지에 적용하고 루프 또는 핀셋으로 가볍게 누른 다음 움직이지 않도록주의하면서 즉시 제거합니다. 생성된 제제를 유리 슬라이드에 한 방울의 물 또는 메틸렌 블루(1:40)에 거꾸로 놓습니다.
작업 번호 2. 고정 준비 준비당신. 서브틸리스, 당신. 서브틸리스 var 장간막, 세인트. lactis, S. cerevisiae, E. coli(부록의 그림 1, 2, 3, 4),그림을 그리다.
신청. 슬라이드는 알코올 램프의 불꽃에서 건조됩니다. 버너 화염에서 멸균 된 세균 루프로 시험 재료의 얼룩이 슬라이드 중앙에 적용됩니다. 미생물의 배양물이 고밀도 영양 배지에서 자라면 먼저 한 방울의 물이 유리에 적용되고 소량의 물질이 세균 루프로 도입되어 얼룩이 만들어집니다.
건조 및 고정. 준비물은 공기 중에서 건조한 다음 고정됩니다. 기존의 미생물 번짐은 버너의 화염에 유리를 2~3회 통과시켜 열 고정하고, 번짐이 위로 향하게 합니다.도말의 고정은 미생물의 죽음, 유리 표면에 대한 밀착성 및 염료에 대한 미생물의 더 쉬운 감수성을 초래합니다.
착색. 2-3 분 동안 염료 용액으로 표면을 붓습니다 (methylene blue, gentian violet, fuchsin). 드러내다단순하고 차별화된미생물의 염색. 첫 번째 경우에는 전체 세포가 염색되어 모양과 크기가 명확하게 보입니다. 차별적 염색은 특정 세포 구조와 저장 물질만을 드러냅니다.
홍조. 그런 다음 도말의 염료를 세척 병의 물로 씻어 내고 제제의 아래쪽을 여과지로 닦고 위쪽을 조심스럽게 건조시키고 현미경으로 관찰합니다.
미생물의 일반적인 특성. 원핵생물과 진핵생물의 특징.
박테리아 세포의 모양과 크기. 박테리아의 형태 학적 유형.
미생물 분류의 기초. 유기체 시스템과 그 다양성에서 박테리아의 위치. 종 식별에 사용되는 박테리아의 특성.
에 대한 간략한 설명 Schizomycetales 주문.
방선균목에 대한 간략한 설명. 노카르디아. 마이코박테리아.
Myxobacteriales 주문에 대한 간략한 설명.
버섯. zygo-, asco- 및 deuteromycetes의 간략한 특성.
표 2를 채우십시오.
표 2. 진핵생물과 원핵생물의 특징
선형 염색체 |
독학 질문
호텔 박테리아 그룹에 대한 간략한 설명(Bergey 박테리아 식별 키에 따름).
조류의 형태학적 특성과 분류.
원생동물의 형태학적 특성과 계통.
수업 번호 3
착색 포함, 캡슐 및 엔도스포어, 그램 착색
목적: 세균 세포의 포자, 캡슐 및 내포물을 염색하는 방법을 연구합니다. 그람 염색의 예를 사용하여 세포 학적 특성을 연구합니다.
작업:
효모 세포에서 지질 과립을 감지합니다.
효모 세포에서 글리코겐 유사 다당류를 검출합니다.
음성 대비로 세균 세포의 캡슐을 감지합니다(예:아조토박터).
Ozheshka 방법을 사용하여 포자와 세포질의 차등 염색을 수행합니다.
박테리아의 그람 염색을 수행합니다.
재료 및 장비.슬라이드, 세균학적 루프, 스피릿 램프, 여과지, 준비용 다리가 있는 결정화기, 물로 병 세척, 현미경. 염료 수용액 - fuchsin, methylene blue, gentian violet, carbolic fuchsin Tsilya, 수단 III. 침지유, 황산 1%, 잉크, 염산 0.5%, Lugol 용액. 문화Bac subtilis, Bac mycoides, S. cerevisiae, E. coli.
기본 개념.뮤레인, 볼루틴, 뉴클레오이드, 글리코겐, 캡슐, 세포벽, 다당류, 다인산염, 이색성 그레인, 모노트리치, 페레트리치, 로포트리치, 바실러리 형태, 클로스트리듐 형태, 플렉트리디움 형태, 엑신, 인틴, 변색성.
진행
작업 번호 1. 효모 세포에서 폴리인산염(볼루틴)의 내포물을 감지합니다.곰팡이 및 효모 세포의 Volutin은 액포, 박테리아 및 세포질의 방선균에 국한됩니다. 여분의 인이며 질소 물질, 핵산 유도체. 특징적인 특성은 변색, 즉 그것을 착색하는 물질과 다른 색상을 얻는 능력입니다.
Omelyansky 방법에 따라 채색 volutin.미생물 배양액의 얇은 도말을 유리 슬라이드에 준비하고 공기 중에서 건조하고 화염에 고정하고 30-40 초 동안 카볼릭 푹신으로 염색하고 물로 세척합니다. 1% 황산용액이 든 병에 20-30초 동안 담그어 구별하고 즉시 물로 씻습니다. 황산세포질을 변색시키고 volutin 곡물은 fuchsin으로 착색됩니다. 제제를 20-30초 동안 메틸렌 블루(1:40)로 염색하고 물로 세척하고 공기 중에서 건조하고 현미경으로 관찰합니다. 표본에서 volutin의 알갱이는 붉은 색을 띠고 세포의 세포질은 파란색입니다 (그림 1, 부록 2).
작업 번호 2. 효모 세포에서 지질 과립을 감지합니다. 효모와 사상균의 예비 지질은 중성 지방입니다. 박테리아에서 이 기능은 하이드록시부티르산에 의해 수행됩니다.
지방 내포물의 착색.수단 III 용액 한 방울을 유리 슬라이드의 미생물 수성 현탁액 한 방울에 첨가하고 커버 유리로 덮고 VI-40 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 관찰합니다. 수단 III는 박테리아 세포의 지방 함유물에 용해되어 주황색-빨간색으로 염색됩니다. 세포의 세포질은 무색으로 남아 있습니다.
작업 번호 3. 효모 세포에서 글리코겐 유사 다당류를 검출합니다. 박테리아 세포에서 탄수화물 성질의 예비 물질은 과립 형태로 축적됩니다. Granulosa는 Lugol 시약과 상호 작용할 때 파란색으로 변하는 녹말과 같은 물질입니다. 글리코겐은 동일한 조건에서 적갈색으로 염색되는 다당류입니다. 육아종은 원핵 세포에서만 발생합니다.
글리코겐과 과립막의 염색.약한 Lugol 용액 한 방울을 유리 슬라이드의 미생물 현탁액 한 방울에 첨가하고 커버 유리로 덮고 VI-40 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 관찰합니다.
작업 번호 4. 음성 대비로 세균 세포의 캡슐을 감지합니다(in아조토박터).
음성 생체 내 제제에서 캡슐 식별.미생물 루프가 있는 지방이 잘 제거된 유리 슬라이드에 검정 잉크를 한 방울 떨어뜨리고 연구된 미생물 배양액 한 방울을 유리 슬라이드를 사용하여 배포하고 건조합니다. 침수 시스템으로 치료하십시오. 잉크의 어두운 배경에는 윤곽이 뚜렷한 세포 주변의 캡슐 투명 영역이 나타납니다(그림 8. 부록).
작업 번호 5. 포자와 세포질의 감별 염색 수행(in당신. 마이코이데스).
Ozheshka 방법. 건조된 제제를 0.5% 염산증기가 나타날 때까지 2분간 가열한다. 도말은 물로 세척하고 여과지로 덮고 Tsil's carbolic fuchsin으로 채웁니다. 증기가 나타날 때까지 가열하면서 5분간 염색합니다. 물로 세척하고 1% 황산에서 0.5-1분 동안 분별한다(시간은 경험적으로 결정됨). 혼합물을 물로 세척하고 30초 동안 메틸렌 블루로 염색한다. 다시 한 번 세척하고 건조하고 현미경으로 관찰합니다. 포자는 분홍색, 세포질 - 파란색으로 착색됩니다 (부록의 그림 2 번).
작업 번호 6. 박테리아의 그람 염색을 수행합니다. 차이 화학적 구성 요소박테리아의 세포벽은 그람에 따른 염색 능력에 영향을 미칩니다. 이를 기반으로 박테리아는 그람 양성과 그람 음성으로 나뉩니다 (탭 번호 3). 그람 양성의 껍질에는 다당류, 뮤레인 및 테이코산이 더 많이 포함되어 있습니다. 그람 음성의 껍질은 지질 함량이 높은 다층 구조(지단백질 및 지당류)를 가지고 있습니다. 염색될 때, 그람 양성 미생물은 주요 염료와 함께 알코올 불용성 요오드 화합물을 형성하고, 그람 음성 미생물에서는 이 화합물이 알코올에 용해됩니다.
그람 얼룩.유리 슬라이드에 3개의 도말을 적용한 다음 동시에 동시에 처리합니다. 그람 양성으로 알려진 박테리아 배양에서, 그람 음성으로 알려진 박테리아 배양에서, 그리고 그들 사이에 A로부터의 도말입니다. 연구 중인 미생물의 배양. 젊은 하루 문화가 사용됩니다.
도말은 공기 중에서 건조시키고 버너 화염에 고정시키고 1% 젠티안 바이올렛 수용액으로 1분간 염색한다. Lugol 용액으로 염료를 씻어내고 같은 용액으로 1분간 도말한다. 제제를 물로 세척하고 95% 에탄올이 든 병에서 분화합니다(0.5-1.0분). 도말의 구별 후, 제제는 즉시 물로 완전히 세척되고 추가 염료 - 0.1 % 푹신 수용액으로 2-3 분 동안 염색됩니다. 제제는 최종적으로 물로 세척되고 공기 중에서 건조되고 오일 침지 현미경으로 관찰된다. 준비에서 그람 양성 박테리아는 라일락 - 보라색, 그람 음성 - 분홍색 - 진홍색으로 염색됩니다 (부록 그림 2).
표 3. 그람 염색에 대한 박테리아의 비율
황색포도상구균 | 대장균 |
연쇄상 구균 | 프로테우스 불가리스 |
고초균 | 녹농균 |
사카로마이세스 | 시겔라 sp. |
질문 및 작업 제어
박테리아 세포막의 구조. 캡슐의 형성.
그람 염색에 대한 박테리아의 비율. 그람 양성균과 음성균의 특징.
세포막 및 세포내 막 구조.
핵 장치, 구성, 조직 및 복제.
리보솜, 가스 액포 및 기타 박테리아 소기관; 그들의 의미.
박테리아 세포 내포물(다당류, 다인산염, 지질, 황 내포물).
박테리아 번식 방법. 박테리아의 포자 형성.
편모. 박테리아의 움직임. 택시.
독학 질문
미생물의 유전 요인.
변화를 일으키는 메커니즘 유전 정보미생물.
수업 번호 4
공기와 물의 미생물에 대한 정량적 계산
미생물 수의 결정
목적: 공기와 물의 미생물에 대한 정량적 설명을 수행합니다.
작업
공기와 물의 미생물에 대한 정량적 계산 방법을 연구합니다.
공기의 미생물학적 분석 및 물의 위생-세균학적 검사를 수행합니다.
재료 및 장비.멸균 MPA가 있는 페트리 접시, 멸균 1ml 피펫, 수조, 전기 스토브, 온도계, 수돗물, 저수지의 물, 스피릿 램프, 성냥.
기본 개념.물의 총 미생물 수,공기의 총 미생물 수, 대장균 지수, 대장균 역가, 위생 지표 미생물, 자생 미생물군, 동종 미생물군, 부성 구역.
진행
작업 번호 1. 공기의 TMC(총 미생물 수)를 결정한 경험을 쌓습니다.
감염을 위해 시험실 또는 야외에서 5분 동안 배양접시를 엽니다. 페트리 접시의 뚜껑을 제거하고 뒤집지 않고 옆에 놓습니다. 실험의 변형, 접종 날짜는 페트리 접시 뚜껑에 표시됩니다. 감염된 페트리 접시는 25-28 ° C의 온도 조절기에 놓입니다.
2-3일 후, 페트리 접시의 한천 플레이트에서 발달한 미생물 집락의 수를 계산합니다.이 경우 다음이 고려됩니다. 100cm 면적에 대한 대략적인 계산(Omelyansky)에 따르면 2 공기 10리터에 있는 양만큼 많은 미생물과 포자가 5분 안에 가라앉습니다. 우리는 각 식민지가 하나의 세포 또는 포자에서 발생했다고 가정합니다. 이자형이 방법은 대략적인 데이터만 제공하지만 다른 방의 공기 중 미생물의 상대적 수를 통해 매우 정확하게 감지할 수 있습니다.표 4를 채우고 결론을 도출하십시오.
예: 페트리 접시에서 5개의 콜로니가 발견되었으며 접시의 반경은 2cm입니다. 면적은 S = πr입니다. 2 = 3.14 * 4 = 12.5. 그런 다음 10 리터가 들어 있습니다.
표 4. 실내 공기의 총 미생물 수(TMC).
MPA 플레이트에서 공기로부터 분리된 미생물 군집을 사용하여 종 식별 작업을 수행할 수 있습니다. 대부분의 경우 미세 구균, 사르신, 일부 간균 및 박테리아의 식민지가 공기에서 방출됩니다.
작업 번호 2. 물의 TMP를 결정하는 경험을 쌓습니다.
연구를 위해 수돗물을 멸균 플라스크에 넣습니다. 멸균 피펫으로 플라스크에서 물 1ml를 취하여 곧게 펴진 배지(MPA)가 있는 페트리 접시에 추가합니다(온도가 45°C보다 높아서는 안 됨). 컵을 닫고 부드럽게 기울여 배양 배지를 교반하고 플레이트를 동결시킨 다음 온도 조절 장치에 둡니다. 3-5일 후 페트리 접시에서 발생한 집락을 세어 물 1ml에 들어 있는 박테리아의 수를 측정합니다.
집락을 세어 낸 후 물의 미생물 수가 결정됩니다. 희석액이 있는 경우 이를 고려하여 시험수 1ml당 미생물 수입니다.
데이터는 표 5의 형태로 제공되며 결론이 도출됩니다.
표 5. 식수의 총 미생물 수(TMC)
수돗물 |
통제 질문
공기의 미생물의 특징. 공기 중 미생물의 확산.
실내 공기의 위생 상태에 대한 기준입니다.
공기의 위생 및 미생물 연구.
식수의 미생물총.
자연수의 미생물군. 물 속의 미생물 분포.
식수의 위생 지표. 물의 총 미생물 수입니다. 대장균 지수, 물의 대장균 역가.
수역의 오염 및 자체 청소. 수역의 자체 정화 과정에서 미생물의 역할.
음용수 및 폐수의 생물학적 처리.
물의 위생 및 세균 검사. TMP, 대장균 지수, 대장균 역가의 측정.
공기, 물, 토양의 위생 표시 미생물.
위생 지시 미생물에 대한 요구 사항.
식품의 미생물군(신 우유, 생선, 고기, 소시지, 통조림 식품).
식품 원료 및 식품의 안전성을 평가하는 데 사용되는 미생물 그룹의 특성.
다양한 식품에 대한 위생 및 세균 기준.
식품의 위생 및 세균 연구 방법.
미생물의 서식지로서의 토양.
토양 미생물 확산의 환경 요인.
토양미생물의 관계.
유기 물질의 광물화 및 부식질 형성 과정에서 토양 미생물총의 참여.
토양의 위생 및 세균 연구.
수업 번호 5
미생물의 순수한 문화 얻기
미생물의 정량적 계산의 비계 방법
목적: 미생물의 순수한 배양액을 분리하고 미생물의 수를 세는 nephelometric 방법을 마스터합니다.
작업
"소진" 스트로크 방법으로 순수한 배양액의 분리를 수행합니다.
nephelometric 방법을 사용하여 미생물 정량화
재료 및 장비.멸균 MPA, FEK, Goryaev의 챔버, 현미경, 미생물 루프, 정신 램프, 성냥이 있는 페트리 접시.
기본 개념... 순수 배양, 성장, 번식, 이분법, 신진, 세포 주기(단형, 이형, 다형), 생성 시간, 비성장률, 바이오매스 생산량, 경제 계수, 정지 성장기, 지연기, 지수 곱셈기, 정지기, 시들기 단계, 비유동 문화, 흐르는 문화, 동기 문화.
진행
작업 번호 1. 미생물의 순수한 배양물 얻기
호기성 순수 배양물의 분리는 고형 영양 배지의 표면에 농축 배양물을 산란시켜 수행됩니다. 파종은 고갈 스트로크 방법으로 수행됩니다. 집락이 성장한 후 분리된 집락의 순도를 육안 및 현미경으로 확인합니다. 3~6일 후, 분리된 미생물 군집을 선택하고 설명합니다(부록의 그림 사용).식민지는 다음 계획에 따라 설명됩니다.
콜로니 크기: 포인트(D - 1mm 미만), 소형(D - 1-2mm), 중형(D - 2-4mm) 및 대형(D - 4-6mm 이상).
식민지의 모양은 둥글고 아메바성이며 뿌리 줄기입니다.
광학적 특성 - 투명, 무광, 형광, 반투명(반투명), 불투명, 광택.
색상 - 콜로니의 색상과 배지로의 안료 방출을 기록합니다.
표면은 매끄럽고 거칠고 접혀 있으며 울퉁불퉁합니다.
프로필 - 평평하고 볼록하고 분화구 모양이며 한천으로 자라는 등
군체의 가장자리는 매끄럽고 물결 모양이며 엽상, 가근 등입니다.
콜로니의 구조는 균질하거나 미세하거나 거친 입자입니다.
일관성 - 기름진, 반죽 같은, 점성, 필름.
작업 번호 2. nephelometric 방법을 사용하여 미생물의 정량적 평가를 수행합니다.
a) Nephelometric 방법.세포 밀도 S. 세레비지애 액체 매질에서 광학 경로 길이가 0.5cm인 큐벳과 녹색 필터(A = X 540nm)를 사용하여 비구광법(FEC)으로 측정됩니다. 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면 세포 밀도가 0.1-0.6 범위에 있어야 합니다. 0.6 이상의 세포 농도에서는 2차 광산란이 발생하여 과소 평가된 결과를 초래합니다. 따라서 고밀도 현탁액은 빛 투과율을 측정하기 전에 물로 2, 4, 6, 8, 10배 희석해야 합니다. 각 현탁액(물이 대조군으로 사용됨)의 광학 밀도 측정 결과는 표 6에 기록되어 있습니다.
b) Goryaev-Tom 챔버에서 세포를 계산합니다.광전 비색계(FEC)의 판독값에서 배지의 미생물 세포 수로 전환하기 위해 Goryaev-Tom 계수 챔버와 효모 현탁액의 희석액을 사용하여 세포 수를 계산합니다. 방법. 셀은 8 * 대물렌즈를 사용하여 큰 격자 사각형으로 계산됩니다. 계산된 세포의 총 수는 600개 이상이어야 합니다. 해당 현탁액 1ml의 세포 수는 M = 1000 * a * n / h * S 공식으로 계산됩니다. 여기서 M은 1ml의 세포 수입니다. 서스펜션; a - 그리드의 큰 사각형에 있는 평균 셀 수. h - 챔버 깊이(1/10 mm); S - 그리드의 큰 정사각형 면적(1/25mm 2 ); n은 현탁액의 희석 정도입니다. 1000mm 3 - 1ml 얻은 결과, 1 ml의 백만 세포가 표에 기록됩니다. 6.
표 6. Goryaev 챔버를 사용하여 설정한 현탁액의 효모 세포 수 및 해당 FEC 판독값
FEC 표시 |
표의 데이터를 기반으로 보정 곡선을 구성합니다. 6번은 가로축에 효모 세포의 수를 표시하고 세로축에 해당 현탁액의 광학 밀도를 표시합니다. 교정 곡선은 다음을 위해 그려집니다. 빠른 결단력 FEC의 표시에 따른 특정 유형의 미생물의 세포 수.
질문 및 작업 제어
축적 문화와 선택의 원칙. 순수한 문화, 생산 방법 및 중요성.
미생물의 번식.
박테리아의 세포주기. 개별 미생물 및 개체군의 성장. 균형 및 불균형 성장.
작물 성장 매개변수: 생성 시간, 비성장률, 바이오매스 생산량, 경제 계수.
성장 곡선, 개별 단계의 특징. 지속적인 배양으로 미생물의 성장. 동기 문화.
수업 번호 6
식품의 위생-세균 연구
목적: 식품 상태에 대한 위생 및 세균학적 평가를 수행합니다.
작업
1. 일부 식품의 총 미생물 수를 결정합니다.
2. BGKP(E. coli 그룹의 박테리아)의 존재를 확인합니다.
재료 및 장비.MPA가 있는 페트리 접시, Endo 배지가 있는 페트리 접시, 1ml 피펫, 막자사발, 메스, 멸균수가 9ml인 시험관, Kessler 배지가 있는 시험관, 물 100ml가 있는 멸균 플라스크, 저울.
기본 개념.식품의 특정 미생물군, 식품의 비특이적 미생물군, BGKP, 위생 지시 미생물.
진행
작업 번호 1. 다음 단계에 따라 BGKP의 존재와 식품의 일반적인 오염을 확인합니다.
1. 연구용 식품의 준비.
시료 10g(다른 곳에서 멸균 채취)을 자기 절구에 묻혀 문지르고 등장성 염화나트륨 용액 90ml를 서서히 가하여 실온에서 몇 분간 방치한다. 그런 다음 접종 및 희석용 현탁액(1ml)을 넓은 코가 있는 멸균 피펫으로 때립니다. 조제된 현탁액 1ml에는 출발 생성물 0.1g이 포함되어 있다고 가정합니다(희석 10-1 ). 액체 농도의 제품은 사전 준비 없이 작물을 위해 씨를 뿌리고 희석합니다.
2. 파종용 식품 희석액 준비.
액체 농도의 제품의 경우 희석액은 다음과 같이 준비합니다. 제품 1ml를 멸균 피펫으로 취하여 멸균 등장성 염화나트륨 용액 9ml가 들어있는 시험관에 넣고 혼합합니다. 결과 희석 (10-2 )는 동일한 방식으로 필요한 횟수(10의 배수)로 추가 희석합니다.
그림 번호 1. 고체 영양 배지에 토양 현탁액의 희석 및 파종 준비
3. 총 오염의 측정.
접종을 위해 선택한 희석액을 45-50°에서 용융된 멸균 페트리 접시에 1ml를 추가합니다. 0 MPA, 그 후에 혼합됩니다. 배지를 고형화하고 작물을 37 ° C에서 하루 동안 재배 한 후 재배 된 콜로니 (CFU)의 수를 계산합니다. 제품 1ml 또는 1g에 들어있는 총 박테리아 수를 결정하십시오.
4. BGKP의 존재 확인.
파종을 위해 확립 된 규범에 따라 BGKP가없는 제품의 양이 사용됩니다. 시험 제품 샘플의 선택된 희석액에서 1ml를 취하여 Kessler 배지가 있는 튜브에 접종합니다. 파종된 튜브를 37°C에서 24시간 동안 배양하고 성장 징후(기체 형성 또는 배지 색상 변화)가 없는 경우 테스트 제품이 표준에 부합하는지에 대해 결론을 내립니다. 성장의 징후가 있으면 Endo 배지에서 파종합니다. 작물은 37°C에서 18-20시간 동안 배양됩니다. 농작물을 볼 때 BGKP에 대해 의심스럽거나 전형적인 집락이 나타납니다(금속 광택이 있거나 없는 빨간색, 분홍색, 옅은 분홍색 집락 형성). 그들은 살아있는 세포와 고정 세포를 준비하고 그람 현미경 검사법에 따라 염색합니다. 둥근 끝이 있는 그람 음성 비포자 형성 막대의 검출은 BGKP의 존재 가능성을 나타냅니다.
총 오염 및 대장균의 존재에 대한 데이터가 표에 입력됩니다. 위생 및 미생물 표준 (SanPiN 2.3.2.560-96) (탭 번호 7)을 사용하여 다양한 식품의 미생물에 대한 결론이 도출됩니다.
표 7. 일부 위생 및 세균 표준(SanPiN 2.3.2.560-96)
러시아 치즈 | 0,001 |
아이스크림 | 1*10 5 | 0,01 |
통제 질문은 4과를 참조하십시오.
수업 번호 7
토양 미생물 증후
목적: 토양미생물의 종 구성과 분포를 연구한다.
작업
1. 토양 미생물과 우점종의 성질을 연구한다.
2. 토양 미생물총의 양적 및 질적 설명을 확인합니다.
재료 및 장비.슬라이드, MPA가 포함된 멸균 페트리 접시,저울, 추, 메스, 모르타르, 고무 장갑, 90ml 멸균 증류수 플라스크, 250ml 멸균 플라스크, 9ml 멸균수가 포함된 시험관, 10ml 및 1ml 피펫, 0.1ml 마이크로피펫, 유리 주걱.
진행
작업 번호 1. (Kholodny에 따르면) 유리 오염 방법으로 토양 및 근권 microbocenoses의 특성을 연구합니다.
토양의 평평한 표면에서 칼로 절단이 이루어지며 그 깊이는 연구 된 수평선에 따라 다릅니다. 세척 및 탈지 된 유리 (동시에 여러 유리를 가져옴)를 절단면의 수직 벽에 단단히 누르고 흙으로 덮습니다. 안경은 일주일에서 몇 달 동안 토양에 보관됩니다.
노출시간 경과 후 유리 뒷면의 흙을 제거하고 유리의 실험면을 공기 중에서 건조시킨 후 뒷면을 버너 화염에 통과시켜 3회 고정한다. 고정 후 유리를 바닥에 내리지 않고 시험면이 아래로 향하게 하여 물에 담근다. 세척 후, 제제를 Carbolic erythrosine 용액에 30분에서 24시간 동안 담그고 침지 시스템이 있는 현미경으로 염색된 제제를 검사합니다. 현미경 검사 중에 미생물총의 특성, 유리의 오염 밀도 및 지배적인 형태가 기록됩니다.
작업 번호 2. 토양의 TMP를 결정하십시오.
희석 방법에 의한 토양 현탁액의 제조.무균 상태를 관찰하면서 토양 10g을 달아 무균 모르타르로 옮깁니다. 멸균수 90ml가 들어있는 첫 번째 플라스크에서 물 2~3ml를 첨가하여 절구의 흙 시료를 반죽 상태로 적시고 고무장갑을 끼고 손가락으로 5분간 문지른다. 연삭 후 모르타르의 토양을 물로 두 번째 건조 플라스크로 옮기고 첫 번째 희석액을 1/10로 얻습니다. 플라스크 안의 흙 현탁액을 5분간 흔든 다음 30초 동안 방치한 다음, 흙 현탁액 1ml를 플라스크에서 1번 시험관에 옮겨 멸균 증류수 9ml를 가한 멸균 피펫으로 옮긴다. , 두 번째 희석이 얻어진다 - 1/100. 유사한 방식으로 예상되는 미생물 수에 따라 토양 현탁액의 일련의 후속 희석액 -1/1000, 1/10000, 1/100000 이상을 준비합니다(그림 1, 단원 6).
박테리아를 분리하고 정량하기 위해 토양 현탁액을 영양 배지(MPA, KAA, 토양 한천, Ashby 배지, 방선균을 설명하기 위해 KAA 또는 Czapek 배지 사용) 중 하나에 파종합니다. 페트리 접시의 박테리아 식민지는 3 - 5 일 후, 곰팡이와 효모 - 5 - 7 일 후, 방선균 - 7 - 15 일 후에 계산됩니다. 토양 1g의 미생물 함량은 다음 공식에 의해 결정됩니다. a = b * c, 여기서 a - 토양 1g의 미생물 수,비 - 평균 식민지 수,에 - 번식. 그들은 토양, 물 및 공기의 미생물군의 종 구성과 다양성을 비교하고 결론을 내립니다.
질문과 과제를 통제하십시오. 4과를 참조하십시오.
수업 번호 8
질소 화합물의 미생물 전환
목적: 미생물에 의한 유기질소화합물의 전환과정의 특징을 연구한다.
작업
단백질 가암모니아화 과정에 관여하는 미생물을 연구합니다.
요소 암모니아화 과정에 참여하는 미생물을 연구합니다.
재료 및 장비:단백질 및 요소 암모니아화 과정을 재현하기 위한 배지, 현미경, 미세 제제 준비용 장비.
기본 개념.암모니아화, 프로테아제, 펩티다제, 우레아제, 탈아미노화, 탈카르복실화.
진행
작업 번호 1. 단백질의 암모니아화를 수행하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다. 단백질 물질의 암모니아화를 연구하기 위해 3% 펩톤이 첨가된 육수를 영양 배지로 사용할 수 있습니다.30ml의 배지를 100ml 플라스크에 붓고 1/3 티스푼의 흙을 첨가합니다. 플라스크는 면 마개로 닫힙니다. 배지 위에는 방출된 암모니아를 감지하기 위해 증류수로 적신 적색 리트머스 또는 범용 지표 용지와 황화수소 및 메르캅탄을 감지하기 위해 아세트산 납의 알칼리 용액에 적신 여과지 두 장의 종이가 매달려 있습니다. 마개와 플라스크 목의 벽 사이에 고정하십시오. 종이는 환경에 닿지 않아야 합니다. 28-30 ° C에서 배양 3-5 일째에 플라스크의 내용물을 분석합니다. 단백질 가암모니아화 과정의 원인 물질과 그 대사 산물이 결정됩니다.
현미경 사용.단백질 물질의 부패성 부패의 원인 물질을 감지하기 위해 분쇄 된 방울의 살아있는 박테리아 제제와 고정 및 착색 제제가 준비됩니다. 다른 것보다 더 자주 모바일 세포가 준비에서 발견됩니다.프로테우스 불가리스 (부록의 그림 4)단백질 분해의 초기 단계에서 우세합니다. 이들은 길이가 같지 않은 포자를 형성하지 않는 막대기입니다. 또한, 제제에 많은 포자 형성 세포가 있습니다.바실러스 마이코이데스 및 클로스트리디움 sp. (부록 그림 1, 4). 후자의 경우 포자는 말단에 위치하고 직경이 세포의 너비를 초과합니다.당신. 진균 호기성 조건에서 단백질 물질의 암모니아화를 유발하고, C. 퍼트리피쿠스 - 혐기성 조건에서 발생하지만 환경에 산소를 흡수하는 호기성 미생물이 있는 경우 호기성 조건에서도 발생할 수 있습니다.
NH 대기로 방출 3, 빨간색 리트머스 종이의 매달린 스트립을 파란색으로 그립니다. 납 종이가 은빛 코팅으로 덮이면 황화수소의 영향으로 검은 색으로 변하고 H와 함께 2 S, 메르캅탄도 방출됩니다(예: 메틸 메르캅탄 CH 3 SH).
작업 번호 2. 요소 암모니아화 과정에 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다. 요소의 암모니아화 과정을 모니터링하기 위해 다음 조성의 영양 배지(증류수 g/l)를 사용할 수 있습니다. 요소 - 5.0; 에 2 NRO 4 - 0.5; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.2.
배지를 100ml당 30ml 플라스크에 붓고 토양을 접종하고 25-30°C의 항온조에 둡니다. 암모니아를 감지하기 위해 붉은 리트머스 종이 조각을 면봉 아래에 매달아 놓습니다. 3-5일 후, 배양이 분석됩니다. 적색 리트머스 종이를 청색으로 하여 암모니아 방출을 확립하십시오.
현미경 사용.요소 암모니아화의 원인 물질을 연구하기 위해 배지 표면의 거의 눈에 띄지 않는 필름에서 제제를 준비하고 푹신으로 염색합니다. 대부분의 경우 세포는 현미경으로 관찰됩니다. Urobacillus pasteurii (Bac.probatus), 덜 자주 - Planosarcina ureae (부록 그림 5).
질문 및 작업 제어
질소의 광물화. 단백질 암모니아화에 관여하는 박테리아.
핵산의 분해.
요소, 요산 및 히푸르산의 분해.
질산화 공정의 특성화. 토양에서 질산염 형성을 수행하는 미생물.
자연에서 질산염과 아질산염의 회수.
탈질소화(dissimilatory nitrate reduction).
동화성 질산염 감소.
자유 생활 미생물에 의한 질소 고정.
연관 질소 고정.
공생 질소 고정. 결절 박테리아의 특징.
숙주 식물과 결절 박테리아의 상호 작용. 박테로이드의 형성.
콩과 식물이 아닌 식물의 공생 질소 고정.
질소 고정 과정의 화학.
14. 표 8을 채우십시오.
표 8. 질소 화합물의 전환에 관여하는 질소 순환 과정 및 미생물의 특성화
요소의 암모니아화 |
I상 질산화 |
공생 질소 고정 |
수업 번호 9
질소 화합물의 미생물 전환
목적: 미생물에 의한 미네랄 질소 화합물의 전환 과정의 특징을 연구합니다.
작업
1. 질산화 과정(I, II 단계)의 특징과 이에 관련된 미생물을 연구합니다.
2. 탈질 과정과 이에 참여하는 미생물의 특징을 연구한다.
3. 질소 고정 과정과 이에 관련된 미생물의 특징을 연구합니다.
재료 및 장비.질소 고정제 배양을 위한 Ashby의 액체 배지, 질산화제 배양을 위한 Vinogradskiy의 배지, 탈질소 배양을 위한 Giltai의 배지, 미세 준비 염색 장비, 현미경이 있는 플라스크.
기본 개념.질산화(1단계 및 2단계), 질소 고정화, 동화질산염 환원, 해리성 질산염 환원(탈질소화), 독립 미생물에 의한 질소 고정, 결합 질소 고정, 공생 질소 고정, 레그헤모글로빈, 질소분해효소, 질산염 환원효소.
진행
작업 번호 1. 질산화 과정에 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다. 질산화 박테리아의 축적을 위해 S.N. Vinogradsky의 영양 배지(증류수 g/l)를 사용하십시오.
배지를 멸균하고 1.0-1.5cm의 층으로 플라스크에 붓고 온실 토양 덩어리로 오염시킵니다. 플라스크는 면 플러그로 닫히고 14-21일에 25-28 ° C의 온도에서 자동 온도 조절 장치에 둡니다.
현미경 사용.질산화 박테리아를 연구하기 위해 플라스크의 액체에서 미세 제제를 준비합니다. 현미경의 시야에서 타원형 또는 구균성 세포의 클러스터가 보입니다.니트로소모나스(첫 번째 단계) 및 짧은 막대 세포니트로박터(두 번째 단계). 속의 대표자니트로소모나스 (부록 그림 6)타원형이며 경우에 따라 공에 접근하고 이동성이 있으며 하나의 긴 편모가 있습니다. 다른 유형니트로소모나스 토양에 매우 널리 퍼져 있으며 세포의 크기 또는 모양뿐만 아니라 환경의 적극적인 반응과 관련하여 서로 다릅니다. 가장 많이 공부한니트로소모나스 유럽. 세포는 구균 또는 타원형이며 크기가 0.5-1.5 미크론이며 이동성이 있으며 긴 극성 편모가 있습니다.니트로박터 - 작은 원형, 난형 또는 배 모양의 막대는 움직이지 않고 단일 또는 작은 그룹으로 연결되어 있으며 점액낭으로 둘러싸여 있습니다.(부록의 그림 7번)... 이 속의 박테리아 중에서 두 가지 유형을 구별하는 것이 일반적입니다.니트로박터 위노그라드스키와 니트로박터 아길리스.
암모늄 형태의 아질산염 형태로의 산화도 수행됩니다니트로소포스티스와 니트로소스피라 , 아질산염에서 질산염으로니트로 스피나.
작업 번호 2. 탈질 과정을 수행하는 미생물을 연구하려면 그림을 그리십시오. 탈질소 박테리아의 축적을 위해 다음 배지를 사용하십시오(g/l 단위): Rochelle 소금 - 20; 크노 3 - 2.0; K 2 NRO 4 - 0.5; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.2; FeSO 4 7H 2 오 - 흔적. 배지를 가장자리까지 큰 시험관에 높은 층으로 붓고 멸균합니다. 흙과 잘 섞어 기포를 제거한 후 고무관으로 닫고 2면에서 열리며 가운데 부분이 팽창된 유리관을 삽입한다. 마개는 액체의 일부를 유리관으로 밀어 넣습니다. 플러그 아래에 기포가 없어야 합니다. 바셀린 오일의 작은 층을 배지 위의 튜브에 부어 혐기성 조건을 만들고 30-35 ° C의 온도 조절기에 5-6 일 동안 놓습니다.
현미경 사용.깨끗한 피펫으로 기질 중앙에서 한 방울을 채취하고 고정 및 염색된 제제를 준비한 다음 침지 시스템이 있는 현미경으로 검사합니다. 준비는 포자를 형성하지 않는 구형 세포 또는 짧은 막대에 의해 지배됩니다.파라코커스 데니트리피칸스(Bacterium denitrificans) ) (부록의 그림 7 번). Rochelle 소금이 있는 배지에서 종종 발생합니다. P. stutzeri(아크로모박터 스투체리 - 2.0 - 4.0 마이크론을 측정하는 막대 모양의 세포, 모바일) (부록의 그림 7번). 이 경우 배양액은 녹황색 형광 색소를 형성합니다. 또한 탈질제에는 다음이 포함됩니다.녹농균 - 작은 막대(크기 1.0 - 1.5 미크론), 단일 또는 쌍으로 연결, 이동, 1 - 2개의 극성 편모를 운반합니다. 환경의 녹색화는 특히 구연산 탄소를 사용할 때 종종 관찰되며 이는슈도모나스 플루오레센스 - 작은 막대(크기 1.0 - 2.0 미크론), 이동성, 3 - 4개의 극성 편모가 있습니다.
작업 번호 3. 고정에 관여하는 미생물 연구 대기 질소그림 만들기. 자유 생활 질소 고정제의 축적을 위해 Ashby 배지가 사용됩니다. 영양 배지의 조성(증류수 g/l):만니톨, 포도당 또는 자당 - 20.0; 에 2 NRO 4 - 0.2; MgSO 4 0.2; 염화나트륨 0.2; K 2 SO 4 - 0.1; CaCOz - 5.0.
멸균하지 않은 영양 배지를 100 - 150ml의 플라스크에 붓고 1 - 1.5cm의 층으로 온실 토양 (1/3 티스푼)으로 오염시킵니다. 플라스크는 면 마개로 닫히고 28-30 ° C의 온도 조절 장치에 둡니다.
5~7일 후 배지 표면에 갈색을 띤 갈색의 아조토박터 필름이 형성됩니다. 플라스크 안의 액체는 거품을 일으키며 환경에서 박테리아의 발달을 나타내는 부티르산 냄새를 발산합니다.클. 파스퇴리아늄.
현미경 사용.고정된 미세 준비는 표면 필름에서 준비됩니다. 가장 흔한 두 가지 유형의 아조토박터는 다음과 같습니다.아조토박터 크로코컴 - 젊은 배양에서 막대 모양의 세포가 있고 운동성이 있으며 크기가 3 - 7 마이크론입니다.(부록의 그림 8번)... 오래된 배양에서 세포는 구균성이며 쌍을 이루고 사르시노 같은 패킷이며 일반적으로 점액낭으로 둘러싸여 있습니다. 세포에는 반짝이는 볼루틴 알갱이가 많이 있습니다. 고체 배지의 집락은 칙칙하고 퍼지거나 볼록하며 무색 또는 짙은 갈색에서 검은색입니다.아조토박터 비네란디이 - 어린 배양에서 세포는 막대 모양이며 크기가 2-3 미크론입니다. 오래된 문화에서 세포의 모양은 구형입니다. 한 방울의 액체에서 약물이 제조됩니다.클로스트리디움 파스퇴리아눔 - 운동성 막대 모양의 세포, 크기가 3 - 7 미크론, 단일 또는 쌍 및 짧은 사슬로 배열됨(그림 1.10 부록)... 포자는 타원형이고 편심하게 형성되어 있으며 포자 세포가 레몬 모양을 하고 있습니다. 많은 육아종이 세포에 축적됩니다. 콜로니는 희끄무레하고 매끄럽고 반짝입니다.
통제 질문은 8과를 참조하십시오.
10과
목적:
작업:
알코올 발효의 메커니즘과 그 병원체의 형태를 연구합니다.
과정의 메커니즘과 젖산 발효의 유형, 병원체의 형태를 연구합니다.
알코올이 초산으로 변하는 특징과 초산세균의 형태를 연구한다.
부티르산 발효의 기전과 그 병원체의 형태를 연구한다.
재료 및 장비... 소금물, 케피어, 제빵 효모, 맥주, 부티르산균 배양 배지, 염색 준비 장비, 현미경.
기본 개념.알코올 발효, 파스퇴르 효과, 동종 발효 젖산 발효, 이종 효소 젖산 발효.
진행
작업 번호 1. 알코올 발효에 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다. 20% 자당 용액 50ml와 자당 용액(20%) 10ml에 희석한 효모 약 1g을 250ml 플라스크에 붓습니다. 며칠 동안 약 35-40 ° C의 온도를 덮고 유지하십시오.
현미경 사용.실제로 사용되는 대부분의 재배 효모 종은 속에 속합니다.사카로마이세스(Saccharomices cerevisiae, 무화과. 부록 1, 2) 및분열당. 이 효모는 높은 농도의 설탕(최대 70%)과 알코올(최대 14%)을 견딜 수 있고 pH 4-6에서 발생하며 발효 부산물을 더 적게 형성한다는 점에서 야생 효모와 다릅니다.
작업 번호 2. 젖산 발효에 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다.유산균 발효 (균질 발효)의 박테리아에 익숙해지기 위해 기성품 젖산 제품 (요구르트, acidophilus, kefir)과 소금물 (이종 발효 발효)을 사용할 수 있습니다. 이 제품은 유리 슬라이드에 루프를 적용하고 얇은 스미어가 만들어집니다. 메틸렌블루 수용액으로 3~5분간 염색한다.
현미경 사용.젖산 제품에서 다음과 같은 균질 발효 발효 병원체가 가장 자주 발견됩니다.연쇄상구균 (부록의 9 번) 직경이 0.5-1.0 미크론 인 타원형 구균 형태를 갖는 쌍 (diplococci) 또는 짧은 사슬 (streptococci), 덜 자주 단일 세포의 배양에 위치합니다.락토바실러스 불가리쿠스 (부록의 그림 9) - 개별 세포와 짧은 사슬의 형태로 위치하는 움직이지 않고 그람 양성인 큰 막대기 (길이 4-5 미크론), 발달을위한 최적 온도는 40-45 ° C입니다 ;락토바실러스 아시도필러스 - 형태학에서는 불가리아에 가깝지만 발달 최적 온도는 37 ° С입니다.
이종효소발효의 원인물질 중에는 일반적으로락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 브라시카에, 류코노스톡 메센테로이데스및 기타 (염수의 미생물). 소금물 표면이나 케피어 표면에 있는 흰색 또는 크림색의 벨벳 같은 주름진 필름은 존재를 나타냅니다.게오트리쿰 칸디듐(Geotrichum candidum) 오이듐락티스) (부록의 그림 9 번) - 항상 젖산 발효를 동반하는 우유 곰팡이.
작업 번호 3.알코올을 아세트산으로 전환하는 데 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다.얇은 맥주 층(0.5-1.0cm)을 원뿔형 플라스크에 붓습니다. 플라스크를 면 마개로 닫고 30 ° C의 온도 조절 장치에 둡니다. 5-7일 후, 형성된 필름의 특성이 설명되고 얼룩진 얼룩이 현미경으로 관찰됩니다.
현미경 사용.아세트산 박테리아는 속으로 결합됩니다.아세토박터, 일반적인 보기아세토박터 아세티(부록의 그림 9)는 약하게 이동하는 막대 모양의 타원형 세포로 너비 0.6-0.8, 길이 1.0-3.0 미크론, 단일, 쌍 또는 사슬로 표시됩니다. 종종 부풀어 오르거나 가지가 있거나 실 모양의 형태로 퇴화 형태를 형성합니다. 아세트산 박테리아는 맥주에서 쉽게 분리됩니다.
작업 번호 4.부티르산 발효에 참여하는 미생물을 연구합니다. 껍질을 벗기지 않은 감자를 조각으로 자르고 시험관에 부피의 1/3을 채우고 분필을 넣고 가장자리까지 물로 채 웁니다. 튜브를 80 ° C의 온도에서 10-15 분 동안 수조에 넣습니다. 그런 다음 튜브를 마개로 닫고 25도의 온도 조절기로 옮깁니다.0 C. 2~3일 후 액체에서 부티르산 발효균이 발견됩니다.
현미경 사용.고정 준비에,클. 파스퇴리아눔, Cl. 부티리쿰(그림 1, 10 부록) - 끝이 둥근 이동식 스틱, 단일 및 쌍. 오래된 배양에서 포자는 세포의 한쪽 끝에서 발견됩니다.
통제 질문
알코올 발효.
누룩. 형태, 구조, 재생산 및 분류.
에틸 알코올의 아세트산으로의 산화.
젖산 발효의 화학 및 원인 물질(균질 발효 유형).
젖산 발효의 화학 및 원인 물질 (이종 발효 유형).
부티르산아세토부틸 발효.
펙틴 물질의 부티르산 발효.
혐기성 섬유 분해.
미생물에 의한 셀룰로오스 산화.
표 9 "발효 과정의 특성"을 작성하십시오.
표 9.탄소 전환 공정의 특성화(무질소 화합물의 발효 및 산화 공정)
독학 질문
영양 및 세포로의 영양소 섭취 방법.
미생물의 영양 요구 사항.
미생물에 대한 영양 유형.
미생물 대사. 발효, 호흡, 광합성.
11과
탄소 화합물의 미생물 전환
목적:기능 탐색 다른 유형그들의 병원균의 발효 및 형태.
작업:
펙틴 물질의 발효 메커니즘과 그 병원체의 형태를 연구합니다.
호기성 조건에서 셀룰로오스의 변형과 그 병원체의 형태를 연구합니다.
혐기성 조건에서 셀룰로오스 발효의 특징과 병원균의 형태를 연구한다.
재료 및 장비... 펙틴 물질을 발효시키는 미생물의 농축 배양, 셀룰로오스의 분해, 현미경, 염색 제제용 장비.
기본 개념.부티르산 발효, 펙틴, 펙티나아제, 셀룰로오스, 셀룰라아제.
진행
작업 번호 1.펙틴 물질의 발효에 관여하는 미생물을 연구하고 그림을 그립니다. 펙틴을 파괴하는 박테리아를 분리하기 위해 아마 또는 쐐기풀 영양 배지가 사용됩니다. 줄기에서 5-7cm 길이의 단을 준비하고 시험관에 넣고 수돗물을 부어 10-15 분 동안 끓입니다. 추출 물질은 끓임으로 제거되며, 이는 동반된 부티르산균의 탄소원으로 작용할 수 있습니다. 물을 빼내고 도마에 새로운 물을 붓고 면봉으로 튜브를 단단히 닫고 1 기압에서 20 분 동안 오토 클레이브에서 멸균합니다. 튜브가 냉각되면 배지가 신선한 아마 짚 조각으로 오염됩니다. 오염된 시험관을 35°C의 온도 조절 장치에 넣습니다. 3-5일 후에 펙틴 발효 과정이 시작되고 액체가 흐려지고 거품이 생깁니다.
현미경 사용.펙틴 발효 박테리아의 형태를 연구하기 위해 생체 내 제제가 준비됩니다. 시험관에서 뭉치를 제거하고 유리 슬라이드에 액체 한 방울을 짜내고 고정하고 필수 준비물을 준비합니다(Lugol 용액에서)... 표본에서 세포가 보입니다.클로스트리디움 펙티노보룸과클로스트리디움 펠시네움, 영양 및 포자 형성, 짙은 파란색의 과립 증에 대한 요오드로 염색됩니다 (부록의 그림 9 번).
작업 번호 2.섬유질 분해에 관여하는 미생물(혐기성 조건)을 연구하고 그림을 그립니다.혐기성 형태의 누적 배양을 얻으려면셀룰로오스 분해 박테리아Imshenetsky 환경을 사용합니다. 에바닥이 둥근 플라스크에 여과지 또는 면솜 약 1~2g을 넣고 다음 조성(g/l)의 배지로 상단을 채운다.4 HPO4 - 1.0; KN2 RO4 - 0.5; 에2 NRA4 - 0.5; CaC12 - 0.03; 펩톤 - 5; 마그네슘4 - 0.4; CaCO3 - 2.0; 염화나트륨 - 0.5; MnSO4 및 Fe2SO4 흔적;배지의 pH 7.0-7.4... 배지는 소량의 토양으로 오염되고 플라스크는 가스 배출구가있는 코르크 마개로 닫히고 30-35 ° C의 자동 온도 조절 장치에 배치됩니다. 이 경우 선택적 조건은 혐기성 조건뿐만 아니라 효소 셀룰라아제를 갖는 특정 셀룰로오스 분해 박테리아에 의해서만 소비될 수 있는 탄소원인 셀룰로오스의 존재에 의해 결정됩니다. 배지에 도입된 소량의 펩톤은 발효 과정을 강력하게 자극합니다. 7-10일 후에 셀룰로오스 발효가 시작되며 이는 2-3주 동안 지속됩니다. 여과지는 발효가 진행됨에 따라 약간 칙칙해지며 황색으로 변하며 점차 붕괴됩니다.
현미경 사용.종이 한 장을 현미경으로 관찰합니다. 혐기성 조건에서 셀룰로오스 분해 과정은 속 박테리아에 의해 수행됩니다.클로스트리디움. 클. 오멜리안스키(부록의 그림 9)는 최대 8 μm의 긴 막대 모양의 세포 형태를 가지며 오래된 문화에서는 길이가 약 10-15 μm이며 단독으로 위치하거나 실로 연결됩니다. 포자는 구형이며 세포 끝에 형성되며 세포는 드럼 스틱 형태를 취합니다. 토양과 물에 전념합니다. 최적의 성장 온도는 30-35 ° C입니다.
작업 번호 3.섬유질 분해에 관여하는 미생물(호기성 조건)을 연구하고 그림을 그립니다.호기성 섬유 분해 박테리아를 분리하기 위해 Hutchinson의 영양 배지가 사용됩니다. 배지 조성(g/l): K2 NRA4 - 1.0; 염화나트륨 - 0.1; 칼슘2 - 0.1; FeCl3 - 0.01; 마그네슘4 - 0.3; 나노3 - 2.5; 배지의 pH는 7.2-7.3입니다. 멸균 영양 배지를 1.5-2.0cm 층의 원추형 플라스크에 붓고 배지를 흙 덩어리로 오염시키고 접힌 필터를 원뿔이 위로 향하게하여 배지 표면으로 내립니다. 플라스크를 면 마개로 닫고 25-30 ° C의 온도에서 10-14 일 동안 온도 조절 장치에 둡니다. 영양 배지와 공기의 경계에서 셀룰로오스 파괴 박테리아의 영양 및 호기성 호흡에 대한 최적의 조건이 만들어집니다. 이 영역에서 여과지의 파괴 과정이 가장 강렬합니다. 8-10일 후, 필터에 셀룰로오스 분해 박테리아 집락의 노란색-주황색 반점이 나타납니다. 종이가 분해되고 필터가 점차 바닥에 가라앉습니다.
현미경 사용.액체 한 방울의 얼룩은 미생물 루프가 있는 플라스크에서 파괴된 섬유 덩어리에서 준비됩니다. 대부분의 경우 주문 대표는 준비에서 찾을 수 있습니다.플라이박테리아과시토파갈레스슬라이딩 박테리아 그룹 (그림 10 부록).속사이토파가끝이 뾰족하고 약간 구부러진(2-10 미크론) 긴 막대 모양의 세포로 표시됩니다. 집락은 노란색, 주황색, 갈색 갈색, 매끄럽고 끈적끈적합니다.
속셀비브롤로작고 약간 구부러진 이동 막대(2-4 미크론)로 표시됩니다. 집락은 황토-황색 점액입니다. 롤세포열끝이 뾰족한 짧고 두꺼운 곡선 스틱처럼 보입니다(2.0 * 0.7 미크론).
속소랑지움젊은 문화에서는 끝이 둥근(2-5 미크론) 두껍고 약간 구부러진 막대 모양의 세포처럼 보입니다. 문화의 노화와 함께 미세 포낭으로 구성된 자실체가 형성됩니다. 막대 모양의 세포가 짧아지고 두꺼운 막으로 덮여 불규칙한 윤곽을 얻습니다. 식민지는 밝은 주황색, 자주색입니다.
속폴리앙기움끝이 둥근 거의 직선형 막대 모양의 셀(3.5-8 미크론)로 표시됩니다. 노화와 함께 타원형의 미세 낭종이 형성되어 배 모양의 자실체가 연결됩니다. 자실체는 노란색, 주황색이며 기질에 직접 앉습니다.
박테리아 외에도 곰팡이는 호기성 섬유 분해에 관여합니다.Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Trichoderma및 일부 방선균.
통제 문제는 10과를 참조하십시오.
12과
미생물의 생태
목적:영향 검토 환경적 요인미생물의 성장과 발달에 대해.
기본 개념.절대 호온성 미생물, 호온성 미생물(통성 호온성 미생물), 호열성 미생물, 삼투압성 미생물, 갈온성 미생물, 동결 건조, 절대 호기성 미생물 및 혐기성 미생물, 미호기성 미생물, 호기성 혐기성 미생물, 방부제.
통제 질문
온도가 미생물의 성장과 발달에 미치는 영향. 온도와 관련된 박테리아의 생태학적 그룹.
미생물의 성장과 발달에 대한 습도의 영향.
빛과 각종 방사선이 미생물의 성장과 발달에 미치는 영향. 자기장의 영향.
미생물의 성장과 발달에 대한 산소 농도의 영향.
환경 반응의 영향미생물의 성장과 발달에 대해. 박테리아에 유독한 화합물 및 이온.
미생물의 적응 반응.
13과
항생제에 대한 박테리아의 민감도 측정
목적:항생제에 대한 미생물의 감수성을 결정하십시오.
작업:
1. 종이 디스크를 사용하여 한천에 확산하여 항생제에 대한 미생물의 민감도 측정
재료 및 장비.MPA가 포함된 페트리 접시, 항생제 용액으로 적신 멸균 디스크, 부생균 및 곰팡이의 순수 배양, 피펫, 스피릿 램프, 주걱.
기본 개념.항생제, 정균 및 살균 효과, R 인자, 내성.
진행
작업 번호 1.종이 디스크를 사용하여 한천에 확산하여 항생제에 대한 미생물의 민감도를 결정합니다.
항생제에 대한 미생물의 감수성을 결정하는 디스크 확산 방법은 항생제로 종이 디스크 주위의 성장 억제 영역의 직경을 기록하는 것을 기반으로 합니다. 시험된 미생물을 접종한 페트리 접시의 영양 한천 표면에 항생제가 함침된 종이 디스크를 적용하고,플레이트를 37℃에서 인큐베이션한다. 주변에 미생물 성장 억제 구역의 존재디스크는 약물에 대한 병원체의 민감도, 성장 지연 영역이 없음을 나타냅니다.
결정 진행.미생물 배양은 MPA가 포함된 멸균 페트리 접시에 적용됩니다. 매일 배양액을 접종원으로 사용합니다. 0.2ml의 세균 현탁액을 MPA 표면에 바르고 접시를 흔들어서 고르게 분포시킨 다음 피펫으로 과량의 액체를 흡입합니다.
컵은 실온에서 30-40분 동안 건조됩니다. 그런 다음 핀셋으로 접종 된 배지의 표면에 다양한 항생제가 함침 된 디스크를 부과합니다. 디스크는 매체와의 긴밀한 접촉을 위해 표면에 단단히 배치됩니다. 디스크는 컵 가장자리에서 약 2cm 떨어진 거리에 서로 같은 거리에 배치됩니다. 접시를 거꾸로 뒤집힌 온도 조절기에 놓거나 접시 뚜껑 아래에 원형의 여과지를 두어 응축수로 잔디가 침식되지 않도록 하고 37℃에서 18시간 동안 배양한다.
결과 평가.눈금자를 사용하여 디스크 자체의 직경을 포함하여 디스크 주변의 미생물 성장 억제 영역의 직경을 결정합니다. 단일 콜로니 또는 성장 억제 구역 내부의 미생물 성장 박막은 고려되지 않습니다. 디스크 주변의 미생물 성장 억제 구역이 없다는 것은 이 항생제에 대한 미생물의 감수성이 부족함을 나타냅니다. 최대 직경 10mm의 미생물 성장 억제 구역으로 균주는 그다지 민감하지 않은 것으로 간주됩니다. 10mm 이상의 미생물 성장 억제 영역은 균주의 민감도를 나타냅니다. 성장 지연 영역이 클수록 항생제에 대한 미생물의 민감도가 높아집니다. 결과를 표 10에 입력하십시오.
표 10.미생물의 항생제 감수성.
|
스트렙토마이신의 항생제 특성. 페니실린의 항생제 특성. 14과 의료 미생물학의 기초 목적:미생물 연구 - 동물과 인간의 병원체. 문학 레베데바 M.N. 미생물학. - M .: "의학", 1969. 미생물학, 바이러스학 및 면역학 기초 / Under. A.A. Vorobyov, Yu.S. Krivoshein 편집. - M.: 마스터리, 2001. 토론 문제 포도상구균의 예에 의한 병원성 구균의 특성. 염증성 및 화농성 피부 질환. 패혈증. 연쇄상 구균의 예에 의한 병원성 구균의 특성. 국소화 된 염증성 감염, 편도선염, 성홍열. 폐렴 구균의 예에 의한 병원성 구균의 특성. 폐렴. 수막구균의 예에 의한 병원성 구균의 특성화. 수막염. 임균의 예에 의한 병원성 구균의 특성화. 임질, blenorrhea. 흑사병균의 예에서 그람 음성 무포자 형성 세균의 특성. 역병. 야토병균의 예에서 그람 음성 비포자 형성 박테리아의 특성화. 야토병. 브루셀라의 예에서 그람 음성 비포자 형성 박테리아의 특성화. 브루셀라증. 대장균의 예에서 장내 세균의 가족. 장티푸스 및 파라티푸스 박테리아 그룹의 특성. 장티푸스 및 파라티푸스. 식인성 질병의 원인 물질. 살모넬라증. 이질의 원인 물질의 특성. 이질의 종류. 비브리오 콜레라의 특징. Klebsiella의 예에서 캡슐 박테리아의 구조. 탄저균의 특징. 탄저균 형태. 백일해 간균의 예에서 혈우병 박테리아의 특성. 가스 괴저의 원인 물질의 예에 의한 병원성 혐기성. 파상풍균의 예에 의한 병원성 혐기성균. 보툴리누스 중독의 원인 물질의 예에 의한 병원성 혐기성. 디프테리아균의 특징. 결핵균과 나병균의 예에 따른 항산균의 특성. 방선균의 예에 의한 병원성 진균의 특성화. 피부진균증. treponema pallidum의 예에 의한 병원성 스피로헤타의 특성. 매독. 재발열 스피로헤타의 예에 의한 병원성 스피로헤타의 특성.이 튜토리얼은 요약합니다 이론적 근거위생 미생물학뿐만 아니라 공기, 물 및 토양 미생물군의 다양한 매개 변수 결정과 관련된 일부 실험. 기타 일반 응용 의학 미생물학과 임상 미생물학의 두 섹션으로 구성됩니다. 첫 번째 섹션에서는 미생물 연구의 주요 방법, 특정 치료 방법 및 전염병 예방 방법을 설명하고 두 번째 섹션에서는 실험실 방법 ...
지도 시간... 켐팁. - 케메로보, 114p. |
실용적인 작업을 위해
직업을 위해:
19.01.17 쿡. 과자 장수
개발자:
베레텐니코바 O.M. 선생님
2016년 발루이키
설명
분야에서 실제 작업을 구현하기위한 이러한 지침 "식품 생산의 미생물학, 위생 및 위생의 기초 "직업에서 연방 주 교육 표준(이하 FSES)을 기반으로 개발되었습니다.
01/19/17 쿡. 과자 장수
체계적인 지침실습용은 1학년 학생을 대상으로 합니다.실제 및 실험실 작업은 다음을 해결하는 것을 목표로합니다.작업:
지식 동화의 인식과 강도를 높입니다.
분석, 연구 대상 비교, 연구 수행, 표, 다이어그램, 클러스터 작성, 결론 도출 능력을 개발하십시오.
학생에서 발전하다 논리적 사고, 인지 능력, 독립성;
습득한 지식과 기술을 생활에서 사용하도록 가르친다.
자료를 공부하고 통합할 때 다음 유형이 사용됩니다. 독립적 인 일:
교과서의 텍스트 작업.
프레젠테이션 작업.
연구 중인 개체로 작업합니다.
테이블 작업.
클러스터, 다이어그램 컴파일 작업.
기성품 미세 준비 작업. 미세 제제의 준비.
지침의 구조:
1.테마
2. 작업의 목적
3. 작업용 장비
4. 작업 진행
5. 작업 수행에 필요한 학생 지식의 제어 및 구현
6. 업무 수행 조건
각 실습 및 실험실 작업은 권장 사항에 따라 실제 작업을 위해 노트북에 액자로 넣어야 합니다.... (첨부 1)
수행 된 작업 결과의 제어는 서면 보고서 및 작업 과정에서 학생의 관찰 결과를 기반으로 수행됩니다.성과 평가 기준 실무.
실용 작품 일람
실용 1호
현미경 장치 및 작업 규칙.
실용 2호 효모와 곰팡이의 형태를 현미경으로 연구
실용 작업 3 번 박테리아, 효모, 곰팡이 세포 구조의 계획.
실기 4-5호
실제 작업 번호 6소독 용액 준비 및 보관 계획
점검을 목적으로 하는 실제 작업학문 분야의 이론적 지식을 실제로 적용하는 학생들의 기술
실제 작업 No. 1 현미경 장치 및 작업 규칙.
작업 목적: 가벼운 생물학적 현미경의 장치를 연구하고 그것으로 작업하는 규칙을 마스터하십시오.
장비, 재료: 현미경; 기성품 미세 제제
현미경 (그리스어에서.마이크로- 작고스코피오- 보기)는 기계, 광학 및 조명의 세 가지 주요 부분으로 구성된 광학 장치입니다.
생물학적 광학 현미경의 다이어그램은 그림 1에 나와 있습니다. 하나.
기계 부품 또는 삼각대는 다리, 베이스, 튜브 홀더, 스테이지, 단안 부착물(튜브), 회전 장치, 거친 초점 핸들(거시 나사), 미세 초점 핸들(미세 나사)로 구성됩니다.
튜브는 현미경의 망원경입니다. 접안 렌즈는 튜브의 상단 구멍에 자유롭게 삽입되고 튜브의 하단에는 축을 중심으로 회전하는 회전 장치 (리볼버)가 있으며 그 안에 대물 렌즈가 나사로 고정되어 있습니다. 리볼버를 회전하면 현미경으로 작업하는 동안 대물렌즈를 빠르게 변경하여 튜브 아래에 대물렌즈를 가져올 수 있습니다. 렌즈는 중앙에 있어야 합니다. 현미경의 광축에 장착됩니다. 이렇게하려면 클릭이 나타날 때까지 리볼버가 축을 중심으로 회전합니다.
주제 테이블은 연구된 준비를 그 위에 놓는 데 사용됩니다. 약물은 클램프(단자)로 테이블에 고정됩니다. 무대 중앙에는 광선의 통과와 준비의 조명을 위한 구멍이 있습니다. 일부 현미경 설계에서는 스테이지 주변을 따라 위치한 나사를 사용하여 스테이지를 이동할 수 있습니다. 이를 통해 다양한 시야에서 약물을 볼 수 있습니다.
1 – 접안 렌즈
2 – 단안 부착
(튜브)
3 - 회전 장치
4 - 렌즈
5 - 주제 테이블
6 - 콘덴서
7 - 컬렉터 렌즈 하우징
8 - 램프 홀더
9 - 경첩
10 - 콘덴서 암 이동용 핸들
11 - 미세 초점 핸들(마이크로미터 나사)
12 - 거친 초점 핸들(거시 나사)
13 - 튜브 홀더
14 - 노즐 부착용 나사
무화과. 하나광학 광학 현미경 장치의 다이어그램
거칠고 정밀한 포커싱을 위한 핸들(매크로 및 마이크로스크류)을 사용하여 튜브를 위아래로 움직여 시편에서 필요한 거리에 배치할 수 있습니다. 나사를 시계 방향으로 돌리면 튜브가 낮아지고 시계 반대 방향으로 돌리면 튜브가 올라갑니다. 매크로메트릭 나사를 돌리면 렌즈가 대략적으로 초점을 맞춥니다. 그것이 보이는 약물과의 거리에서. 매크로 나사를 돌리면 튜브를 20mm 이동할 수 있습니다. 정확한 초점 조정을 위한 마이크로미터 나사. 완전히 돌리면 튜브가 0.1mm 이동합니다. 마이크로 나사는 매우 조심스럽게 다루어야 합니다. 마이크로 나사의 회전은 180도 이하로 허용됩니다. 0 C는 한 방향 또는 다른 방향으로.
광학 부품 현미경의 가장 중요한 부분입니다. 대물렌즈와 접안렌즈로 구성되어 있습니다.
접안렌즈(위도.안구- 눈)은 일반적인 금속 프레임으로 둘러싸인 두 개의 평면 볼록 렌즈로 구성됩니다. 위쪽 렌즈는 눈(확대)이고 아래쪽 렌즈는 수집입니다. 렌즈 사이의 거리는 초점 거리 합계의 절반과 같습니다. 배율이 높은 접안렌즈는 초점이 짧으므로 접안렌즈의 길이도 짧아집니다. 렌즈 사이에 조리개가 있어 시야를 제한하고 가장자리 광선을 차단합니다. 가정용 현미경에는 3개의 교체 가능한 접안렌즈가 장착되어 있으며, 그 배율은 접안렌즈 본체(x7, x10, x15)에 표시되어 있습니다.
대물렌즈는 회전 장치의 소켓에 나사로 고정되며 금속 프레임으로 둘러싸인 렌즈 시스템으로 구성됩니다. 전면(전면) 대물렌즈는 배율을 제공하는 가장 작고 유일한 것입니다. 대물렌즈의 나머지 렌즈는 얻은 이미지의 불완전성(구면 및 색수차 현상)만 보정하며 보정이라고 합니다.
4개의 대물렌즈가 회전 장치의 소켓에 나사로 고정되어 있으며 대물렌즈 본체(x8, x20, x40, x90 또는 100)에 배율이 표시되어 있습니다. 각 대물렌즈는 자체 초점 거리(슬라이드와 전면 렌즈 사이의 거리)를 특징으로 합니다. x8 대물렌즈는 약 9mm, x40 대물렌즈는 0.65mm, x90 대물렌즈는 0.15mm의 초점 거리를 갖습니다.
조명부 현미경은 120 ... 220 V 주전원 전압에서 강압 변압기를 통해 전원이 공급되는 저전압 백열 램프가 있는 2개의 렌즈 콘덴서, 조리개 다이어프램 및 카트리지로 구성됩니다.
콘덴서는 준비의 더 나은 조명을 제공합니다. 광선을 빔으로 수집하고 스테이지의 개구부를 통해 시편으로 향하게 합니다. 핸들을 사용하여 콘덴서 암을 움직이면 위아래로 움직일 수 있으므로 광선의 수렴 각도와 결과적으로 물체의 조명 정도가 변경됩니다. 콘덴서의 위치가 높을수록 준비의 조명이 더 좋아집니다.
홍채 조리개는 콘덴서 아래에 있으며 콘덴서로 들어오는 빛의 흐름을 조절하는 역할을 합니다. 그것은 금속 초승달 모양의 판으로 구성됩니다. 특수 레버를 사용하여 조리개 구멍을 넓히거나 좁힐 수 있습니다. 시계 방향으로 돌리면 조리개 조리개가 커지므로 피사체의 조도가 높아집니다.
침지 렌즈로 작업 할 때 약물의 조명 정도가 최대이어야하므로 홍채 조리개 셔터가 열리고 콘덴서가 가장 높은 위치로 올라갑니다.
마른 렌즈로 작업할 때 일반적으로 도색되지 않은 물체가 고려됩니다. 대비를 달성하기 위해 콘덴서를 낮추고 조리개 조리개 개방을 줄입니다.
현미경 작업 규칙
작업대에서 현미경은 튜브 홀더와 함께 테이블 가장자리에서 3 ... 5cm 떨어진 곳에 배치됩니다.
현미경을 연결하고 올바른 조명을 설정하십시오.
시험편을 무대 위에 놓고 단자로 고정합니다.
필요한 렌즈를 튜브 아래에 놓고 매크로 및 마이크로 나사를 사용하여 초점 거리를 설정합니다. 따라서 immersion 대물렌즈로 작업할 때 한 방울의 immersion oil이 준비에 미리 적용되고 튜브 홀더가 유리에 닿을 때까지 macroscrew로 조심스럽게 내립니다. 그런 다음 접안렌즈를 주의 깊게 살펴보고 튜브 홀더를 아주 천천히 들어 올려 이미지가 보일 때까지 시계 반대 방향으로 돌립니다. 초점에 대한 렌즈의 정확한 조준은 마이크로미터 나사로 수행됩니다. 건식 렌즈로 작업할 때 표본은 먼저 x8 렌즈로 검사됩니다. 매크로 나사로 튜브 홀더를 들어올리고 접안 렌즈를 주의 깊게 살펴보고 초점 거리(약 9mm)를 설정하고 마이크로미터 나사를 사용하여 이미지 선명도를 얻습니다. 또한, 스테이지 또는 현미경 슬라이드를 이동하여 연구 대상이 가장 잘 보이는 프렙 부분을 필드 중앙에 설정합니다. 그런 다음 회전 장치를 축을 중심으로 회전시키면 x20 또는 x40 대물렌즈가 튜브 아래에 배치됩니다. 이 경우 x90 렌즈가 튜브 아래로 떨어지지 않아야 합니다. 회전 장치에서 대물렌즈는 x8 대물렌즈로 이미지가 발견되면 더 높은 배율의 대물렌즈로 프렙을 검사할 때 매크로를 사용하여 이미지의 선명도를 약간 조정할 필요가 있는 방식으로 배치됩니다. 및 마이크로미터 나사;
현미경 검사 중에는 두 눈을 모두 뜨고 교대로 사용해야 합니다.
작업이 끝나면 스테이지에서 프렙을 제거하고 콘덴서를 내리고 x8 대물렌즈를 튜브 아래에 놓고 부드러운 천이나 거즈를 알코올에 적셔 전면 x90 대물렌즈의 침지유를 제거하고 거즈 냅킨을 아래에 놓습니다. 렌즈, 튜브 홀더를 내립니다.
생물학적 현미경의 구조는 무엇입니까?
현미경의 기계적 부분은 어떤 부품과 메커니즘으로 구성되어 있습니까?
현미경의 광학 시스템을 구성하는 것은 무엇입니까?
현미경 조명 시스템에는 무엇이 포함되어 있습니까?
이머전 렌즈로 작업할 때 조명 시스템을 어떻게 설정해야 합니까?
현미경 작업의 기본 규칙을 나열하십시오.
과제 완료 조건
1. 작업의 장소(시간)
생물학 수업
실용 2호 효모 및 곰팡이 형태의 현미경 검사.
일의 목적 : 식품 생산에서 발견되는 곰팡이 및 효모의 형태학적 특성에 대해 알아봅니다. "분쇄 된 방울"준비에서 곰팡이와 효모의 현미경 검사 기술을 습득하십시오.
장비, 재료: 현미경; 해부 바늘, 슬라이드 및 커버슬립; 여과지; 정신 램프; 속 균류의 배양무코르, 아스페르길루스, 페니실리움, 알터나리아; 순수 효모 배양사카로마이세스세레비지애.
간략한 이론적 조항
미세한 균류의 형태 및 문화적 특성
버섯의 식물체는균사체 ... 균사체는 여러 개의 얽힌 관 모양의 필라멘트로 구성되어 있습니다.균사 ... 균사의 직경은 5-50 미크론입니다. 균사체의 구조에 따라 버섯은 상위와 하위로 나뉩니다. 고등 균류에서 균사는 큰 구멍이 있는 중앙에 격벽(septa)에 의해 분리됩니다. 그들은 자라면서 동시에 핵 분열이 일어나지만 세포 분열은 일어나지 않습니다. 따라서 곰팡이의 식물체는 하나의 큰 다핵 세포입니다. 모든 미세한 균류는 균사체 조각에 의해 무성하게 자랄 수 있습니다.
무성 생식으로 phycomycetes가 형성됩니다.포자낭 , 및 자낭균 -분생포자 .
미세한 곰팡이의 문화적 특성
미세한 균류의 집락은 집락보다 몇 배 더 큽니다. 단세포 생물(박테리아, 균류) 및 종종 페트리 접시의 영양 배지 전체 표면에서 자랍니다. 버섯 식민지의 일관성은 다릅니다. 펠트와 같은 가죽 같은 식민지가 더 자주 형성되고 덜 부서지기 쉽습니다. 콜로니의 표면은 솜털, 벨벳, 가루, 거미줄, 실, 가죽 또는 매끄러움과 같이 푹신할 수 있습니다. 고체 및 액체 배지에서 자랄 때 균사의 일부는 영양 배지로 자라며,기질 균사체와 균사의 다른 부분이 형성공기 육안으로 볼 수 있는 푹신한 플라크 형태의 균사체. 균사체는 또한 무색(흰색, 회백색) 또는 유색(검정, 갈색, 녹색, 노란색 등)일 수 있습니다. 자실 균사체만 착색된다.
다양한 클래스의 미세한 곰팡이의 특성
다양한 부류의 균류의 형태학적 특징은 그림 1에 나와 있다. 다섯.
속무코르 ... 그들은 포자낭의 형성과 함께 무성 및 유성으로 번식할 수 있다(그림 5). 외부에서 포자낭은 옥살산칼슘 결정의 얇은 가시로 덮여 있습니다. 포자낭이 익으면 부러지고, 포자가 방출되어 기류에 의해 운반됩니다. 포자낭에서 포자가 제거된 후에는 포자낭에 기둥이 남아 있고 아래쪽에 고리가 남아 있습니다. 점액 버섯 균사체의 색은 처음에는 흰색, 그 다음에는 회백색, 외관은 펠트.
그러나
비
에
아르 자형
무화과. 다섯다양한 종류의 버섯의 형태 학적 특징 :
그러나 - 무코르; 비 - 페니실리움; 에 - 아스페르길루스; 아르 자형 - 알터나리아
Mukorovye 버섯은 젖은 곡물, 맥아, 뿌리 작물의 표면, 식품, 축축한 방의 벽에서 칙칙한 푹신한 코팅 형태로 자랍니다.무코르흑인사탕무 덩어리 부패의 원인 물질입니다. 많은 점액 버섯은 다양한 유기산과 알코올(버섯 종무코르자바니쿠스, 무코르라세모수스), 효소 제제, 카로티노이드, 스테로이드.
출산 대표아스페르길루스 과 페니실리움 가장 미세한 완전한 균류를 결합하는 자낭균류에 속한다. 포자의 도움으로 무성 생식하는 동안 이러한 곰팡이는 분생포자를 형성합니다 (그림 5). Aspergillus와 penicilli는 자실 버섯에 속합니다. 이것은 유성 생식 중에 8 개의 자낭 포자가있는 특수 자실체에 자낭 (가방)이 형성됨을 의미합니다.
가족에게페니실리움 전체 금형의 약 절반을 차지합니다. 그들은 토양, 환기가 잘 안되는 지역의 공기에 널리 퍼져 있으며 다양한 제품 및 재료의 열화를 일으 킵니다. 이 곰팡이는 분지 격벽 균사체 (균사 직경 - 2 ... 3 미크론)와 패혈증 분생 포자 (술과 유사)가 있으며 끝에서 싹 - 교미경의 형태로 분기됩니다. 포자 사슬로 구성된 분생포자는 그들로부터 출발합니다. 분생포자의 종류에 따라 다음이 있을 수 있습니다. 다른 색상(흰색, 녹색 등). 많은 페니실리는 다양한 가치 있는 제품을 얻기 위해 산업적으로 사용됩니다. 이 속의 분리된 균주 중 25%는 항생제 활성을 가지며 다음과 같은 종은페니실리움공증, 페니실리움크리소제늄페니실린의 생산자로 사용됩니다. 일부 유형의 페니실리는 효소와 지질의 생산자로 사용됩니다. 노블 몰드는 부드러운 로크포르 및 카망베르 치즈 생산에 사용됩니다.페니실리움로케포르티과페니실리움카망베르티.
속 버섯아스페르길루스 200종 이상이 있다. 이 균류는 많은 격벽을 가진 잘 발달된 분지 균사체를 가지고 있습니다. 분생포자경은 무균성이며 상단은 배 모양 또는 구형으로 확장되어 작은 머리 모양을 하고 있습니다. 머리에는 분생포자 사슬이 있는 핀 모양의 교미구가 있는데, 이는 물뿌리개에서 쏟아져 나오는 물줄기와 비슷합니다. 따라서 이름 "리 몰드"(아스퍼거라틴어 - 물, 스프레이). Aspergillus conidia는 익을 때 다른 색을 띠고 다른 특성과 함께 종 소속을 결정합니다.
페니실리뿐만 아니라 속을 대표하는아스페르길루스자연에 널리 퍼져 있으며 유기물의 광물화에 중요한 역할을 합니다. 그들은 많은 음식에서 곰팡이를 일으킵니다. 이 버섯은 많은 귀중한 물질의 생산자이며 산업에서 널리 사용됩니다. 그래서,아스페르길루스니제르구연산 생산을 위해 산업에서 사용됨;아스페르길루스테레우스- 이타콘산아스페르길루스플라부스과아스페르길루스테리콜라단백질 분해 효소의 가장 활동적인 복합체를 형성합니다.아스페르길루스오리재과아스페르길루스아와모리유분분해효소의 최고의 생산자입니다.
속 버섯알터나리아 불완전한 균류 - 중생균류에 속합니다. 이들은 가장 높은 버섯입니다. 그들은 패혈성 균사체와 짧은 무균형 분생포자를 가지고 있으며, 그 위에 다세포 배 모양 또는 레몬 모양의 분생포자가 있다(그림 5). 곰팡이는 검은 부패의 원인 물질입니다. 뿌리와 과일의 질병뿐만 아니라 음식 부패의 원인 물질입니다.
효모 형태 및 특성
누룩 가장 높은 단세포 곰팡이입니다. 대부분의 효모는 자낭균류와 중수균류의 두 가지 부류에 속합니다.
산소와 관련하여 효모는 통성 혐기성 미생물(호기성 조건에서는 호흡하고 활발하게 바이오매스를 축적하고 혐기성 조건에서는 알코올 발효를 일으킴)과 호기성 미생물로 구분됩니다.
효모는 형태학적으로 다양합니다. 그들은 세포의 크기와 모양이 서로 다릅니다. 효모 세포의 크기는 종에 따라 다음과 같은 한계 내에서 다양합니다. 직경 2.5~10μm, 길이 4~20μm. 효모 형태의 형태학적 다양성은 그림 1에 나와 있습니다. 6.
그러나
비
에
아르 자형
디
이자형
에프
에스
무화과. 6효모 세포의 형태: a - 타원형 난형;
b - 원통형; c - 침상; 레몬 모양; g - 화살표 모양;
d - 삼각형; 전자 낫; g - 플라스크 모양; h, i - 균사체
효모 세포의 모양과 크기는 종류, 나이, 영양 배지 및 배양 방법에 따라 다릅니다.
효모의 종류에 따라 출아(타원형 효모가 증식하는 방식), 이분법(통상 또는 막대형 효모의 경우 일반적) 또는 출아 분열에 의해 영양생식할 수 있습니다. 영양 번식 외에도 효모 - 자낭균은 자낭 포자의 형성으로 성적으로 번식 할 수 있습니다.
자낭균류에 속하는 효모에서, 큰 중요성속 사카로마이세스 효모가 있다사카로마이세스 어느 식품 산업에서 널리 사용됩니다. 이 효모의 주요 생화학적 특징은 당을 발효시켜 에틸 알코올과 이산화탄소를 생성한다는 것입니다. 산업에서 사용되는 효모는문화 효모. 따라서 빵집과 알코올 생산에서 속의 효모를 타고사카로마이세스세레비지애... 효모 종사카로마이세스미성년자호밀 빵과 크 바스 생산에 응용 프로그램을 찾았습니다. 양조는 풀을 먹인 효모를 사용합니다사카로마이세스칼스베르겐시스... Saccharomycetes 효모는 타원형이며, 발아에 의해 영양적으로 번식하며, 불리한 조건에서 자낭포자와 함께 유성 번식합니다.
일부 포자 생성 효모는야생 누룩 ... 이러한 효모는 배양 효모와 마찬가지로 알코올 발효가 가능하지만 알코올 외에도 많은 부산물(예: 알데히드, 고급 알코올, 에테르 등)을 형성하므로 제품의 관능적 특성을 손상시킵니다. 이 효모는 다양한 음료(맥주, 와인, 청량 음료) 생산 시 해충이며 많은 식품에서 부패의 원인이 됩니다.
효모 - 중수균은 영양적으로만 번식할 수 있습니다. 이러한 효모 중 일부(예: 속 효모칸디다)은 사료 단백질, 유기산, 비타민 및 기타 미생물 합성 제품을 얻기 위해 산업에서 사용됩니다. 효모 종토룰롭시스케피어공생 스타터 문화인 케피어 균류의 일부입니다. 다른 불완전한(아포생성) 효모는 야생 효모이며 많은 음식을 망칩니다. 생산의 효모 해충은 속 효모를 포함합니다피치아, 한세눌라, 칸디다, 로도토룰라,토룰라, 토룰롭시스, 마이코더마, 트리코스포론및 기타.아스포로제닉 효모 중에는거짓 효모 , 유사균사체를 형성하고 액체 기질에서 필름 형태로 성장한다.
작업 수행 순서
튜브 또는 피펫으로 슬라이드에 큰 방울의 물을 적용합니다.
무균 규칙을 준수하면서 시험관이나 페트리 접시에서 소량의 균사체를 채취합니다.
균사체를 유리 슬라이드에 떨어뜨리는 한 방울에 조심스럽게 넣고 두 개의 바늘을 사용하여 물에서 곧게 펴십시오.
커버 글라스로 프렙을 덮고 살짝 누릅니다. 과도한 물은 여과지로 제거됩니다.
"파쇄된 드롭" 준비의 현미경 검사, 먼저 x8 대물렌즈를 사용한 다음 어두운 시야에서 x40(응축기를 낮추고 홍채 조리개 셔터를 덮음).
버섯 준비를 선택하고 현미경으로 관찰할 때 다음 권장 사항이 고려됩니다.
a) 속 버섯 무코르 . 흑갈색의 솜털 기중 균사체가 선택된다. 현미경 검사 중에 포자낭이 방출될 때 형성되는 포자낭으로 채워진 포자와 기둥이 있는 균사에 주의를 기울입니다.
b) 속 버섯 아스페르길루스 ... 유색 분생포자를 가진 약간 푹신한 균사체가 선택되고 바늘로 영양 배지에 약간 깊어집니다. 무균 분생포자에 주의하십시오.
c) 속 버섯 페니실리움 ... 선택할 때 그들은 어린 균사체 (유색 및 흰색 균사체의 경계에 있음)를 가져 와서 바늘로 배지로 깊어집니다. 술이 있는 격벽 균사에 주의하십시오.
d) 속 버섯 알터나리아 ... 바늘로 깊숙이 들어가는 검은 부분의 균사체를 가져 가라. "레몬 석류"를 연상시키는 원형 또는 뾰족한 다세포 형성처럼 보이는 부패성 균사체, 잘 발달되지 않은 분생포자 및 큰 분생포자에 주의하십시오.
효모를 검사할 때 효모 현탁액을 유리 슬라이드에 바르고 덮개 유리로 덮고 과도한 물을 여과지로 제거합니다. x8 및 x40 대물렌즈를 사용한 프렙의 현미경 검사.
연구결과 등록 및 분석
이론적 자료를 간략하게 설명합니다. 각 미생물의 형태학적 특성을 고려하여 조사된 진균 및 효모 배양물의 현미경 사진을 스케치합니다. 각 사진 아래에는 라틴어 이름과 준비 증가가 서명되어 있습니다. 연구된 버섯의 문화재를 설명하십시오.
보안 질문에 답변
미세한 곰팡이 및 효모의 준비는 어떻게 준비됩니까?
미세한 균류의 형태학적, 문화적 특성을 설명할 수 있다.
산업에서 유기산, 효소, 항생제 및 기타 가치 있는 제품을 얻기 위해 어떤 버섯을 사용합니까?
효모의 형태학적 특성을 설명할 수 있다.
배양 효모란? 식품 산업의 어떤 분야에서 사용됩니까?
과제 완료 조건
생물학 수업
2. 작업을 완료하는 데 걸리는 최대 시간: 90분
실용 작업 3 번 : 박테리아, 효모, 곰팡이 세포 구조의 계획.
작업 목적: 세포의 구조를 조사박테리아, 효모, 곰팡이
재료 지원: 실습용 지도, 교과서, 연필
연습 1
교과서의 자료를 공부할 것입니다. 연구 결과에 따르면:
공책에 박테리아, 효모 및 곰팡이의 세포 구조를 스케치하고 구별되는 특징을 나타냅니다.
서면으로 질문에 답하십시오.
1. 박테리아 세포의 모양은 무엇입니까?
2. 박테리아의 크기는 얼마입니까?
3.박테리아는 어떻게 번식하는가, 번식률은?
4. 박테리아 포자는 어떻게 그리고 어떤 조건에서 형성됩니까?
5. 박테리아가 자발적으로 움직일 수 있습니까?
작업 결과에 대한 결론을 도출하십시오.
과제 완료 조건
1. 작업의 장소(시간)
생물학 수업
2. 작업을 완료하는 데 걸리는 최대 시간: 90분
주제 4에 대한 실제 작업 규범 및 기술 문서 작업: SanPiN 2.3.6. 1079-01
작업 목적: 공공 급식 시설의 구조 및 유지 관리에 대한 위생 요구 사항을 연구합니다.
재료 지원: 실습을 위한 지도, 산핀 2.3.6. 1079-01
연습 1
교과서의 자료를 공부할 것입니다. 산핀 2.3.6. 1079-01. 연구 결과에 따르면:
1. 문구 추가: 케이터링 시설이 건설되는 사이트는 다음과 같아야 합니다.
생산 시설에는 다음이 포함됩니다.
창고는 건물의 ____________________ 부분에 설계되었습니다.
식수는 다음과 같은 품질이어야 합니다.
환기는 공기를 정화하는 데 사용됩니다
처럼.
모든 생산 영역을 조명해야 합니다.
빛.
구내의 월간 청소를 호출합니다.
2. 다음 개념을 정의합니다.
소독은 -
과소평가는 -
소독은 -
3. 사용 교육 자료, 표 채우기:
야채 작업장정육점
생선 가게
핫 샵
콜드 샵
제과점
핸드 아웃
과제 완료 조건
1. 작업의 장소(시간)
생물학 수업
2. 작업을 완료하는 데 걸리는 최대 시간: 90분
실제 작업 번호 5 규범 및 기술 문서 작업: SanPiN 2.3.6. 1079-01
일의 목적 : 장비, 재고, 접시, 용기에 대한 위생 요구 사항을 연구합니다. 식품의 운송 및 저장.
물질적 보안 : 실용 지도, SanPiN 2.3.6. 1079-01
연습 1
교과서 SanPiN 2.3.6의 자료를 공부할 것입니다. 1079-01. 연구 결과에 따르면:
1. 서면으로 질문에 답하십시오.
조리기구에 적용되는 사항은 무엇입니까?
요리에 라벨이 붙은 이유는 무엇입니까?
식기란?
장비 및 재고 생산에 허용되는 재료
요식업소용?
식기와 수저를 씻을 때 근본적인 차이점은 무엇입니까?
2. 규칙 및 요구 사항을 나열합니다.
2.1. 반제품 운송에 대한 위생 규칙:
2.2. 식품 보관에 대한 위생 규칙:
3. 문구 추가:
서빙하기 전에 완성된 식사의 품질은 다음과 같아야 합니다.
서빙 할 때 첫 번째 코스와 뜨거운 음료는 온도에 있어야합니다.
_______ ° С, 두 번째 코스 및 반찬 온도 ______ ° С, 분할 요리
온도 ______ ° С, 차가운 음식 및 음료 ______ ° С.
겨울 - 봄 기간의 치료 및 예방 및 아동 기관에서 부족으로 인해 야채 요리이것으로 일부 요리를 풍성하게 하려면 _________이(가) 필요합니다.
완성된 제품의 품질과 공공 케이터링 시설에서의 출시 규칙 준수를 위해 ________________
과제 완료 조건
1. 작업의 장소(시간)
생물학 수업
2. 작업을 완료하는 데 걸리는 최대 시간: 90분
실용 작업 6 번 소독 용액 준비 및 보관 계획
목적: 목적에 따라 소독제의 이름, 소독제 용액의 제조 방법을 연구하십시오. 지정된 농도의 용액을 준비하십시오.
물질적 보안 : 실용 지도, SanPiN 2.3.6. 1079-01, 교과서
연습 1
자료를 공부할 것입니다 교육 문학, 산핀 2.3.6. 1079-01. 연구 결과에 따르면:
1. 다음 질문에 답하십시오.
소독제는 어떤 솔루션입니까?
소독액은 어떤 목적으로 사용됩니까?
소독제로 사용되는 약물은 무엇입니까?
접시가 소독제로 처리되었음을 어떻게 인식합니까?
2. 소독제의 준비 계획과 목적을 연구합니다. 표를 채우십시오.
3. 0.2% 클로라민 B 용액 1리터를 준비합니다.4. 작업 결과를 바탕으로 결론을 내립니다.
과제 완료 조건
1. 작업의 장소(시간)
생물학 수업
2. 작업을 완료하는 데 걸리는 최대 시간: 90분
실제 작업의 수행을 평가하는 기준:
표시 "5"는 다음과 같은 경우 제공됩니다.
:
1. 이러한 작업의 목적을 올바르게 독립적으로 결정합니다. 필요한 수행 순서에 따라 작업을 완전히 수행합니다.
2. 작업 수행에 필요한 장비를 독립적으로 합리적으로 선택하고 준비합니다. 가장 정확한 결과를 제공하는 조건에서 이러한 작업을 수행합니다.
3. 작업 과정을 유능하고 논리적으로 설명하고 결론을 올바르게 공식화합니다. 모든 기록, 표, 그림, 도면, 그래프, 계산을 정확하고 정확하게 수행합니다.
4. 조직 및 노동 기술을 보여줍니다. 작업장의 청결을 유지하고 테이블에 질서를 유지하며 경제적으로 자재를 소비합니다. 작업을 수행할 때 안전 규정을 준수합니다.
다음과 같은 경우 점수 "4"가 부여됩니다.
:
1. 결과를 "5"로 평가할 때 요구 사항에 따라 실험실 작업을 완전히 수행하지만 계산 및 측정에서 2~3개의 단점이 있거나 하나의 총 오차와 하나의 단점이 있습니다.
2. 저작물을 등록할 때 그 행동과정을 잘못 기재한 경우 일반화할 때 불완전한 결론을 내립니다.
표시 "3"은 다음과 같은 경우 제공됩니다.
:
1.1 작업을 50% 이상 올바르게 수행하지만 완성된 부품의 양은 올바른 결과를 얻고 작업의 기본적이고 기본적인 중요한 작업에 대한 결론을 도출할 수 있는 정도입니다.
2. 장비, 재료를 선택하고 교사의 도움으로 작업을 시작합니다. 또는 측정, 계산, 관찰 과정에서 실수를 하고 결론, 일반화를 부정확하게 공식화합니다.
3. 비합리적인 조건에서 작업을 수행하여 큰 오류가 있는 결과를 얻습니다. 또는 보고서에서 이 작업에 근본적으로 중요하지 않지만 결과에 영향을 미치는 총 2개 이하의 오류(숫자, 측정 결과, 계산, 그래프, 표, 도표 작성 등)를 만듭니다. 실행.
4. 작업 과정에서 심각한 실수를 범합니다. 설명, 설계, 안전 규칙 준수에서 학생이 교사의 요청에 따라 수정합니다.
경우 "2"의 점수가 부여됩니다.
:
1. 작업의 목적을 스스로 결정하지 못하고, 교사의 도움 없이 적절한 장비를 준비할 수 없다. 작업을 완료하지 못하고 완성된 부분의 양으로 인해 올바른 결론을 도출할 수 없습니다.
2. 작업 과정에서 교사의 요청에 따라 수정할 수 없는 두 가지 이상의 중대한 실수를 한 경우 또는 측정, 계산, 관찰을 잘못 수행합니다.
부착.
첨부 1
학생에게 알림
작업을 수행할 때 학생은 다음을 수행해야 합니다.
사전에 이론적 자료를 자세히 숙지하고 실제로 연구해야 할 미생물학적 법칙과 과정을 잘 이해합니다.
실험을 수행하는 동안 모든 예방 조치, 작업 순서를 준수하고 필요한 관찰을 합니다.
작업에서 제안한 계획에 따라 노트북에 실험 결과를 기록하십시오.
작업이 끝나면 순서대로 직장그리고 그것을 실험실 조교나 교사에게 넘기십시오.
머리말
에 이 튜토리얼은 학생들을 위한 미생물학의 실험실 작업을 제공합니다. 교육 대학특산품으로 1-02 04 01 추가 전문 분야가 있는 생물학 및 1-02 04 05-01 지리학. 생물학.
실험실 워크샵의 목적은 미생물학 강의 과정의 이론적 조항을 심화하고 미생물 실험 기술을 습득하는 것입니다. 매뉴얼에는 "원핵 생물의 형태학 및 구조적 및 기능적 조직", "원핵 생물의 생리학 및 신진 대사", "원핵 생물의 성장 및 재배", "원핵 생물의 체계 및 분류", "원핵 생물의 생태"라는 코스 섹션의 실험실 작업이 포함됩니다. . 각 작업이 끝나면 이론 및 실험 자료를 통합하기 위한 질문이 제공됩니다. 주어진 작업은 4 시간 동안 계산됩니다.
에 제안된 각 작품은 재료 목록입니다.
과 장비, 간단한 이론적 설명, 작업 과정에 대한 설명, 결과 발표를 위한 권장 사항. 실험실 작업에는 학생이 실험실 작업의 내용을 더 잘 이해할 수 있도록 하는 참조 자료가 포함되어 있습니다.
작업은 여단(2명)에서 수행됩니다. 작업의 실행은 이론적 조항 및 작업 과정, 연구의 목표 및 목적 공식화에 선행됩니다. 매뉴얼을 사용하여 학생들은 수업의 교육 카드에 따라 실험 결과를 작성합니다. 작업은 얻은 결과의 입증과 함께 결론의 독립적인 공식화를 제공합니다. 메모의 분석과 학습된 자료의 동화는 각 수업에서 교사에 의해 통제됩니다.
실험실 작업의 내용 및 등록에 대한 요구 사항
1. 실험실 작업은 각 학생이 개별적으로 노트북에 작성합니다. 실험실 노트북은 첫 번째 실험실 작업이 시작되기 전에 학생이 서명합니다.
2. 각 실험실 작업에는 다음과 같은 구조적 요소가 포함되어야 합니다.
1. 실험실 작업의 이름입니다.
2. 공과의 목적.
3. 필요한 재료 및 장비 목록입니다.
4. 결과 및 토론: a) 작업 제목.
b) 실험실 작업 중에 학생이 개인적으로 받은 수업의 커리큘럼 섹션에 표시된 실험 자료.
5. 결론.
이러한 요구 사항에 따라 작성된 실험실 작업은 교사의 서명을 위해 각 수업이 끝날 때 제공됩니다.
미생물 실험실에서의 안전
1. 교육용 미생물 연구실에서는 안전 지침을 받은 후 작업할 수 있습니다.
2. 겉옷을 입고 미생물 연구실에 들어가는 것은 금지되어 있습니다.
3. 학생들은 의료 가운만 착용하고 수업에 입장할 수 있습니다.
4. 미생물 연구실에 음식물을 반입하는 것은 금지되어 있으며, 식수, 관련 없는 것. 연구실에서 금연
그리고 음식을 먹습니다.
5. 각 학생에게는 영구적인 직장이 할당됩니다(직장 번호는 학생이 다음 날짜에 기록합니다. 제목 페이지실험실 노트북).
6. 특정 실험실 작업을 수행하는 데 필요한 장비와 재료만 작업장에 배치됩니다.
7. 교사의 허락이 있는 경우에만 수업을 시작하고 실험실 주변을 이동합니다.
8. 미생물로 작업할 때 감염 가능성을 배제한 기술을 준수하고 주의하십시오.
9. 미생물 배양액을 손으로 만지는 것은 금지되어 있습니다.
10. 미생물이 실수로 테이블에 떨어지면 소독액을 적신 면봉으로 즉시 제거해야합니다. 액체 배양 작업을 할 때는 미생물 수집을 위한 특별한 수단을 사용하십시오.
10. 하나의 영혼 램프를 다른 것으로 켜지 마십시오. 사용 사이에 영혼 램프의 심지를 막습니다.
11. 전기 제품을 취급할 때 안전 조치를 준수하십시오. 작업하기 전에 전기 장비의 상태를 확인하십시오. 교사의 허가 없이 전기 제품을 네트워크에 연결하지 마십시오.
12. 작업이 끝나면 작업장을 정리하십시오. 손을 철저히 씻고 면봉에 소독액을 묻혀 치료합니다. 드레싱 가운을 비닐 봉지에 접습니다.
13. 안전 규칙 준수는 수업이 끝날 때 작업장 순서를 확인하는 근무 중인 학생이 모니터링합니다.
연구실 작업 No. 1 연구 방법 PROKARIOT. 형태
프로카리오트
수업의 목적. 미생물 실험실에서 작업장의 장비에 대해 알기 위해 미생물 작업시 안전 예방 조치. 기본적인 미생물 제제의 준비 방법을 마스터하십시오. 구강의 미생물과 미생물의 순수 배양의 예를 사용하여 박테리아의 형태학적 형태를 연구합니다.
재료 및 장비:미생물 배양 작업에 대한 안전 지침; 안전 저널; 경사 한천이 있는 튜브에서 페트리 접시에 미생물 접종; 성냥, 유리에 연필; 바셀린; 침지 오일; 현미경; 루프 홀더가 있는 미생물 루프; 정신 램프; 슬라이드; 표지 전표; Drygalsky의 주걱; 피펫 파스퇴르; 유리 눈금이 있는 피펫; 얼룩을 염색하고 세척하는 장치; 필터 종이 스트립.
1. 미생물 작업 시 작업장 장비 및 안전 예방 조치를 숙지하십시오.
2. 미생물 연구 방법을 연구합니다.
3. 미생물 제제를 준비하는 방법을 마스터하십시오.
4. 미생물의 형태학적 형태를 연구합니다.
5. 구강의 미생물 연구에서 얻은 지식을 통합합니다.
작업 1. 미생물 실험실에서 미생물 및 작업장 장비로 작업할 때 안전 예방 조치를 숙지합니다.
미생물 실험실에서 작업하려면 안전 예방 조치를 엄격하게 준수해야 합니다.
벨로루시 공화국과 러시아에서는 인체에 대한 위험도와 환경할당 전염병의 병원체 4 그룹,더 낮은 그룹 번호는 실험실 테스트에서 증가된 위험을 의미합니다.
그룹 I - 특히 위험한 감염의 원인 물질: 전염병, 천연두, 출혈열(라사, 에볼라 등).
그룹 II - 전염성이 강한 세균, 곰팡이 및 바이러스 감염의 원인 물질: 탄저병, 브루셀라증, 야토병, 콜레라, 발진티푸스, 분구균증, 광견병, AIDS, B형 및 C형 간염 등, 보툴리눔 독소 및 파상풍 독소.
그룹 III - 다른 감염의 원인 물질: 백일해, 파상풍, 보툴리누스 중독, 결핵, 트리코모나스 증, 말라리아, 리슈만편모충증, 인플루엔자, 소아마비, 헤르페스 바이러스 등
그룹 IV - 기회 감염 병원체(가스 괴저, Klebsiella, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas aeruginosa, 일부 Candida 및 Aspergillus, adenoviruses, rotaviruses, enteroviruses 등) 및 비병원성 미생물.
실험실 수업에서 학생들은 비병원성 미생물로 작업합니다. 그러나 부생 미생물이 환경에서 접종될 때 병원성 미생물총이 우발적으로 도입될 수 있음을 기억해야 합니다.
작업을 위한 미생물 실험실 준비. 대기 및 다양한 표면의 미생물 수를 줄이기 위해 실험실에서 다양한 방법이 사용됩니다.소독.
실험실의 공기는 환기로 가장 쉽게 소독됩니다. 창문을 통한 장기간의 환기(최소 30-60분)는 특히 외부 공기와 실내 공기 사이의 온도 차이가 큰 경우 공기 중의 미생물 수를 급격히 감소시킵니다. 보다 효과적이고 가장 많이 사용되는 공기 소독 방법은 파장 200~400nm의 자외선을 조사하는 것입니다.
미생물을 배양하여 직접 작업하는 작업장은 특히 세심한 처리가 필요합니다. 작업 시작 전뿐만 아니라 작업이 끝난 후에도 데스크탑을 소독해야 합니다. 테이블 표면을 닦기 위해 라이솔 및 클로라민 용액과 이소프로필 또는 에틸 알코올의 70%(부피 기준) 용액을 사용할 수 있습니다.
다음 장비는 교육용 미생물 실험실에서 작업하는 데 사용됩니다.
1. 현미경. 생물학적 현미경(그림 1)은 물체를 40-1500배 확대하는 광학 장치입니다. 기계, 광학 및 조명 시스템으로 구성됩니다. 현미경의 기계 시스템은 말굽 모양의 다리, 튜브 홀더, 튜브, 스테이지 및 나사를 포함합니다. 광학 시스템은 대물렌즈와 접안렌즈를 포함합니다. 조명 시스템은 다이어프램과 거울이 있는 콘덴서로 구성됩니다.
현미경. 접안 렌즈는 튜브의 상부에 삽입되고 축을 중심으로 회전하는 리볼버는 대물렌즈가 나사로 고정되어 하부에 삽입됩니다. 튜브는 매크로메트릭 및 마이크로메트릭 나사를 사용하여 위아래로 움직입니다. 마이크로미터 나사를 한 바퀴 돌리면 튜브가 0.1mm 움직입니다. 따라서 미세 나사는보다 정확한 조준을 위해 사용되며 예비 조준에는 매크로 나사가 사용됩니다. 주제 테이블은 테스트 자료를 수용하도록 설계되었습니다.
그림 1 - 현미경
1 - 매크로스크류, 2 - 튜브 홀더, 3 - 관절 조인트, 4
- 주제 테이블; 다섯- 튜브 6 - 접안 렌즈 7 - 리볼버, 8 - 렌즈, 9 - 콘덴서, 10 - 거울, 11 - 마이크로 나사, 12 -
말굽 모양의 베이스 콘덴서는 거울에서 반사된 것을 모으는 렌즈로 구성되어 있습니다.
광선을 광선에 비추고 스테이지의 개구부를 통해 표본으로 향하게 합니다. 오염되지 않은 제제의 이동성을 결정할 때 콘덴서를 약간 낮춰야 합니다.
다이어프램은 미러와 콘덴서 사이에 위치하며 콘덴서로 들어오는 빛의 양을 조절하는 역할을 합니다.
렌즈는 금속 프레임으로 둘러싸인 렌즈 시스템으로 구성됩니다. 전면 렌즈는 피사체를 확대하는 데 사용되며 나머지는 이미지를 수정하는 데 사용됩니다. 현대의 생물학적 현미경은 적어도 세 가지 목적을 가지고 있습니다. 건식 렌즈는 8배와 40배(렌즈와 프렙 사이에 공기층이 있음), 침지 렌즈는 90배 확대됩니다. 각 렌즈에는 배율을 나타내는 숫자가 배럴에 있습니다.
접안렌즈는 상부 눈 렌즈와 하부 집광 렌즈로 구성됩니다. 접안렌즈 상단에 배율을 나타내는 숫자(7, 10, 15)가 있습니다. 접안렌즈는 이미지만 확대합니다. 현미경의 전체 배율은 대물렌즈 배율에 접안렌즈 배율을 곱한 값입니다.
준비 현미경 검사를 위해 작업 테이블을 창가에 두거나 광원을 장비하는 것이 좋습니다. 현미경은 가장자리에서 약 7-10cm 떨어진 튜브 홀더가 있는 작업대 위에 놓습니다. 먼저, 조명이 조정되는데, 미러를 사용하여 8배 배율로 조명원에서 렌즈로 광선이 향하게 합니다. 올바른 조명 설정으로 현미경의 시야는 균일하게 조명된 원의 형태여야 합니다. 그 후 시험편을 스테이지 위에 올려 놓고 클램프로 고정하고 8배, 40배 또는 90배 배율의 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 검사합니다.
대물렌즈 8과 40으로 작업할 때 현미경 튜브는 매크로메트릭 나사를 사용하여 조심스럽게 낮추고 대물렌즈는 시편에 더 가까이 가져갔지만 만지지는 않습니다. 이미지가 얻어질 때까지 같은 나사로 튜브를 약간 들어올리면서 접안렌즈를 통해 관찰합니다. 마이크로미터 나사의 도움으로 물체의 선명한 이미지가 얻어질 때까지 대물렌즈가 정확하게 설정됩니다.
이름:구강의 미생물학, 바이러스학 및 면역학
차레프 V.N.
출판 연도: 2013
크기: 81.64MB
체재: djvu
언어:러시아인
기술: V. Tsarev가 편집한 실제 가이드 "구강의 미생물학, 바이러스학 및 면역학"은 인간 구강의 미생물학 및 미생물총의 일반적인 문제를 고려합니다. 현재 ... 무료로 책 다운로드
이름:의료 미생물학, 바이러스학 및 면역학. 2판
보로비예프 A.A.
출판 연도: 2012
크기: 32.73MB
체재: PDF
언어:러시아인
기술: A. Vorobyov 등의 편집 하에 있는 실용적인 가이드 "Medical Microbiology, Virology and Immunology"는 면역학 및 바이러스학뿐만 아니라 일반 미생물학의 기본 섹션을 고려합니다. Osv ... 무료로 책 다운로드
이름:미생물학, 바이러스학 및 면역학의 기초
Prozorkina N.V., Rubashkina L.A.
출판 연도: 2012
크기: 5.72MB
체재: PDF
언어:러시아인
기술:교육 매뉴얼 "Fundamentals of Microbiology, Virology and Immunology", ed., N. V. Prozorkina, et al., 일반 미생물학, 바이러스학 및 면역학의 기본 자료를 고려합니다. 역사 개요 ... 무료로 책 다운로드
이름:미생물학에 대한 실용 가이드
에고로프 N.S.
출판 연도: 1995
크기: 2.04MB
체재: djvu
언어:러시아인
기술: Egorov NS는 "미생물학의 실제 교육 가이드"라는 책에서 바이러스학 및 미생물학 분야의 현대적인 실험실 진단 방법을 강조하고 정체성을 고려했습니다 ... 무료로 책 다운로드
이름:바이러스학의 기초가 있는 미생물학
Koleshko O.I., Zavezenova T.V.
출판 연도: 1999
크기: 8.71MB
체재: djvu
언어:러시아인
기술:튜토리얼 "Microbiology with basics of virology", ed., Koleshko OI, et al., 일반 미생물학은 박테리아의 형태 생리학, 박테리아의 유전학, 미생물총을 고려하여 고려됩니다... 무료로 책 다운로드
이름:의료 미생물학 및 면역학
보로비예프 A.A.
출판 연도: 1999
크기: 14.3MB
체재: djvu
언어:러시아인
기술: A. Vorobyov가 편집 한 "의료 미생물학 및 면역학"교과서는 일반 미생물학 및 면역학의 주요 섹션을 검사합니다. 마이크로 소프트웨어 개발의 역사적 이정표가 제시되어 있습니다. 책을 무료로 다운로드하십시오.
이름:의료 미생물학, 바이러스학 및 면역학
보로비예프 A.A.
출판 연도: 2004
크기: 12.81MB
체재: djvu
언어:러시아인
기술: A. A. Vorobyov의 편집 하에 있는 "Medical Microbiology, Virology and Immunology" 교과서는 바이러스학 및 면역학뿐만 아니라 일반 미생물학의 주요 섹션을 검사합니다. 제시된 것은 ... 무료로 책을 다운로드하십시오
이름:세균 감염의 미생물학적 진단
Zhdanivskyi M.V., Shchukin I.M., Slyusarev O.A., Nikolenko Yu.I.
출판 연도: 2007
크기: 6.72MB
체재: djvu
언어:우크라이나 인
기술: M. Zhdanivsky, et al.의 편집 하에 있는 "박테리아 감염의 미생물학적 진단" 교과서, 박테리아 감염 그룹의 미생물학적 진단을 조사합니다. 기술이 설명되어 있습니다 ...
연방 교육 기관
카라차요프-체르케스 주립 기술 아카데미
축산물생산기술학과
미생물학
명령
학생들을 위한 실험실 및 실습 수업
농업 연구소
체르케스크 - 2010
대략적인 기준으로 작성하고 작업 프로그램전문 110305 "농산물 생산 및 가공 기술" 및 110201 "농업"(2000)에서 고등 전문 교육의 국가 교육 표준에 따른 "미생물학" 과정.
TPPZ 부서 회의에서 논의됨(2009년 7월 2일 회의록)
Agrarian Institute의 방법론 위원회에서 승인함(2001년 1월 1일 회의록 6). Karachay-Cherkess State Technological Academy의 교육 및 방법론 위원회의 결정에 의해 발행됨(2001년 1월 1일 회의록)
작성자:생물학 후보, 부교수 , 농업 과학 후보, 부교수 , 조수
검토자: – 생물학 후보
농학과 부교수
"TPPZH"학과 부교수
편집자: 박사 과학, 부교수
함유량
서론 ........................................................................................................................... 6
1. 현미경 ....................................................................................................................................... 7
1.1 라이트 필드 현미경 ........................................................................................... .7
1.1.1. 현미경 장치 ........................................................................................... 7
2. 미생물 작업 ........................................................................................... 여덟
2.1 제제 준비 방법 .................................................................................................................................. 8
2.1.1 준비를 위한 배양 기술 ........................................................... 8
2.1.2. 방법에 의한 미생물의 살아있는 세포 연구
압력 강하 ........................................................................................................... 8
2.1.3. 미생물의 고정 제제 ........................................... 9
조명 시스템은 무대 아래에 있습니다. 거울은 입사광을 콘덴서로 반사합니다. 거울의 한쪽은 평평하고 다른 쪽은 오목합니다. 콘덴서로 작업할 때는 평면 거울을 사용해야 합니다. 오목 거울은 저배율 렌즈로 집광 없이 작업할 때 사용됩니다. 집광기는 2-3개의 단초점 렌즈로 구성되어 있으며 거울에서 나오는 광선을 모아 물체로 향하게 합니다. 침수 시스템으로 작업할 때는 콘덴서가 필요합니다. 콘덴서에는 강철 초승달 모양의 판으로 만들어진 조리개(꽃잎) 다이어프램이 있습니다.
유색 제제는 거의 완전히 열린 다이어프램, 얼룩이없는 다이어프램 - 다이어프램의 조리개가 감소한 것으로 간주됩니다.
렌즈- 물체의 이미지가 좌우하는 품질에 따른 다중 렌즈 시스템. 외부 렌즈는 전면 렌즈라고 하며 배율을 제공합니다. 나머지 렌즈는 광학적 결함을 수정하는 기능을 수행합니다.
렌즈가 건조하고 물에 잠겨 있습니다(침지). 건식 대물렌즈로 작업할 때 대물렌즈의 전면 렌즈와 연구 대상 사이에 공기가 있습니다. 침지 대물렌즈 V = 90x로 작업할 때 커버 유리와 대물 렌즈 사이에 삼나무 기름이 있으며 굴절률은 유리의 굴절률 1.515 및 1.52에 각각 가깝습니다. 렌즈에는 8x, 40x 및 90x 배율이 있습니다.
접안 렌즈인간 눈의 "렌즈"(렌즈)의 직접적인 연속 역할을합니다.
접안 렌즈는 금속 프레임으로 둘러싸인 위쪽 렌즈와 아래쪽 렌즈의 두 개의 렌즈로 구성됩니다. 접안렌즈의 목적은 렌즈가 주는 상을 확대하는 것입니다. 접안렌즈 배율이 프레임에 새겨져 있습니다. 접안렌즈의 작동 배율 범위는 4x에서 15x입니다.
접안렌즈는 다른 유형, 선택은 렌즈에 따라 다릅니다. 장기간 현미경으로 작업할 때 쌍안 부착물을 사용하는데, 이는 물체의 시인성을 향상시키고 이미지의 밝기를 감소시켜 시력을 보존하기 때문입니다.
미생물 작업2.1. 준비 방법
2.1.1. 준비를 위한 배양 기술
화염에 구운 세균 바늘로 시험관에서 소량의 미생물 덩어리를 채취합니다. 문화가 액체라면 루프를 사용하는 것이 좋습니다. 다른 경우에는 바늘입니다.
2.1.2. 파쇄 적하법에 의한 미생물의 살아있는 세포 연구
미생물의 살아있는 세포를 분쇄 드롭 방식으로 검사하고 대상을 생체 염료로 사전 염색합니다. 중요한 착색(염료: 0.001 ~ 0.0001% 농도의 메틸렌 블루, 중성 레드).
준비물을 현미경으로 관찰하여 시야를 약간 어둡게합니다. 콘덴서가 약간 낮아지고 빛의 흐름이 오목 거울에 의해 조절됩니다. 처음에는 낮은 배율인 8x 대물렌즈를 사용하고, 방울의 가장자리가 감지된 후 40x 또는 immersion(90x) 대물렌즈가 설치됩니다.
분쇄 드롭 방식의 경우 깨끗한 유리 슬라이드에 수돗물을 한 방울 떨어뜨립니다. 문화가 그것에 도입되고 물과 혼합됩니다. 과도한 물은 여과지로 제거됩니다. 침지 대물렌즈를 사용할 때 삼나무 기름 한 방울을 유리 슬라이드에 바르고 현미경으로 관찰합니다.
2.1.3. 미생물의 고정 제제
고정 된 준비는 살아있는 세포의 처리를 의미하므로 물체의 생명 과정을 신속하게 중단하여 미세한 구조를 보존 할 수 있습니다. 고정의 결과 세포가 유리에 단단히 부착되어 더 잘 염색됩니다. 병원성 미생물로 작업할 때는 고정이 필요합니다(안전상의 이유로).
얼룩의 준비.깨끗하고 무지방 슬라이드에 수돗물 한 방울을 떨어뜨립니다. 유리를 탈지하기 위해 에틸 알코올과 황산 에테르를 1:1 비율로 혼합하여 사용합니다. 하소된 세균 바늘을 사용하여 배양 튜브에서 소량의 미생물 덩어리를 채취하여 한 방울의 물에 첨가합니다. 방울은 약 4cm2의 영역에 걸쳐 유리의 루프로 조심스럽게 번집니다.
현탁액이 두꺼운 경우 먼저 물로 희석합니다. 이를 위해 소성 루프로 약간의 현탁액을 취하고 다른 유리 슬라이드의 물 한 방울로 옮깁니다. 정상 밀도의 현탁액을 유리 위에 얇은 층으로 도포한 다음, 도말을 실온 또는 낮은 열에서 공기 중에서 건조시켜 약물을 버너 화염보다 높게 유지합니다. 건조 중 제제의 강한 가열은 세포의 구조와 모양을 왜곡시키는 단백질의 응고를 피하기 위해 권장되지 않습니다. 건조 준비가 고정됩니다.
얼룩의 고정.실시된다 버너 불꽃 위에또는 케미컬을 사용하여노조.첫 번째 경우에는 버너 화염 위에 아래쪽을 놓고 3~4회 천천히 준비하고 두 번째 경우에는 포르말린, 오스믹산, 아세톤과 같은 크롬 화합물을 사용합니다. 일반적인 고정 기술 중 하나는 96% 알코올 또는 동일한 부피의 에틸 알코올과 에테르(Nikiforov의 액체)의 혼합물로 약물을 처리하는 것입니다. 이를 위해 제제를 10-30 분 동안 고정액에 담그십시오.
준비의 채색.몇 방울의 염료가 얼룩에 적용됩니다. 염색의 종류와 연구 목적에 따라 염색 시간은 1분에서 5분까지 다양하며 경우에 따라 30분까지 소요되기도 합니다. 염색이 끝나면 준비물을 물로 세척하고 여과지로 물을 제거하고 공기 중에서 건조시키고 현미경으로 관찰합니다.
간단하고 차별화된 페인팅 방법이 있습니다.
언제 평원착색(메틸렌 블루, 푹신, 젠티안 바이올렛)에 하나의 염료를 사용하면 전체 세포가 염색됩니다.
언제 차별화된염색, 개별 세포 구조는 다른 염료로 염색됩니다(그람 염색, 포자 염색).
미생물의 형태 연구3.1. 세포 모양
3.1.1. 박테리아
모양에서 모든 박테리아는 구형 (구균), 막대 모양 및 주름진으로 나뉩니다.
구형 박테리아 - 구균.
1. 미세 구균 -단일 구형 셀( 미세구균 민첩성).
2. 디플로코치 -구형 구균, 둘로 연결됨. ( 아조토박터 크로코컴).
3. 테트라코치- 4개로 연결된 구형 구균.
4.연쇄상 구균- 사슬로 연결된 구상세균(주로 병원균과 유산균 락토코커스 락티스).
5. 사르시나스- 8개의 세포로 구성된 구형 박테리아는 세 개의 서로 수직인 평면에서 세포 분열의 결과로 발생합니다. 일부 유형의 사르신은 각 면에 4개의 사르신이 있는 큰 입방체 모양의 패킷을 형성합니다. 대표 대표 사르시나 플라바(sarcinum yellow) - 공기 중 미생물총의 가장 흔한 대표자.
다음을 제외한 모든 구형 형태의 박테리아 연쇄상 구균 락티스, 고정 및 푹신 염색 준비에서 볼 수 있습니다.
막대 모양의 박테리아. 여기에는 논쟁을 형성하지 않는 형식이 포함됩니다(출산 슈도모나스, 아크로모박터, 유산균및 기타) 및 분쟁 형성 (출산 새균, 클로스트리디움등).
포자 형성 스틱 슈도모나스 슈투체리 – 그것의 세포질은 고르게 염색됩니다.
포자 형성 막대 바실러스 마이코이데스과 바실러스 메센테리쿠스.현미경으로 보면 색상이 고르지 않게 보입니다. 포자는 더 조밀한 구조로 염색되지 않습니다. 세포 새균 진균사슬로 배열된 이들은 연쇄상균입니다.
막대 모양의 박테리아는 고정 및 염색된 슬라이드에서 볼 수 있습니다.
매력적인 모양
1. 비브리오 – 약간 구부러진 세포.
2. Spirillae는 러시아 문자 C 형태의 컬 하나, 라틴 문자 S 형태의 컬 2개 또는 나선형 형태의 여러 컬을 가질 수 있습니다.
3. 스피로헤타(Spirochetes) - 컬이 많은 길고 얇은 세포; 세포의 길이는 두께를 5-200배 초과합니다.
Vibrios와 spirillae는 미리 온도 조절 장치에서 며칠 동안 배양된 슬러리에서 준비된 고정되고 착색된 제제에서 편리하게 볼 수 있습니다. 그러한 제제의 많은 미생물 중에서 복잡한 형태가 종종 발견됩니다.
치아 플라크의 고정 스테인드 준비에서 스피로헤타에 대해 알 수 있습니다. 덴탈 스피로헤타는 매우 가늘고 머리카락처럼 짧고 짧습니다(2-3개의 컬).
3.1.2. 방선균
방선균은 빛나는 균류입니다. 영양 배지에서 방선균의 균사체는 구별됩니다. 그 중 한 부분은 기질 (기질 균사체)에 잠겨 있고 다른 부분은 기질 (공중 균사체) 위에 있습니다.
방선균류의 많은 대표자는 색소를 생산하므로 기중 균사체와 특히 군체는 파란색, 파란색, 보라색, 분홍색, 갈색, 갈색 또는 검은색으로 착색됩니다. 방선균은 적절한 색상으로 배양 배지를 염색합니다.
방선균 콜로니 조각을 배지와 함께 유리 슬라이드에 적용합니다. 두 번째 유리 슬라이드로 이 조각을 유리에 단단히 누르고 부수고 유리에 바르십시오. 약물을 건조, 고정, 염색하고 균사체 단세포 필라멘트가 부분적으로 보이는 현미경으로 관찰합니다.
3.1.3. 누룩
효모 - 다양한 모양의 단세포 현미경 곰팡이 : 타원형, 배 모양, 원형, 원통형. 식물과 성적으로 번식합니다.
실험실 연구의 경우 빵 효모가 사용됩니다. 수업 몇 시간 전에 작은 효모 덩어리를 따뜻한 설탕 물에 넣고 따뜻한 곳에 둡니다. 희고 탁한 액체가 형성됩니다. 이 액체 한 방울을 유리 슬라이드에 바르고 커버 유리로 덮고 삼나무 오일 한 방울을 그 위에 바르고 준비를 침지 시스템으로 봅니다. 싹이 트고 분열하는 세포가 보입니다.
3.2. 화학 연구 방법
3.2.1. 미생물 세포의 그람 염색
미생물 세포의 이러한 분화 방법은 세포벽의 화학적 조성의 차이에 기초합니다. 일부 유형의 미생물 세포에서는 주요 염료와 함께 알코올 불용성 요오드 화합물이 형성되는 반면, 다른 종에서는 이 화합물이 일시적으로 나타나 알코올 처리 후 용해됩니다. 첫 번째 그룹의 미생물은 그람 양성 둘째 - 그람 음성.
그람 염색 기술.서로 다른 미생물 배양액의 세 가지 얇은 도말을 탈지 유리 슬라이드에 적용합니다(그 중 2개는 대조군이며 그람 염색과 관련이 있음). 도말을 공기 중에서 건조시키고 버너 화염에 고정한 다음 유리를 약간 기울어진 위치에 유지하면서 젠티안 바이올렛(또는 크리스탈 바이올렛)의 페놀 용액으로 1분 동안 염색합니다. 그런 다음 염료를 붓고 제제를 물로 헹구지 않고 Lugol 용액을 1분 동안 적용합니다(도말이 완전히 검게 될 때까지). 유리는 기울어진 위치에 고정됩니다. 물로 헹구지 않고 약물을 15-20 초 동안 96 % 알코올로 계속 흔들어서 처리합니다. 지정된 기간을 초과하면 그람 양성 세포도 변색되므로 변색 시간을 준수하는 것이 중요합니다.
물로 헹군 후 조제물을 Pfeifer's fuchsin으로 1분 동안 염색합니다. 그람 양성균은 짙은 자주색을 띠고, 그람음성균은 가색(fuchsin)으로 착색한다.
그람 염색의 결과는 배양 연령에 따라 다릅니다. 오래된 배양에서 죽은 세포는 항상 그람 음성으로 염색됩니다. 따라서 어린 원일 작물을 사용하는 것이 좋습니다.
누룩, 바실러스 메센테리쿠스또는 고초균(그람 양성) 및 대장균 (그람 음성).
그람 염색용 염료 및 시약.
1. 용담 보라색 페놀 용액:용담 바이올렛 - 1g, 알코올 96% - 10ml, 결정질 페놀 - 2g, 증류수 - 100ml.
경우에 따라 적용 용담 알코올 용액보라색:용담 바이올렛(또는 크리스탈 바이올렛) - 1g, 96% 알코올(정류) - 100ml, 글리세린 - 5ml. 혼합물을 24시간 동안 항온조에 넣은 다음 여과합니다.
2. 루골의 솔루션(요오드화 칼륨 - 2g, 결정질 요오드 - 1g, 증류수 - 300ml). 먼저 요오드화칼륨을 물 5ml에 농축한 용액을 만들어 요오드를 녹인 다음 물을 300ml에 가한다.
3. 알코올 96%.
4. 푹신 파이퍼(수용액 carbolic fuchsin Tsil): 1ml의 carbolic fuchsin Tsil과 9ml의 증류수. 푹신 1g, 결정성 페놀 5g, 96 % 알코올 - 10ml, 글리세린 몇 방울, 증류수 100ml, 푹신을 에탄올에 녹이고 물에 녹인 페놀을 첨가하여 제조합니다. 용액을 교반하고 며칠 동안 방치합니다. 사용하기 전에 필터링됩니다.
3.2.2. 박테리아의 포자 착색
영양 세포와 비교하여 박테리아 포자는 불리한 조건에 매우 강합니다. 외부 환경... 그들은 원형, 타원형 또는 타원형입니다. 포자의 직경이 포자가 형성되는 세포의 직경을 초과하지 않으면 세포를 세포라 한다. 세균, 초과하는 경우 중앙 또는 세포 끝에 있는 포자의 위치에 따라 이 세포는 그에 따라 호출됩니다 클로스트리디움 또는 플렉트리디얼 . 세균 세포에서 포자는 세포의 중앙에 위치할 수 있습니다. 본부위치, 끝에 - 단말기그리고 한쪽 끝에 더 가까이 - 서브터미널위치.
살아있는 포자를 형성하는 박테리아를 관찰할 때, 그들의 포자는 광선의 더 강한 굴절에 의해 구별될 수 있습니다. 포자는 내산성이므로 염료로 염색하기 어렵습니다. 이것은 막의 높은 밀도, 그 안에 있는 낮은 농도의 자유수 및 포자의 높은 지질 함량으로 설명됩니다. 착색 준비 중 간단한 방법으로또는 Gram에 따르면 포자는 무색으로 남아 있습니다. (네거티브 착색).
모든 포자 착색 방법은 다음을 기반으로 합니다. 공통 원칙: 먼저 크롬, 염산, 황산, 초산, 암모니아, 가성소다, 과산화수소 등 다양한 물질로 포자를 에칭한 후 가열하면 포자가 있는 세포가 염색되고 마지막으로 세포질이 변색되어 추가로 염색된다. 대조 염료.
Müller가 수정한 Ziehl-Nielsen 방법.화염에 박테리아 얼룩을 고정하기 전에 일반적인 방법으로 준비합니다. 다음으로, 5% 크롬산 용액을 화염에 고정된 제제에 적용하고 냉각시킨다. 5~10분 후 물로 씻어냅니다. 준비는 여과지의 스트립으로 덮여 있고 종이는 Tsil의 카볼릭 푹신으로 충분히 적셔 있습니다. 증기가 나타날 때까지 준비물을 불에서 가열한 다음(끓지 않도록) 따로 보관하고 염료의 새 부분을 추가합니다. 이 절차는 7분 동안 수행됩니다. 염료는 증발하지만 종이는 마르지 않는 것이 중요합니다. 냉각 후 제거하고 준비물을 물로 씻고 여과지로 완전히 닦아냅니다. 이 처리의 결과, 포자가 있는 세포가 균일하게 염색됩니다.
또한, 세포(포자는 제외)의 세포질은 1% 염산 또는 황산 용액으로 15-30초 동안 처리하여 변색됩니다. 제제를 준비할 때 포자 새균 진균또는 새균 장간막 16-18초 동안 세포질을 변색시키는 것이 좋습니다(21에서 37-40까지 큰 소리로 측정). 이 시간을 초과하면 포자도 변색될 수 있습니다. 그런 다음 제제를 물로 세척하고 2분 동안 메틸렌 블루로 염색합니다.
색상은 대조적이며 밝은 빨간색 포자는 세포질의 파란색 배경에 대해 명확하게 두드러집니다.
Peshkov의 방법. Leffler의 메틸렌 블루를 화염에 고정된 제제에 붓고 끓여서 유리를 화염 위에 놓은 상태에서 15-20초 동안 끓입니다. 도말은 물로 세척하고 중성 적색의 0.5% 수용액으로 30초 동안 염색합니다. 다시 헹구고 건조시킨 다음 대물렌즈를 오일에 담가 준비물을 조사합니다. 포자는 파란색 또는 파란색으로, 세포질은 분홍색입니다.
분쟁 연구를 위해 편리한 물건이 될 수 있습니다. 새균 장간막또는 새균 진균 4일의 나이에.
박테리아 포자를 염색하기 위한 시약. 1. 탄수화물 푹신트실리아(3.2.1 참조).
2. 레플러의 메틸렌 블루(3 참조. 2. .1).
3. 메틸렌 블루의 포화 수용액.염료 2g과 증류수 100ml.
4. 크롬산, 5% 솔루션.
5. 소금(또는 황산, 1% 솔루션.
4. 미생물의 배양
4.1. 문화 매체
4.1.1. 배양 배지의 준비
고기-펩톤 국물(BCH).고기-펩톤 배지의 준비를 위해 고기 국물,잘게 썬 신선한 고기 500g을 50 ° C로 가열 된 수돗물 1 리터와 함께 법랑 팬에 붓고 실온에서 12 시간 또는 50-55 ° C에서 1 시간 동안 주입합니다. . 고기를 짜내고 추출물을 면직물로 여과하고 30 분 동안 끓여 콜로이드 단백질을 응고시키고 두 번 여과합니다 (첫 번째는 면직물로, 두 번째는 종이 필터를 통해). 여액에 물을 1L까지 넣고 플라스크에 붓고 면 마개로 막고 120℃에서 20분 동안 멸균한다(플라스크 마개는 종이 뚜껑으로 덮음).
고기 육수는 언제든지 배지를 준비하는 데 사용할 수 있습니다. 즉시 준비되면 고기 국물의 사전 살균이 필요하지 않습니다.
BCH를 준비하려면 고기 육수 1리터에 5-10g을 추가합니다. 펩톤(단백질 가수분해의 첫 번째 생성물) 배지의 열량을 증가시키고 5g 식탁용 소금삼투 활동을 생성합니다. 펩톤이 용해될 때까지 배지를 가열하면서 지속적으로 저어줍니다.
젖은 붉은 리트머스 종이가 파란색으로 변할 때까지 20% Na2CO3 용액을 추가하여 배지의 중성 또는 약알칼리성 반응을 설정합니다. 배지의 pH를 확인하기 위해 지시약을 사용하는 것이 편리합니다. 브로모티멜로우: 1-2 방울을 한 방울의 국물과 함께 도자기 컵에 섞습니다. 중성 배지에서 bromothymolblau는 병 녹색, 산성 배지에서 노란색, 알칼리성 배지에서 파란색입니다.
pH를 설정한 후 배지를 다시 5~10분간 끓인 후 배지의 반응이 변할 때 응고되는 단백질은 육즙을 맑게 하거나 단백질로 맑게 하지 않고 종이여과기로 여과한다. 이를 위해 신선한 달걀 흰자를 두 배의 물과 함께 때리고 50 ° C로 냉각 된 국물과 섞습니다. 혼합물을 끓이고 저열로 10분 동안 교반한 다음 여과한다. 투명한 고기-펩톤 국물을 시험관에 붓고 면마개로 막고 120°C에서 20분간 멸균합니다.
고기 펩톤 한천(MPA). 15-20g의 한천이 1리터의 MPB에 첨가됩니다. 배지는 한천이 용해될 때까지 가열되고(융점은 100°C, 응고는 40°C임), 배지의 약알칼리성 반응은 20% Na2CO3 용액으로 설정되고 깔때기를 통해 시험관(약 이후에 페트리 접시에 붓기 위해 컬럼에 10ml의 한천을 넣고 경사 한천을 얻기 위해 각각 5ml - 스톡).
한천을 쏟을 때 튜브의 가장자리는 건조한 상태를 유지해야 합니다. 그렇지 않으면 코르크가 유리에 달라붙을 것입니다. 배지가 있는 튜브를 오토클레이브에서 120°C에서 20분 동안 멸균합니다.
4.2. 살균 방법
살균 - 영양배지, 접시 등에 있는 미생물의 세포를 완전히 파괴하는 것입니다.
여러 살균 방법이 알려져 있습니다. 가열 살균이 더 일반적으로 사용됩니다.
4.2.1. 화염 또는 소성
백금 고리, 바늘, 주걱, 작은 금속 물체(가위, 란셋, 족집게) 및 유리 막대, 현미경 슬라이드, 커버 슬립 등은 사용 직전에 점화할 수 있습니다.
4.2.2. 건열 살균
그것은 전분, 분필과 같은 접시 및 건조 재료를 처리하는 데 사용됩니다. 이 경우 멸균된 대상물은 전기 건조 캐비닛에서 170°C에서 2시간 동안(필요한 온도가 설정되는 순간부터) 보관됩니다. 온도를 170 ° C 이상으로 높이는 것은 권장하지 않습니다. 면 플러그와 종이가 열화되기 시작합니다.
살균하기 전에 유리 제품을 면 마개로 닫고 종이로 싸십시오. 컵, 시험관, 피펫, 면모, 거즈 등은 종이에 싸거나 멸균 접시를 멸균 후 보관할 수있는 특수 케이스 및 케이스에 넣습니다.
살균이 끝나면 온도가 실온으로 떨어진 후에야 캐비닛이 열립니다. 그렇지 않으면 유리가 깨질 수 있습니다.
4.2.3. 흐르는 증기로 살균
흐르는 증기(100°C)는 건열로 인해 열화되는 물체 및 더 높은 온도를 견딜 수 없는 일부 영양 배지(탄수화물, MPF, 우유가 포함된 배지)를 처리하는 데 사용됩니다. 살균은 매일 3일 동안 Koch 보일러에서 30분 동안 수행됩니다. 이 살균을 분수.
100 ° C의 온도에서 30 분 동안 한 번 가열하면 영양 세포가 죽고 많은 미생물의 포자가 생존 할 수 있습니다. 이러한 가열 후, 매체는 24시간 동안 28-30°C의 자동 온도 조절 장치에 놓입니다. 첫 번째 가열 동안 보존된 포자는 식물 형태로 발아할 시간을 가지며, 이는 후속 가열 중에 죽습니다. 그런 다음 이 작업을 2번 더 반복합니다.
4.2.4. 압력 하에서 포화 증기로 살균
이것은 가장 빠르고 안정적인 멸균 방법이며 가장 오래 지속되는 포자를 죽입니다. 그것의 도움으로 대부분의 영양 배지와 접시가 살균됩니다.
포화 증기 처리는 밀폐 된 두꺼운 벽 보일러에서 수행됩니다. 압력솥.뚜껑이나 오토클레이브 측면에는 증기 배출 밸브, 압력 게이지 및 안전 밸브가 있습니다. 압력 게이지는 보일러 내부의 증기 압력이 정상보다 얼마나 높은지를 보여줍니다. 압력 한계를 초과할 때 폭발을 방지하기 위해 안전 밸브가 작동되어 증기가 방출됩니다.
물리적 대기의 압력 게이지 표시기는 특정 온도에 해당합니다.
120°C, 1기압의 압력으로 20분간 가열하여 안정적인 살균이 이루어집니다.
멸균은 다음과 같이 수행됩니다. 오토클레이브에 물을 붓고 멸균물을 넣고 오토클레이브 뚜껑을 잠그고 가열을 시작합니다. 밸브는 오토클레이브의 모든 공기가 수증기로 대체될 때까지 열려 있습니다. 증기가 연속적인 흐름으로 탭을 떠나기 시작하면 탭이 닫히고 오토클레이브의 증기 압력이 1기압이 되고 20-30분 동안 이 수준에서 유지됩니다. 그런 다음 가열이 중지되고 압력 게이지 바늘이 0이 될 때까지 기다렸다가 조심스럽게(조금씩) 꼭지를 열고 증기를 내보냅니다. 그런 다음 오토클레이브 뚜껑의 나사를 푸십시오. 압력이 떨어지기 전에 꼭지를 열면 멸균된 용기의 액체가 끓고 플러그가 밖으로 밀려 나옵니다.
오토클레이브는 증기가 흐르는 부분 멸균에도 사용됩니다. 이 경우, 증기가 자유롭게 배출되도록 뚜껑을 조이지 않습니다.
4.2.5. 저온살균
저온살균은 불완전 또는 부분 살균으로 65-80°C에서 각각 30-10분 동안 가열한 다음 10-11°C로 급속 냉각하는 것을 의미합니다. 우유, 맥주, 와인 및 기타 제품은 저온 살균됩니다.
재료 및 장비
BCH, 한천, 레드 리트머스, 브로모티몰블로우, 우물 또는 컵이 있는 도자기 접시, 유리 막대, 20% Na2CO3 용액, 랙에 있는 시험관(한천 붓기용), 깔때기, 면모, 페트리 접시, 1ml Mohr 피펫, 컵용 종이 피펫 랩, 250ml 플라스크, 거친 실.
5. 미생물의 순수 배양물의 계수 및 분리
5.1. 미생물 수를 계산하는 방법
5.1.1. 연속희석법과 함께 영양판법으로 토양내 미생물(CFU)의 수를 세는 것
토양은 미생물의 발달에 가장 유리한 환경입니다. 구성의 높은 이질성으로 인해 미생물의 수를 고려하여 평균토양 샘플.
먼저, 1ml의 물에 다양한 농도의 토양을 포함하는 현탁액을 (희석 방법으로) 준비합니다. 이를 위해 항아리 또는 가방에서 1g의 토양 샘플을 멸균 된 도자기 주걱 또는 알루미늄 티스푼으로 멸균 된 시계 유리에 가져 와서 시계 유리, 주걱, 숟가락을 버너의 화염에 타거나 적십니다. 알코올과 화상. 토양의 무게를 측정할 때 시계 유리를 다른 멸균 시계 유리로 덮으십시오.
무균 상태를 관찰하는 토양 샘플을 99ml의 멸균수와 함께 250ml 플라스크에 옮깁니다. 혼합물을 코르크를 적시지 않고 5분 동안 흔듭니다. 멸균 피펫을 사용하여 10-2g의 토양을 포함하는 현탁액 1ml를 취하여 멸균 수돗물 9ml가 든 시험관에 옮깁니다. 피펫은 가능한 한 많이 벽에서 세포를 헹구기 위해 테스트 튜브에서 물로 반복적으로 세척됩니다. 다른 멸균 피펫으로 플라스크에서 현탁액 1ml를 더 취하여 멸균 수돗물 99ml가 들어 있는 두 번째 플라스크에 넣습니다. 이 피펫은 첫 번째 경우와 동일한 방식으로 세척됩니다. 튜브와 두 번째 플라스크를 1분 동안 흔든다. 시험관의 토양 농도는 10-3g, 두 번째 플라스크는 -10-4g이 될 것이며, 같은 방식으로 두 번째 플라스크의 현탁액 1ml를 새로운 멸균 피펫으로 두 번째 시험관에 옮겨 담습니다. 9ml 및 99ml의 멸균 수돗물이 있는 세 번째 플라스크에 넣고 각각 1ml, 10-5 및 10-6g의 토양을 포함하는 새로운 현탁액을 준비합니다.
